攻毒第10周實驗進展匯報實驗1《禽白血病病毒斑點雜交方法的建立與初步應用》的修改。該文已被中國預防獸醫學報接收。實驗2禽白血病A亞群（RAV-1)病毒攻毒實驗第7-10周抗凝血淋巴細胞的分離和淋巴細胞RNA的提取。淋巴細胞RNA的反轉錄。1-10周淋巴細胞RNA和CDNA樣品-80度保存。1-10周血清樣品和紅細胞的-80度保存。實驗3：死亡雞(0918）的RT-PCR檢測0918（G88雞群）雞于攻毒后第55天死亡，該雞出現羽毛粗亂，精神萎靡，發育不良，腹部增大，腹部羽毛沾污等臨床癥狀。剖檢發現肝臟輕微腫大，脾臟萎縮，肌胃和腺胃嚴重腫大，胃黏膜脫落，肌胃和腺胃交接處乳頭消失，胃壁變薄，十二指腸出血等病變。取病死雞的心、肝、脾、腎、法氏囊和胸腺，常規處理后提取基因組DNA和總RNA。PCR檢測結果1：心基因組；2:肝基因組；3：脾基因組；4：腎基因組；5：胸腺基因組；6：法氏囊基因組；7：心CDNA；8：肝CDNA；9：脾CDNA；10：腎CDNA；11:胸腺CDNA；12：法氏囊CDNA123456789101112陽水0961死亡雞的PCR檢測編號為0961（G5雞群）的雞于攻毒后第65天死亡，該雞出現厭食、消瘦、虛弱、雞冠發皺、貧血等臨床癥狀。剖檢病變為肝臟嚴重充血并腫大，腺胃腫大，胃壁變薄，十二指腸和胰腺有散在出血點。取該雞的心、肝、脾、腎、胸腺、法氏囊提取基因組和總RNA，并進行PCR檢測。0919死亡雞的PCR檢測編號為0919雞（G88雞群）與攻毒后第69天死亡，該雞出現發育不良、精神沉郁、嘔吐、羽毛豎立、貧血等臨床癥狀。剖檢病變為肝臟嚴重充血，肝表面出現血管瘤，心胞出血，脾臟輕微腫大，腎臟腫大并出血，肺臟和胰腺均出現嚴重的充血現象。取該雞的心、肝、脾、腎、胸腺、法氏囊提取基因組和總RNA，并進行PCR檢測。0919死亡雞PCR檢測結果

123456789101112陽水1：心基因組；2:肝基因組；3：脾基因組；4：腎基因組；5：胸腺基因組；6：法氏囊基因組；7：心CDNA；8：肝CDNA；9：脾CDNA；10：腎CDNA；11:胸腺CDNA；12：法氏囊CDNA0968死亡雞的PCR檢測結果編號為0968(G5雞群)的雞攻毒后第72天死亡，該雞出現身體消瘦，精神沉郁，嘔吐，羽毛粗亂，雞冠泛白等臨床癥狀。剖檢病變為肝臟嚴重充血，肝小葉尖端出現深黃色區域，十二指腸嚴重充血并發黑，腎臟腫大。取該雞的心、肝、脾、腎、胸腺、法氏囊提取基因組和總RNA，并進行PCR檢測。0968死亡雞PCR檢測

123456789101112陽水1：肝基因組；2:心基因組；3：脾基因組；4：腎基因組；5：胸腺基因組；6：法氏囊基因組；7：肝CDNA；8：心CDNA；9：脾CDNA；10：腎CDNA；11:胸腺CDNA；12：法氏囊CDNA死亡雞各組織中RAV-1的PCR統計表雞群編號天數心肝脾腎胸腺法氏囊心CDNA肝CDNA脾CDNA腎CDNA胸腺CDNA法氏囊CDNAG2092518------++----G5097132-+-----+++-+G88091855-+---+++++-+G88091969++-+-+++++-+G5096165-+---+++++++G5096872++-+--++++++G88099540------------小結從上述PCR統計表可以看出，試驗在RAV-1攻擊后的第18天即可檢測出病毒，直到攻毒后第72天。在對組織中病毒的檢測發現，肝臟是病毒檢出率最高的器官，其次是心臟和法氏囊，然后是腎臟，而在脾臟和胸腺中的檢出率很低。實驗5：RAV-1攻毒實驗第1-9周各雞群體重的統計學分析實驗6:RAV-1攻毒實驗第1-9周各雞群抗體的消長變化二重熒光定量PCR反應條件的優化及該檢測方法的建立小結經過對退火溫度及各反應組分濃度的優化，最后確定二重熒光定量PCR的反應條件和反應體系如下：最佳反應條件：預變性95℃3min，變性95℃15s，退火61.3℃50s。40個PCR循環。最佳反應體系：反應體系為25ul，其中10×ExBuffer2.5ul，dNTP（2.5nmol/ul）2μL、HsExTaq酶0.5μL、上下游引物（10pmol/ul)各1μL、探針（10pmol/ul)各1μL,重組質粒模板各1μL，雙蒸水加至25μL.RAV-1攻毒后第1-4周淋巴細胞CDNA樣品的熒光定量PCR檢測RAV-1攻毒后第1-10周各雞群死亡率的統計表雞群個體總數死亡個體數死亡率%