大櫻桃矮化砧木吉塞拉6號離體再生體系構建研究限）目錄27948目錄 39999摘要 589981.緒論 620011.1文獻綜述 631801.2研究內容 7282742.材料與方法 786562.1實驗材料 7165342.1.1外植體品種 7107702.1.2藥品藥劑 827942.2試驗方法 811332.2.1吉塞拉6號外植體的消毒方法 8102262.2.2無菌操作流程 883612.2.3蔗糖對污染率影響的處理 847072.2.4莖尖和莖段的誘導處理 8226642.2.5莖尖和莖段的增殖處理 9264462.2.6吉塞拉生根的處理 9158172.2.7吉塞拉愈傷組織誘導處理 9324222.2.8瓊脂濃度對愈傷組織誘導處理 10187092.2.9葉片放置方式對愈傷組織誘導處理 10299232.2.10葉片不同部位對愈傷組織誘導處理 11311283.結果與分析 1158403.1蔗糖對外植體污染的影響 11128163.2莖尖和莖段的誘導處理 11268283.3莖尖和莖段的增殖研究 12183213.3.1基本培養基為MS培養基時矮化砧木Gisela6的增殖研究 1233303.3.2基本培養基為WPM培養基時矮化砧木Gisela6的增殖研究 13103363.4生根的結果與分析 14257323.5葉片愈傷組織的結果與分析 1593073.5.1TDZ與NAA組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響 157693.5.26-BA與NAA組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響 16234883.5.36-BA與2,4-D組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響 17178863.6瓊脂濃度對矮化砧木Gisela6愈傷組織誘導處理的結果與分析 18294753.7葉片放置方式對矮化砧木Gisela6愈傷組織誘導處理的結果與分析 1936823.8葉片不同部位對矮化砧木Gisela6愈傷組織誘導處理的結果與分析 19250044.討論 2036274.1蔗糖與外植體污染關系的分析 2054494.2不同激素組合對大櫻桃叢生芽增值率的影響 2069244.3離體葉片愈傷組織誘導分析 2013723結論 21摘要本文以大櫻桃優良矮化砧木吉塞拉6號（P.cerasus×P.canescens）為研究對象，利用植物組織培養技術進行了組培快繁技術的研究及再生體系的構建，旨在為脫毒快繁提供技術平臺，為大櫻桃矮化砧木種苗生產提供有效幫助。先在無糖固體培養基上觀察7天，然后轉接到含糖固體培養基上觀察7天，可將組培苗的污染情況控制最好。結果表明：MS培養基+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，對莖尖和莖段愈傷組織的誘導最好；當培養基為WPM培養基+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA時，加入濃度為6g/L的瓊脂，外植體選用葉基部，葉上表皮接觸固體培養基，對離體葉片愈傷組織的誘導最適合；WPM培養基+2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA，適合進行離體葉片愈傷組織的誘導；WPM培養基+1.0mg/L+6-BA+0.1mg/L的NAA，對莖尖和莖段的增殖最好；1/2WPM培養基+0.5mg/LIBA，生根最好。關鍵詞：大櫻桃矮化砧木愈傷組織最佳配方吉塞拉6號

ConstructionofinvitroregenerationsystemofCherryDwarfRootstockGisela6Abstract：ThispapertakestheexcellentCherryDwarfRootstockGiselaNo.6(P.cerasus*P.canescens)astheresearchobject,byusingthetechniqueofplanttissueculturefortheconstructionandstudyofregenerationsystemoftissueculturetechnology,aimstoprovideatechnicalplatformforvirus-freepropagation,provideeffectivehelpforseedlingproductionofdwarfcherryrootstocks.firstinthesugarfreemediumafter7days,andthentransferredtothemediumafter7daysofsugarsolidscanbebesttocontrolthepollutionsituationofplantlets;Theresultsshowthat:MSmedium+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA,thestemtipandstemcallusinducedbythebest;whenthemedium+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAAWPMmedium,addingconcentrationof6g/Lagar,explantselectionofleafbase,leafepidermalcontactsolidmedium,themostsuitableforcallusinductionfromleavesof+2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA;WPMmedium,suitableforinvitroleafcallus;WPMmedium+1.0mg/L+6-BA+0.1mg/LNAAandonthestemtipandstemsegmentsoftheproliferationofthebest1/2WPMmedium;+0.5mg/LIBA,thebestrooting.Keywords:Dwarfrootstockofcherry;callus;optimumformula;Gisela61.緒論大櫻桃（PrunusaviumL.）又被稱為車厘子和迎慶果，屬于薔薇科李亞科李屬櫻亞屬植物，是多年生喬木。最早產地為西亞及歐洲東部，于19世紀末20世紀初引入我國，成熟期僅次于中國櫻桃，被譽為“春果第一枝”[參考文獻[]寧景華,劉錫鎮,楊寶富,等.大櫻桃優質苗木繁育新技術[J].北方果樹,2015(06):18-21.參考文獻[]寧景華,劉錫鎮,楊寶富,等.大櫻桃優質苗木繁育新技術[J].北方果樹,2015(06):18-21.大櫻桃肉質鮮美、紅潤晶瑩、豐滿多汁、光滑圓潤，而且富含蛋白質、氨基酸、微量元素、維生素、抗壞血酸等物質，含鐵量居于水果之首，在水果中被稱為寶石水果；人們還常用櫻桃來形容美好的事物，是美的代名詞，也是愛情的象征；櫻桃全身都是寶，它的果實、葉片、枝條和根都有藥用功能，對多種疾病的治療都有效。多吃大櫻桃不僅可以增強人的免疫力、增智益腦，還可以美容養顏。在協調水果市場、均衡周年供應及豐富生活品質等方面有著獨一無二的作用。同時，櫻桃具有口感極佳、品質好、耐儲藏運輸等諸多優點，并且可以作為綠化樹木，美化環境。大櫻桃喜溫而不耐寒，適合栽植范圍小，而我國恰恰具備櫻桃生長所需要的環境條件；此外，大櫻桃管理簡單，生產周期短且不易染病，用藥少，易實現無公害生產，可減少投資成本，適合于我國現階段的經濟發展形式；由于大櫻桃的果實只能進行人工采收，是典型的勞動密集型產業，而中國人口眾多，占有極大的優勢，還可以為人們提供勞動崗位；與此同時，大櫻桃市場利潤高，適宜在多地栽培，可以增加當地農民的收入等。因此大櫻桃受到越來越多人的喜愛，在我國的發展蒸蒸日上，在果樹業中地位日漸重要，前景一片廣闊。1.1文獻綜述大櫻桃有多種傳統的繁殖與栽培方法。種子繁殖指從生長勢良好的母株上獲取完全成熟的種子進行播種，雖然具有投資成本低和繁殖數量大的優點，但是常常會出現發芽率低、種子胚發育不良等現象，所以一般不建議使用此方法；分株繁殖包括壓條繁殖和直接分株兩種途徑，優點是當年就可以出大苗、生根比較容易、繁殖系數高，但是出苗率較低、各品種的效果差別比較大，較少使用此方法；硬枝扦插和綠枝扦插是扦插繁殖的兩種方式，一般在春季進行硬枝扦插，6月到7月下旬進行綠枝扦插，雖然中國櫻桃適宜扦插生根，但大櫻桃采用扦插的方式進行繁殖時，不容易生根且生出根系較弱；由于大櫻桃枝條不定根的生長比較困難，因此對嫁接繁殖應用的比較多，使用最普遍成活率最高的嫁接方式包括帶木質芽接法、單芽腹接法和T導芽接法[[]孫世正,車學香,陳倩,等.大櫻桃苗“[]孫世正,車學香,陳倩,等.大櫻桃苗“炮捻法”快速繁殖技術[J].果樹實用技術與信息,2016(04):16-17.