替米考星對(duì)豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌病的治療效果

替米考星是泰樂(lè)菌素的合成衍生物。這是一種含有泰樂(lè)菌素的新領(lǐng)域磺類動(dòng)物。它具有與泰樂(lè)菌素相似的結(jié)構(gòu)和抗菌譜。國(guó)內(nèi)外研究均表明,替米考星對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌及某些陰性菌、支原體、螺旋體等均有良好的抑制作用,對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及支原體具有比泰樂(lè)菌素更強(qiáng)的抗菌活性。由于其具有特殊的抗菌活性和藥物動(dòng)力學(xué)特征,在國(guó)外已被廣泛應(yīng)用于畜禽感染性疾病,特別是呼吸道疾病和乳房炎的預(yù)防與治療。近年來(lái)國(guó)內(nèi)已成功的開(kāi)發(fā)并研制出了國(guó)產(chǎn)替米考星。通過(guò)抑菌試驗(yàn)和藥代學(xué)試驗(yàn)證實(shí)該藥與國(guó)外產(chǎn)品效果相當(dāng)。為進(jìn)一步研究國(guó)產(chǎn)替米考星拌料給藥對(duì)人工感染胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)的治療效果,為臨床使用提供依據(jù),我們?cè)跀嗄套胸i上進(jìn)行了下面的試驗(yàn),現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。1材料和方法1.1試驗(yàn)藥物1.1.1試驗(yàn)藥物磷酸替米考星,純度85.47%,白色晶體,味苦,易溶于水,浙江海正藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供。1.1.2標(biāo)準(zhǔn)藥物土霉素粉劑,含量為100%,浙江海寧權(quán)力制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)20031107。1.2豬面膜肺炎疫苗健康約克夏×內(nèi)江雜種斷奶仔豬(30日齡)67頭,雌性34頭,雄性33頭,體重6kg～7kg,均未去勢(shì),未曾接種豬胸膜肺炎放線桿菌疫苗,甘肅省渭源縣牲畜交易中心購(gòu)入。試驗(yàn)前進(jìn)行健康觀察7d。1.3玉米小米粉參照家畜營(yíng)養(yǎng)需求標(biāo)準(zhǔn)配制不含任何抗菌藥物的基礎(chǔ)日糧(玉米60kg、麩皮30kg、黑面9.3kg、食鹽0.5kg、多種維生素0.2kg)。分別在基礎(chǔ)日糧中加入不同量的試驗(yàn)藥物作為試驗(yàn)各組日糧。1.4細(xì)菌和血清豬胸膜肺炎放線桿菌地方毒株及診斷血清,中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供。1.5培養(yǎng)基豬胸膜肺炎放線桿菌專用培養(yǎng)基(APP培養(yǎng)基)。1.6測(cè)試方法1.6.1面膜肺炎放線桿菌分離從試驗(yàn)豬中隨機(jī)抽取10頭,逐頭鼻黏膜采樣,進(jìn)行胸膜肺炎放線桿菌分離,并用標(biāo)準(zhǔn)血清做玻片凝集反應(yīng),以確認(rèn)試驗(yàn)豬有無(wú)胸膜肺炎放線桿菌感染。1.6.2兩組治療方案試驗(yàn)前每頭豬稱重并按雌雄、體重均衡搭配,分成6個(gè)組,每組10頭。第1組～第6組依次為健康對(duì)照組、感染對(duì)照組、替米考星低劑量治療組(100mg/kg飼料)、替米考星中劑量治療組(200mg/kg飼料)、替米考星高劑量治療組(400mg/kg飼料)、土霉素藥物治療對(duì)照組(600mg/kg飼料)。試驗(yàn)各組給藥及處理情況見(jiàn)表1。1.6.3觀察指標(biāo)及血清學(xué)鑒定取健康豬7頭隨機(jī)分為3個(gè)組,用不同菌數(shù)的豬胸膜肺炎放線桿菌菌液分別滴鼻接種各組豬,接種后觀察記錄各組豬臨床表現(xiàn),如精神狀態(tài),食欲,呼吸等變化及死亡時(shí)間等情況,連續(xù)觀察7d,對(duì)死亡豬剖檢并取肺、肝臟涂APP瓊脂平皿檢查是否有豬胸膜肺炎放線桿菌,同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)血清進(jìn)行血清學(xué)鑒定。最后根據(jù)每組豬發(fā)病及死亡情況,綜合確定最小致死量。1.6.4養(yǎng)基、母種的培養(yǎng)取凍干菌種開(kāi)啟后,接種于APP液體培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)18h涂片鏡檢純后,接種APP斜面培養(yǎng)基置37℃溫箱中培養(yǎng)18h后取出,作為母種置4℃冰箱中備用。