添加酸化劑、益生素和寡糖對斷奶仔豬免疫功能的影響

磺酸、益生素和準糖具有調節動物腸道微生物平衡、傳播有機菌、抑制有害菌、降低腸道ph、提高胃腸道酶活性、提高養分消耗率和增加動物身體的競爭力的作用和功能。但以往的試驗研究多集中在單一物質的效果研究上:寧康健等報道,在肉雞日糧中添加檸檬酸可使其增重提高6.1%,成活率提高8.6%,雞新城疫抗體效價提高1倍以上;Pollman等報道,給無菌仔豬口服嗜酸乳桿菌可引起白細胞和血清總蛋白(主要是球蛋白)濃度的提高;周紅麗等報道,在斷奶仔豬日糧中添加0.1%的微生物來源的甘露寡糖能極顯著提高仔豬的日增重和血清中IgG水平。目前很少有研究酸化劑、益生素、寡糖在相同條件下的效果比較以及它們之間兩兩或三者同時添加的試驗效應。因此,本試驗旨在比較相同條件下酸化劑、益生素、寡糖對斷奶仔豬糞中微生物菌群以及免疫功能的影響,并探討它們之間是否存在互作效應。1材料和方法1.1復合飲料設計采用三因素兩水平(2×2×2)試驗設計,共8個處理:酸化劑水平為0%、0.3%;益生素水平為0%、0.15%;寡糖水平為0%、0.1%。試驗設計見表1。1.2芽胞桿菌的培養酸化劑選用乳酸寶(復合酸化劑),美國建明公司生產;益生素選用芽胞桿菌,四川農業大學微生態研究中心生產;寡糖選用果寡糖,廣東溢多利公司生產。1.3保養豬不同干預選用平均30日齡斷奶的長白×長白×太湖健康仔豬32頭,預飼1周,隨機分配到8個處理,每個處理4個重復,每個重復1頭豬。試驗期4周。1.4日糧營養水平計算選用玉米-豆粕型基礎日糧,營養需要參照NRC(1998)《豬的營養需要》回腸表觀可消化氨基酸模式,分1~2周和3~4周配制,飼料為粉料。日糧組成及營養水平見表2。1)每kg日糧含VA5600IU;VD31100IU;VK35mg;VB11mg;VB215mg;VB66mg;VB1230mg;煙酸35mg;泛酸鈣25mg。2)主要成分是淀粉酶、蛋白酶、糖化酶、脂肪酶、纖維素酶、β-葡聚糖酶、果膠酶等。3)1~2周每kg試驗日糧含Cu250mg;Fe200mg;Zn200mg;Mn60mg;Se0.3mg;I0.4mg;3~4周每kg試驗日糧含Cu150mg;Fe130mg;Zn130mg;Mn10mg;Se0.3mg;I0.4mg。4)添加劑為試驗各處理添加的酸化劑、益生素和寡糖,不足的部分用玉米補足。5)日糧營養水平值為計算值。1)Providedperkgofdiet:VA5600IU;VD31100IU;VK35mg;VB11mg;VB215mg;VB66mg;VB1230mg;Niacin35mg;Calciumpantothenic25mg.2)TheMulti-enzymecomplexincludesamylase,protease,lipase,cellulase,β-glucanase,andpectinaseetal.3)Provideperkgofdiet:thestageof1~2week,Cu250mg;Fe200mg;Zn200mg;Mn60mg;Se0.3mg;I0.4mg;thestageof3~4week,Cu150mg;Fe130mg;Zn130mg;Mn10mg;Se0.3mg;I0.4mg.4)Theadditivesareacidifier,probiotics,andoligosaccharides,thecornwascomplemented.5)Thenutrientlevelsofdietarecalculatedvalues.1.5溫室532試驗在四川農業大學動物營養研究所實驗場進行,籠養,室溫25~28℃;采用粉料拌濕飼喂,飼喂時間在每天8:00、12:00、16:00和20:00,每次飼喂直至料槽內留有少許余料為止,自由飲水。常規管理。1.6測量指標1.6.1糞便中微生物群的測定在試驗的第21天早上收取每頭仔豬排出的新鮮糞樣少許(不低于0.5g),用無菌塑料袋封裝,采用平板涂布法進行細菌計數。1.6.2血清ig、尿素氮檢測血液的收集及處理:試驗結束(第29天)早上8:00,每頭豬前腔靜脈采血10mL,血樣分兩份,一份放入冰盒中30min后離心制血清用于測定免疫球蛋白(Ig)和血清尿素氮(SUN);另一份制全血用來測淋巴細胞轉化率,采血后在無菌條件下立即向制全血的血樣中加入1640培養液,防止細胞死亡。