實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的沉淀與變性1、了解使蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素。2、了解蛋白質(zhì)的可逆沉淀反應(yīng)和不可逆沉淀反應(yīng)。3、掌握蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)、變性作用的原理及它們的相互關(guān)系。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康木S持蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定的因素：水化膜同種電荷外面的親水基團(tuán)結(jié)合一層水，形成水化膜同種蛋白質(zhì)表面帶有相同電荷二、實(shí)驗(yàn)原理破壞水化膜中和電荷使蛋白質(zhì)沉淀的原理聚集體的直徑＞100nm即為不穩(wěn)定的粗分散系（1）鹽析（2）有機(jī)試劑（3）重金屬鹽（4）有機(jī)酸（5）加熱

…………使蛋白質(zhì)沉淀的方法蛋白質(zhì)沉淀變性的常見(jiàn)方法

常用方法原理常用試劑實(shí)用鹽析破壞蛋白質(zhì)膠體溶液的水化層和電荷層(NH4)2S04、Na2S04、Na3P04、NaCl、MgS04常用此法來(lái)分離和純化蛋白質(zhì)。有機(jī)試劑鹽析脫水作用；降低水的介電常數(shù)和蛋白質(zhì)溶解度；蛋白質(zhì)析出乙醇、丙酮、甲醇低溫乙醇提取血液中的蛋白質(zhì)組分強(qiáng)酸、強(qiáng)堿沉淀破壞蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生蛋白質(zhì)變性鹽酸,硫酸,硝酸、氫氧化鈉

滅活病毒加熱變性雞蛋、肉類等加工重金屬鹽沉淀變性；生成不溶性鹽Ag+，Hg2+，Cu2+和Pb2+臨床上常用蛋清或牛乳解救誤服重金屬鹽的病人有機(jī)酸沉淀生成不溶性鹽苦味酸、鞣酸、三氯醋酸、磺基水楊酸等生物堿試劑沉淀蛋白濾液等蛋白質(zhì)沉淀分類（1）可逆沉淀反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)并未發(fā)生顯著變化，基本保持原有的性質(zhì)，沉淀因素除去后，能溶于原來(lái)的溶劑中。例如：鹽析、乙醇低溫短時(shí)作用，可用于蛋白質(zhì)提純。（2）不可逆沉淀反應(yīng)：蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象遭到破壞，失去原來(lái)的天然性質(zhì)，不再溶于原溶劑。例如：加熱、有機(jī)酸反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子表面水化膜同種電荷穩(wěn)定的親水膠脫水，失去電荷沉淀反應(yīng)可逆沉淀反應(yīng)（不變性沉淀反應(yīng)）如：鹽析作用…不可逆沉淀反應(yīng)（變性沉淀反應(yīng)）如：重金屬鹽沉淀作用…蛋白質(zhì)溶液：取10mL鮮雞蛋清，用蒸餾水稀釋至200ml，攪拌后用2-3層紗布過(guò)濾，新鮮配制。加入少量氯化鈉可加速溶解球蛋白。

試劑：飽和硫酸銨溶液，硫酸銨粉，95%乙醇，2%硝酸銀，0.5%乙酸鉛，1%硫酸銅，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水楊酸。1.試劑三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑漏斗,濾紙,吸管,試管及試管架,量筒、離心機(jī)等。2.儀器1.蛋白質(zhì)的可逆反應(yīng)——鹽析步驟現(xiàn)象解釋結(jié)論取試管1，加入3mL蛋白質(zhì)氯化鈉溶液和等量的飽和硫酸銨溶液，混勻，靜置10分鐘觀察有無(wú)蛋白質(zhì)（球蛋白）的沉淀倒出上清液于試管2，取試管1中沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解往試管2中，加入硫酸銨粉末，邊加邊用玻璃棒攪拌，直至粉末不再溶解，直至飽和觀察有無(wú)沉淀（清蛋白）析出靜置，棄去上清液，取出部分清蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解四、實(shí)驗(yàn)操作2.蛋白質(zhì)的可逆反應(yīng)——乙醇步驟現(xiàn)象解釋結(jié)論取試管1，加入1mL蛋白質(zhì)氯化鈉溶液和21mL95%乙醇觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀靜置，棄去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解試管操作現(xiàn)象操作現(xiàn)象試管1①1mL蛋白質(zhì)溶液②3-4滴2%硝酸銀溶液③過(guò)量的硝酸銀

觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀

棄去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解試管

2①1mL蛋白質(zhì)溶液②1-3滴0.5%乙酸鉛③過(guò)量的乙酸鉛觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀?xiàng)壢ド锨逡海〕霾糠值鞍壮恋恚由倭空麴s水觀察沉淀的再溶解試管

3①1mL蛋白質(zhì)溶液②3-4滴1%硫酸銅③過(guò)量的硫酸銅

觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀?xiàng)壢ド锨逡海〕霾糠值鞍壮恋恚由倭空麴s水觀察沉淀的再溶解3.蛋白質(zhì)的不可逆反應(yīng)——重金屬鹽（3支試管）試管操作現(xiàn)象操作現(xiàn)象試管1①1mL蛋白質(zhì)溶液②3滴10%三氯乙酸溶液觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀

棄去上清液，取出部分蛋白沉淀，加少量蒸餾水觀察沉淀的再溶解試管

2①1mL蛋白質(zhì)溶液②3滴5%磺基水楊酸觀察有無(wú)蛋白質(zhì)的沉淀?xiàng)壢ド锨逡海〕霾糠值鞍壮恋恚由倭空麴s水觀察沉淀的再溶解4.蛋白質(zhì)的不可逆反應(yīng)——有機(jī)酸（2支試管）五、結(jié)果與分析列出