攻毒前從斜面保存的母種挑取1環(huán)～2環(huán)耳圈,接種APP液體培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)18h涂片鏡檢純粹后,接種瓶裝APP液體培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)18h后,將菌液用APP液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋,平皿計(jì)數(shù),根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果決定攻菌量。1.6.5飼養(yǎng)水解壓監(jiān)測(cè)第2組～第6組豬用豬胸膜肺炎放線桿菌菌液(含菌量為6.9×108cfu/mL)滴鼻接種5mL/頭,第1組滴鼻接種生理鹽水5mL/頭。接種后隨時(shí)觀察,當(dāng)部分豬出現(xiàn)體溫輕微升高,氣喘,精神稍沉郁時(shí),即給第3組～第5組豬開(kāi)始分別飼喂加有替米考星100,200,400mg/kg的飼料;第6組供給加有土霉素600mg/kg的飼料。第1組和第2組豬飼喂不含任何藥物的基礎(chǔ)日糧。連續(xù)飼喂7d后停止飼喂含藥飼料,改飼喂基礎(chǔ)日糧飼料,繼續(xù)觀察至第15天。1.7發(fā)病豬的形態(tài)觀察人工感染后觀察每頭豬的臨床表現(xiàn),如精神狀態(tài),食欲,呼吸等變化情況。稱重并記錄試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)每頭豬的體重。記錄各組豬的發(fā)病數(shù)及死亡數(shù)。對(duì)死豬進(jìn)行尸體剖檢,觀察肺、肝、脾、心臟、腸系膜等的變化。對(duì)所有死亡豬及試驗(yàn)結(jié)束后宰殺豬取肝、脾涂APP瓊脂平皿培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)20h～48h,檢查是否有細(xì)菌生長(zhǎng),對(duì)檢出細(xì)菌,觀察菌落形態(tài),挑取典型菌落進(jìn)行涂片鏡檢,以檢查是否為豬胸膜肺炎放線桿菌。1.8評(píng)估和評(píng)估績(jī)效1.8.1豬面膜肺炎放線桿菌感染死亡鑒定人工感染后豬出現(xiàn)典型的胸膜肺炎癥狀并死亡,取肝、脾涂APP瓊脂平皿培養(yǎng)基分離出豬胸膜肺炎放線桿菌,即判定為感染死亡。各組死亡豬頭數(shù)比各組豬總頭數(shù)即為死亡率。1.8.2現(xiàn)臨床癥的判定試驗(yàn)豬人工感染后未出現(xiàn)臨床癥狀或出現(xiàn)臨床癥,但治療后耐過(guò)而未死亡的,亦判定為有效。試驗(yàn)結(jié)束后每組存活豬頭數(shù)占每組豬總頭數(shù)的比例即為有效率。1.8.3復(fù)興率計(jì)算試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)每組豬的平均體重,以健康對(duì)照組的增重率為100%,計(jì)算其它各組豬的相對(duì)增重率。1.8.4數(shù)據(jù)分析和處理根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果用計(jì)算機(jī)統(tǒng)計(jì)軟件(SPSS8.0)計(jì)算各組豬死亡率、有效率和相對(duì)增重率之間的差異顯著性。2結(jié)果2.1計(jì)算的最小致死量最小致死量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。2.2急性死亡豬5h剖檢變化仔豬接種后8h左右,各組豬特別是感染對(duì)照組部分豬,開(kāi)始出現(xiàn)體溫輕微升高,精神沉郁,至36h出現(xiàn)呼吸急促,體溫升高,站立不穩(wěn),不食或犬坐式,嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn),張口伸舌,口吐血沫,最后倒地死亡。對(duì)急性死亡豬(50h)剖檢主要表現(xiàn)為,肝臟充血,呈暗紅色并有灰白色結(jié)節(jié),脾腫大、柔軟、暗黑色,胸腔、心包出現(xiàn)紅色滲出液,兩側(cè)或一側(cè)肺氣腫充血,呈紫紅色,切面似肝,并有纖維素性物質(zhì)附于表面,有些有黃色滲出液。部分豬腸系膜淋巴結(jié)腫大,充血嚴(yán)重,呈紫紅色。對(duì)慢性死亡豬(74h以上)剖檢主要表現(xiàn)為,雙側(cè)或一側(cè)肺出現(xiàn)硬實(shí)的肺炎區(qū),表面有結(jié)締組織化的粘連性附著物,肺炎病灶呈壞死性或化膿性,肝略腫大,表面有壞死點(diǎn),腸系膜淋巴結(jié)輕度腫大,出血,呈暗紅色。取肺、肝、脾涂APP瓊脂平皿分離到大量豬胸膜肺炎放線桿菌。2.3豬瞳肺炎放線桿菌感染對(duì)照組豬剖檢變化從臨床表現(xiàn)看,4個(gè)組給藥的豬在接種后發(fā)病豬的數(shù)量明顯比感染對(duì)照組的少,出現(xiàn)咳嗽氣喘等癥狀,均明顯的遲于感染對(duì)照組,死亡豬統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,試驗(yàn)4個(gè)組的豬死亡時(shí)間明顯遲于感染對(duì)照組。病死豬剖檢可見(jiàn),病理變化與感染對(duì)照組豬基本類似,但病理?yè)p害程度較感染對(duì)照組輕,取肺、肝脾涂平皿均檢出豬胸膜肺炎放線桿菌。