(1)血清igg、igm和iga的測定通過測定血清中IgG、IgM、IgA來反映體液免疫水平,用免疫透射比濁法試劑盒結合全自動生化分析儀測定。(2)學檢測法測定轉化率用淋巴細胞轉化率來反映細胞免疫水平。采用形態學檢測法,并計算其轉化率。淋巴細胞轉化率=轉化的淋巴細胞數(過渡型細胞+母細胞)/淋巴細胞總數(轉化型、過渡型及未轉化型)1.7處理數據用SAS統計軟件對試驗結果進行析因分析,結果用最小二乘均數加減平均標準誤(LSM±SEM)表示。2結果2.1承擔向高校腸道桿菌表達的是菌株數量的檢測從表3可以看出,單獨添加酸化劑、益生素、寡糖提高斷奶仔豬糞便中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量,降低大腸桿菌的數量(P>0.05),只有單獨添加酸化劑提高乳酸桿菌數量達到顯著水平(P<0.05),酸化劑、益生素、寡糖兩兩或三者合用雖較對照組提高乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量,降低大腸桿菌的數量,但不如單獨添加的效果明顯,析因分析表明,添加酸化劑降低糞便中大腸桿菌數量的效應最明顯(P=0.0978),但相互之間沒有體現出互作效應。SHJ、YSS、GT分別表示酸化劑、益生素和寡糖;同列肩標小寫字母相同者表示差異不顯著(P>0.05),同列肩標小寫字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。下同。SHJ,YSS,GTrepresentacidifier,probiotics,andoligosaccharides;ineachrow,valueswiththesamesmallsuperscriptsarenotsignificantlydifferent(P>0.05),valueswithdifferentsmallsuperscriptsaresignificantlydifferent(P<0.05).Thesameasbelow.2.2酸化劑、益生素和準糖對斷奶仔豬的免疫功能的影響2.2.1藥物及其他益生素、寡糖對大鼠血清igg、iga水平的影響從表4可以看出,單獨添加酸化劑、益生素和寡糖組較對照組提高斷奶仔豬血液IgG水平17.15%(P>0.05)、19.25%(P>0.05)和51.46%(P<0.05)。酸化劑、益生素和寡糖合用較對照組顯著提高IgG水平(P<0.05)。益生素和酸化劑合用較單獨使用顯著提高IgG水平(P<0.05),寡糖與酸化劑或益生素合用較單獨使用降低IgG水平(P>0.05)。析因分析表明,益生素顯著提高血液IgG水平(P<0.05);寡糖極顯著提高血液IgG水平(P<0.01);酸化劑和益生素對提高斷奶仔豬血液IgG水平具有顯著的互作效應(P<0.05)。酸化劑、益生素、寡糖單獨或合用對斷奶仔豬血清IgM水平有提高的趨勢,但未達到顯著水平(P>0.05),相互之間也未體現出互作效應。單獨添加酸化劑或益生素對血清IgA水平沒有顯著影響(P>0.05),單獨添加寡糖顯著提高血清IgA水平(P<0.05)。酸化劑和益生素合用較單獨使用顯著提高血清IgA水平(P<0.05),但是寡糖與酸化劑或益生素合用較單獨使用顯著降低血清IgA水平(P<0.05)。析因分析表明,酸化劑和寡糖對血清IgA水平具有極顯著的交互效應(P<0.01),益生素和寡糖對血清IgA水平具有顯著的交互效應(P<0.05);酸化劑和益生素對提高IgA水平在接近10%的顯著水平體現出交互效應(P=0.1198)。2.2.2加益生素/寡糖由表4可知,單獨添加酸化劑降低仔豬淋巴細胞轉化率(P>0.05);單獨添加益生素或寡糖顯著提高淋巴細胞轉化率(P<0.05)。酸化劑、益生素和寡糖兩兩合用較其中一種物質單獨使用降低淋巴細胞轉化率,但差異不顯著(P>0.05),三者合用時淋巴細胞轉化率顯著高于對照組,較單獨添加有不同程度的提高。