這些傳統的繁殖方式不僅僅表現在繁殖速度上需要的時間較長，更重要的是在繁殖過程中容易受到病毒的侵染如根瘤病毒的傳播，也易出現自交不親和的現象[[]包九零.貴州主栽大櫻桃的組培快繁及授粉品種篩選[D].貴州大學,2016.]。因此，采用常規的繁殖方式時，會造成后代果樹長勢參差不齊、果實個體差異大、果品不好、適應性差和抗逆性差等缺點[[]孫國利.不同基因型櫻桃植株再生體系的研究[D].東北農業大學,2009.[]包九零.貴州主栽大櫻桃的組培快繁及授粉品種篩選[D].貴州大學,2016.[]孫國利.不同基因型櫻桃植株再生體系的研究[D].東北農業大學,2009.組織培養技術正是解決此類問題最有效的方法[]王國昌,張蘭松,孫敬三.櫻桃組織培養快繁技術的改進研究[J].華北農學報,1989(S1):120-123.。組培快繁及再生體系的建立一方面可以培育出脫毒苗，另一方面可以大大縮短育苗時間滿足人們對各季節水果的需求[[]李竹瑩,鄭曉峰,孫光英,等.櫻桃組織培養及快速繁殖技術研究[J].凱里學院學報,2008,26(06):102-103.-[]鄭紅軍,劉慶忠.櫻桃離體培養研究進展[J].山東農業科學,2005(06):69-72.]，前人進行了大量研究[]王國昌,張蘭松.櫻桃組織培養快速繁殖技術的改進[J].中國果樹,1989(01):52-53.[]王斌,楊海蛟.大櫻桃矮化砧木[]王國昌,張蘭松,孫敬三.櫻桃組織培養快繁技術的改進研究[J].華北農學報,1989(S1):120-123.[]李竹瑩,鄭曉峰,孫光英,等.櫻桃組織培養及快速繁殖技術研究[J].凱里學院學報,2008,26(06):102-103.[]鄭紅軍,劉慶忠.櫻桃離體培養研究進展[J].山東農業科學,2005(06):69-72.[]王國昌,張蘭松.櫻桃組織培養快速繁殖技術的改進[J].中國果樹,1989(01):52-53.[]王斌,楊海蛟.大櫻桃矮化砧木“LZ-1”離體培養技術研究[J].上海農業科技,2013(06):80-81[]成密紅.櫻桃組織培養及微型嫁接技術研究[D].西北農林科技大學,2006.[]朱東姿,宗曉娟,陳新,等.甜櫻桃砧木吉塞拉離體莖尖玻璃化法超低溫保存研究[J].山東農業科學,2016,48(10):134-139+144.1.2研究內容以大櫻桃矮化砧木吉塞拉6號的葉片、莖段莖尖為外植體，先給外植體消毒、無菌操作，通過研究蔗糖對污染率影響、莖尖和莖段的誘導處理、莖尖和莖段的增殖處理、吉塞拉生根的處理、吉塞拉愈傷組織誘導處理、瓊脂濃度對愈傷組織誘導處理、葉片放置方式對愈傷組織誘導處理、葉片不同部位對愈傷組織誘導處理等方面研究，通過反復試驗和數據分析，確定不同培養基對離體再生體系影響，確定組培快繁的最佳方案。2.材料與方法2.1實驗材料2.1.1外植體品種本實驗在山東農業工程學院種苗工程實訓車間進行，實驗材料由濟南正莊農業提供，采集三年生長勢良好的矮化櫻桃砧木吉塞6號的新梢和帶腋芽的還沒有木質化的莖段去掉大葉老葉，修剪后留取3-5cm長度[]徐世彥,曹秋芬.優良大櫻桃砧木吉塞拉5號組培快繁體系構建[J].陜西農業科學,2016,62(09):18-22.[]徐世彥,曹秋芬.優良大櫻桃砧木吉塞拉5號組培快繁體系構建[J].陜西農業科學,2016,62(09):18-22.大櫻桃矮化砧木吉塞拉6號（Gisela6）是由酸櫻桃（P.cerasus）與灰毛葉櫻桃(P.canescens)進行雜交育種，培育出的三倍體雜種砧木，最早在德國培育成功。樹型矮小、成熟期早、抗逆性強、高產優質是其特性。廣泛應用于北美與歐洲，1998年引進我國。將我國品種與吉塞拉6號進行嫁接后，發現樹體明顯減小、樹體開張大、分枝角度大、產量高、果實大、抗病能力強、適應性強、極耐低溫，而且方便操作管理，節約了大量的人力物力[]殷麗青,陸錦明,葉正文,等.甜櫻桃砧木品種[]殷麗青,陸錦明,葉正文,等.甜櫻桃砧木品種‘吉塞拉6號’的離體培養與快速繁殖[J].上海農業學報,2015,31(02):51-55.2.1.2藥品藥劑WPM培養基粉、MS培養基粉（詳細成分參見附錄2、3）6-BA、NAA、IBA、2,4-D、TDZ、IAA、蔗糖、水2.2試驗方法2.2.1吉塞拉6號外植體的消毒方法圖1.外植體消毒方法Figure1.TheMethodofExplantDisinfection2.2.2無菌操作流程圖2.無菌操作流程Figure2asepticprocess2.2.3蔗糖對污染率影響的處理將修剪好的外植體先放置在培養皿中，然后分成兩份分別接種到滅完菌的兩種配方的培養基中。