詳見(jiàn)表4～表6。試驗(yàn)結(jié)束后撲殺各組試驗(yàn)豬,剖檢發(fā)現(xiàn)感染對(duì)照組1頭豬出現(xiàn)一側(cè)肺結(jié)締組織化、輕微壞死,肺臟與胸腔壁粘連,肝臟略大,取肺、肝脾涂平皿檢出少量豬胸膜肺炎放線桿菌,表明該存活豬為慢性感染,體內(nèi)帶菌,具有傳染性,該豬后期生長(zhǎng)發(fā)育不好。試驗(yàn)4個(gè)組及健康對(duì)照組豬,撲殺后剖檢,各臟器均未見(jiàn)任何病理變化,取肺、肝脾涂平皿均未檢出任何細(xì)菌(表5)。3替米考星的臨床治療效果3.1豬傳染性胸膜肺炎(porcinecontagiouspeuropneumoniae),又稱豬副溶血嗜血桿菌病,病原體為胸膜肺炎放線桿菌,該病現(xiàn)在幾乎遍布所有的養(yǎng)豬國(guó)家。我國(guó)從1988年確定有該病流行,并陸續(xù)有疫苗研究報(bào)道。豬胸膜肺炎放線桿菌對(duì)大多數(shù)常用藥物不敏感,據(jù)報(bào)道只有丁胺卡那霉素、羧芐青霉素等幾種藥物對(duì)其高度敏感。近年來(lái)該病的發(fā)生呈上升趨勢(shì),已成為規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的五大疫病之一,發(fā)病率和死亡率分別在8.5%～100%和0.4%～100%之間,嚴(yán)重地威脅著規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)的安全及產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程。替米考星具有廣譜的抑菌活性,據(jù)我們?cè)囼?yàn)結(jié)果和國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道,對(duì)豬胸膜肺炎放線桿菌的MIC為2μg/mL～4μg/mL。美國(guó)和歐洲一些國(guó)家已應(yīng)用替米考星200mg/kg～400mg/kg料拌料給藥預(yù)防和治療由豬胸膜肺炎放線桿菌和多殺性巴氏桿菌引起的豬肺炎并取得良好效果,本試驗(yàn)結(jié)果亦證實(shí)了這一點(diǎn)。國(guó)產(chǎn)替米考星的研制成功,將為預(yù)防和治療該病的發(fā)生,促進(jìn)我國(guó)規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展發(fā)揮重要的作用。3.2替米考星拌料給藥治療試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,替米考星高、中劑量組的發(fā)病率及死亡率均極顯著的低于感染對(duì)照組(P<0.01);有效率極顯著的高于感染對(duì)照組(P<0.01)。替米考星高、中劑量組有效率均顯著高于替米考星低劑量組及土霉素組(P<0.01)。但替米考星高、中劑量組的死亡率、有效率之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。表明國(guó)產(chǎn)替米考星拌料給藥對(duì)治療人工感染豬胸膜肺炎放線桿菌具有明顯的效果,可降低死亡率,提高成活率,減少人工感染引起的病理?yè)p傷。作為臨床治療推薦劑量為200mg/kg飼料,連用7d。3.3替米考星拌料飼喂增重效果統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,替米考星高、中劑量組的增重效果均顯著高于健康及感染對(duì)照組(P<0.01)。替米考星高劑量組的增重效果顯著高于土霉素組(P<0.05),但替米考星高、中、低劑量組三者之間的增重率無(wú)顯著差異(P>0.05),這表明替米考星拌料給藥除具有治療效果外,還對(duì)仔豬具有明顯的增重效果,而且增重效果與替米考星在飼料中的添加劑量成正比。3.4臨床癥狀觀察、病理剖檢及細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果表明,4個(gè)試驗(yàn)組的豬在接種后出現(xiàn)明顯臨床癥狀的豬數(shù)量明顯的比感染對(duì)照組的少,臨床癥狀發(fā)展進(jìn)程,均明顯的比感染對(duì)照組緩慢。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,4個(gè)試驗(yàn)組的豬死亡時(shí)間均明顯遲于感染對(duì)照組。病死豬剖檢可見(jiàn),病理變化與感染對(duì)照組豬基本類似,但病理?yè)p害程度較感染對(duì)照組輕,所有死亡豬取肺、肝脾涂平皿均檢出豬胸膜肺炎放線桿菌。對(duì)試驗(yàn)結(jié)束后存活豬剖檢結(jié)果表明,感染對(duì)照組1頭存活豬出現(xiàn)一側(cè)肺結(jié)締組織化壞死,肝臟略大,腸系膜淋巴結(jié)輕微腫大,取肺、肝脾涂平皿檢出少量豬胸膜肺炎放線桿菌,表明慢性感染豬,體內(nèi)帶菌,且具有傳染性。但4個(gè)試驗(yàn)組及健康對(duì)照組豬,撲殺后剖檢,各臟器均未見(jiàn)任何病理變化,取肺、肝脾涂平皿均未檢出任何細(xì)菌。結(jié)果表明,替