3討論3.1預防大鼠飼料轉化效率試驗結果酸化劑可通過降低胃腸道pH抑制有害微生物繁殖,減少營養物質的消耗和抗生長毒素的產生;同時促進乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益微生物的增殖,從而有利于仔豬的健康,提高日增重和飼料轉化效率。本試驗單獨添加酸化劑顯著提高乳酸桿菌的數量(P<0.05),對雙歧桿菌和大腸桿菌沒有顯著影響(P>0.05),與Roth等的試驗結果一致。酸化劑還能增強仔豬機體的免疫力,提高抗病能力,從而提高機體的健康狀況。本試驗添加酸化劑提高仔豬血清IgG、IgM和IgA水平,表明仔豬體液免疫水平得到提高。盡管淋巴細胞轉化率低于對照組,但差異不顯著(P>0.05),與張德成等報道的檸檬酸提高哺乳仔豬細胞免疫功能、寧康健等發現的檸檬酸提高肉雞體液免疫水平的報道相一致。3.2復合養老酶活劑最佳添加量的確定斷奶應激抑制仔豬胃腸道消化酶活性的增高、使仔豬免疫機能下降、胃腸道正常微生物區系失衡,綜合表現為仔豬腹瀉、抵抗力下降、生長發育受阻。芽孢桿菌可以在不利條件下形成芽孢,進入腸道后再復活發生作用,將淀粉轉化為單糖,再由腸道中其他菌種將這些單糖轉化為乳酸等有機酸,從而有利于乳酸菌等優勢菌群的生長繁殖,抑制大腸桿菌的增殖,維持微生態平衡。本試驗單獨添加益生素對乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌均沒有顯著影響(P>0.05),可能與本試驗所用益生素中芽胞桿菌的數量、活性等有關。本試驗單獨添加益生素提高血清IgG、IgM和IgA的水平(P>0.05),顯著提高淋巴細胞轉化率(P<0.05),這與吳石金等在北京鴨上的研究結果一致。其機理可能是益生素中的有益微生物菌群在體內的活動大大地改善了機體有益菌生長的內環境,各種有益微生物在代謝過程中同時產生大量的生理活性物質,如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等,增強了機體的生理機能,從而提高體液免疫和細胞免疫的水平。3.3寡糖對臟器腸道微生物的影響本試驗單獨添加寡糖提高糞中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量,分別比對照組提高8.14%和4.64%(P>0.05),同時降低大腸桿菌的數量(P>0.05),這與很多研究一致。不同低聚糖對仔豬消化道的微生物都有調節作用,但Gabert和Mathew研究表明,添加寡糖后,糞中大腸桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌均未受影響。本試驗單獨添加寡糖顯著提高斷奶仔豬血清IgG、IgA和淋巴細胞轉化率(P<0.05),分別比對照組提高51.46%、26.67%和16.30%;也提高IgM水平,但差異不顯著(P>0.05)。與李梅等在仔豬和邵良平等在肉雞中的研究結果一致。寡糖對動物的作用,主要是通過促進動物后段腸道有益菌特別是雙歧桿菌的增殖,從而增強機體的免疫功能。3.4免疫蛋白指標互作效應:通過物質間互作,提高血液免疫經營水平,使所有物質互作近年來,有關酸化劑、益生素和寡糖合用的研究報道尚不多見。最近發展起來的合生劑是指益生菌和寡糖的混合制劑,可以提高有益菌的存活率,發揮兩者的聯合效應。本試驗酸化劑、益生素和寡糖合用都較對照組提高乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量,降低大腸桿菌的數量,提高血液免疫球蛋白特別是IgG含量。酸化劑、益生素和寡糖合用在一些指標上優于單獨添加組,體現出一定的互作效應。酸化劑和益生素對提高血清IgG具有顯著的互作效應(P<0.05)。酸化劑、益生素和寡糖合用在某些指標上未能體現出互作效應或者體現負效應,如酸化劑和寡糖對1~2周和3~4周血清IgG(P=0.0719)、IgA(P<0.05)體現出一定的互作效應;益生素和寡糖對IgG(P=0.0947)、IgA(P<0.05)具有互作效應,表現為合用較寡糖單獨使用降低,可能與它們的水平組合、試驗的測定誤差等因素有關。眾所周知,物質之間互作效應的體現與各種物質的水平組合密切相關。本次試驗由于試驗規模較小,酸化劑、益生素和寡糖的添加水平可能導致它們之間的相互作用不能很好地體現。4氧化酶抑制劑、益生素、寡糖兩制備成