一種是加糖的MS固態培養基，一種是不含糖的MS固態培養基，兩種配方瓊脂的濃度均為6g/L，pH要求5.8。兩個處理分別接種60瓶；接種完成后，將接種在不加蔗糖的固態培養基的組培苗均分成四份，分別在培養的第4天、第7天、第10天和第14天將未感染的組培苗分再次轉接到正常的加蔗糖的固態培養基上。溫度設置成25℃，相對濕度控制在70%左右，光照強度設置成1600LX，光照時長控制在12h左右。觀察污染率、生長情況并記錄[]袁小環.櫻桃主要病毒脫除和分子生物學檢測技術研究[D].北京林業大學,2005.[]袁小環.櫻桃主要病毒脫除和分子生物學檢測技術研究[D].北京林業大學,2005.2.2.4莖尖和莖段的誘導處理外植體為品種吉塞拉砧木的莖段和莖尖，對其側芽進行擴繁誘導。本實驗將莖段和莖尖的誘導處理的培養基設置成：MS培養基中加入濃度不同的6-BA和NAA，其中瓊脂的濃度為6g/L，蔗糖的濃度為30g/L，pH要求5.8。研究不同濃度的NAA和6-BA配方對外植體生長情況的影響。對NAA設置5個濃度梯度，分別為0.05mg/L、0.08mg/L、0.1mg/L、0.15mg/L、0.2mg/L；6-BA也設置五個濃度梯度，分別為0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L。每個濃度梯度設置30個重復。不同激素濃度組成的配方一共25個。實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后總的統計結果。2.2.5莖尖和莖段的增殖處理本實驗用于增殖的基本培養是MS培養基和WPM培養基，生長調節劑為不同濃度的NAA和6-BA，其中瓊脂的濃度為6g/L，蔗糖的濃度為30g/L，pH要求5.8。將NAA設置5個濃度梯度，分別為0.05mg/L、0.08mg/L、0.1mg/L、0.15mg/L、0.2mg/L；6-BA也設置五個濃度梯度，分別為0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L。每個濃度梯度設置5個重復。不同激素濃度組成的配方一共25個。實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后總的統計結果[]劉慶忠,陳新,魏海蓉,等.櫻桃矮化砧木[]劉慶忠,陳新,魏海蓉,等.櫻桃矮化砧木‘吉塞拉6號’四倍體新種質Y1的培育2.2.6吉塞拉生根的處理本實驗將用于生根的培養基設置成1/2MS培養基，生長調節劑是IBA，其中瓊脂的濃度為6g/L，蔗糖的濃度為30g/L，pH要求5.8，以此來研究不同濃度的IBA對生根作用的影響。將IBA設置5個濃度梯度，分別為0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L，每個濃度梯度設置50個重復。設置一個不加IBA其余條件均相同的空白對照。不同激素濃度組成的配方一共6個。實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后總的統計結果。環境條件：濕度設置成25℃，相對濕度控制在70%左右，光照強度設置成1600LX，光照時長控制在12h左右。計算公式：2.2.7吉塞拉愈傷組織誘導處理本實驗的研究對象是在增殖培養基上生長4周后的新梢，剪去新梢頂端第三片到第五片剛長出的新葉片，用鑷子夾住取下的葉片，同時用剪刀自下到上沿葉脈垂直方向剪3個左右傷口，然后進行接種處理。用于愈傷組織的誘導的基本培養基是WPM培養基，設置三種激素組合，以此研究各配方對離體葉片愈傷組織的影響。表1激素組合1Table1Formula1配方一WPM培養基+TDZ+NAA基本培養基WPMNAA濃度0.05mg/L、0.08mg/L、0.1mg/L、0.15mg/L、0.2mg/LTDZ濃度0.2mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L要求蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，PH為5.8，每個濃度梯度設置30個重復，實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后統計結果表2激素組合2Table2Formula2配方二WPM培養基+6-BA+NAA基本培養基WPM6-BA濃度0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/LNAA濃度0.2mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L要求蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，PH為5.8，每個濃度梯度設置30個重復，實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后統計結果表3激素組合3Table3Formula3配方三WPM培養基+6-BA+2，4-D基本培養基WPM6-BA濃度0.5mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L2,4-D濃度1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L要求蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，pH為5.8，每個濃度梯度設置30個重復，實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后統計結果2.2.8瓊脂濃度對愈傷組織誘導處理本實驗的研究對象是在增殖培養基上生長4周后的新梢，剪去新梢頂端第三片到第五片剛長出的新葉片，用鑷子夾住取下的葉片，同時用剪刀自下到上沿葉脈垂直方向剪3個左右傷口，然后進行接種處理。所用的基本培養基為WPM培養基，加入2.0mg/L的6-BA和0.5mg/L的NAA。將瓊脂設置5個濃度梯度4g/L、5g/L、6g/L、7g/L、8g/L，每個濃度梯度設置30個重復。設置一個不加瓊脂其余條件均相同的空白對照。不同激素濃度組成的配方一共6個。實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后總的統計結果[]鄭巧娜.中國櫻桃組培快繁及再生體系的建立[D].山東農業大學,2011.[]鄭巧娜.中國櫻桃組培快繁及再生體系的建立[D].山東農業大學,2011.2.2.9葉片放置方式對愈傷組織誘導處理本實驗的研究對象是在增殖培養基上生長4周后的新梢，剪去新梢頂端第三片到第五片剛長出的新葉片，用鑷子夾住取下的葉片，同時用剪刀自下到上沿葉脈垂直方向剪3個左右傷口，然后進行接種處理。所用的基本培養基為WPM培養基，加入2.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA，其中瓊脂的濃度為6g/L，蔗糖的濃度為30g/L，pH要求5.8。分別把修剪好的葉片的正面和背面進行無菌接種，每種分別做30個重復。實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后總的統計結果。2.2.10葉片不同部位對愈傷組織誘導處理本實驗的研究對象是在增殖培養基上生長4周后的新梢，剪去新梢頂端第三片到第五片剛長出的新葉片，把取下的葉子剪成三份，包括葉尖、葉中和葉基，再進行接種處理。分別觀察這三部分愈傷組織的生長情況，最終找到最好的接種部位。所用的基本培養基為WPM培養基，加入2.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA，其中瓊脂的濃度為6g/L，蔗糖的濃度為30g/L，pH要求5.8。每種分別做30個重復。實行全區組實驗，每天觀察并記錄情況，30天后總的統計結果[]胡選萍.不同生長調節因子對大櫻桃吉塞拉的再生效應[J].江蘇農業科學,2013,41(06):142-144.[]胡選萍.不同生長調節因子對大櫻桃吉塞拉的再生效應[J].江蘇農業科學,2013,41(06):142-144.3.結果與分析3.1蔗糖對外植體污染的影響從下面表4可以看出外植體先在不加糖固體培養基上觀察7天，然后轉接到加糖固體培養基上觀察7天，各項指標表現都很好，最適宜；外植體先在不加糖固體培養基上觀察10天，然后轉接到加糖固體培養基上觀察7天，污染率控制的很好，存活率也居于第二，但是死亡率這個指標太高，毫無意義；外植體先在無糖固體培養基上觀察4天，然后轉接到含糖固體培養基上觀察7天，死亡率控制的很好，但是污染率太高，存活率不高，不可??；經滅菌修剪后的莖段或葉片在含糖固體培養基上培養14天雖然死亡率和存活率指標都很好，但是污染率太高，達不到實驗要求；經滅菌修剪后的莖段或葉片在無糖培養基上培育14天，各種指標表現都不好。由此得出最佳的配方為先在不加糖固體培養基上觀察7天，然后轉接到加糖固體培養基上觀察7天。表4蔗糖對外植體污染的影響Table4Effectofsucroseonexplantpollution處理方法污染率（%）死亡率（%）存活率（%）無糖培養4天，含糖7天55.63.539.8無糖培養7天，含糖7天19.83.577.4無糖培養10天，含糖7天9.93257.6含糖培養14天77.37.017.2無糖培養14天66.63320.03.2莖尖和莖段的誘導處理經過實驗觀察可以知道，一般第7天到第10天接種的芽開始出現萌動，愈傷組織開始出現。從下面的表5中得出，6-BA濃度在1.0-2.0mg/L范圍內，NAA濃度在0.1-0.2mg/L范圍內，芽的誘導率和長勢表現都比較好；當兩種激素的濃度都降低時，芽的誘導率和長勢表現都不太好；當兩種激素的濃度都升高時，芽的誘導率變化不大，長勢不怎么好。由此得出最佳配方：MS培養基加1.0mg/L的6-BA加0.1mg/L的NAA，此時長勢最好。表5NAA和6-BA對矮化砧木Gisela6誘導的影響Table5EffectsofNAAand6-BAontheinductionofdwarfrootstockGisela6處理NAA（mg/L）6-BA(mg/L)誘導率（%）長勢10.050.554較弱20.050.865較弱30.051.073一般40.051.577較弱50.052.082一般60.080.566較弱70.080.875較弱80.081.078較弱90.081.560較弱100.082.065較弱110.100.575一般120.100.878一般130.101.096良好140.101.588一般150.102.095良好160.150.558較弱170.150.866較弱180.151.073較弱190.151.578較弱200.152.062較弱210.200.583一般220.200.880較弱230.201.095良好240.201.583一般250.202.0100較弱3.3莖尖和莖段的增殖研究3.3.1基本培養基為MS培養基時矮化砧木Gisela6的增殖研究當基本培養基為MS培養基時，從培養30天的觀察統計中可以得到表6，從下表6中我們可以得出結果：當培養基中的6-BA與NAA的濃度分別低于1.0mg/L和0.1mg/L時，增殖倍數有了明顯的提高；當NAA的濃度超過上述濃度時，增殖倍數隨著組合濃度的上升沒有明顯的變化。由此可以得出最佳配方:MS培養基+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，此時增殖倍數較高，長勢良好。表6MS與NAA和6-BA對矮化砧木Gisela6增殖的影響Table6EffectsofMSandNAAand6-BAontheproliferationofdwarfrootstockGisela6處理NAA（mg/L）6-BA（mg/L）增殖倍數長勢增殖方式10.050.21.5較弱叢芽增殖20.050.52.3一般叢芽增殖30.051.03.3良好叢芽增殖40.051.53.8良好叢芽增殖50.052.04.2良好叢芽增殖60.080.21.8較弱叢芽增殖70.080.52.2一般叢芽增殖80.081.03.7良好叢芽增殖90.081.53.9良好叢芽增殖100.082.04.0良好叢芽增殖110.100.22.7一般叢芽增殖120.100.53.9良好叢芽增殖130.101.04.6良好叢芽增殖140.101.54.1良好叢芽增殖150.102.04.1良好叢芽增殖160.150.21.7較弱叢芽增殖170.150.51.8較弱叢芽增殖180.151.04.0良好叢芽增殖190.151.54.1良好叢芽增殖200.152.04.5良好叢芽增殖210.200.22.7一般叢芽增殖220.200.53.8良好叢芽增殖230.201.04.0良好叢芽增殖240.201.54.1良好叢芽增殖250.202.04.1良好叢芽增殖3.3.2基本培養基為WPM培養基時矮化砧木Gisela6的增殖研究當基本培養基為WPM培養基時，從培養30天的觀察統計中中可以得到下表7，從下表中我們可以得出結果：不同濃度的激素組合與芽增殖的關系十分緊密，當培養基中6-BA與NAA的濃度分別低于1.0mg/L和0.1mg/L時，增殖倍數有了明顯的提高；當NAA的濃度超過上述濃度時，增殖倍數隨著組合濃度的上升沒有明顯的變化；當6-BA與NAA的濃度分別低于1.0mg/L和0.1mg/L時芽的增殖方式只有叢芽增殖；當培養基中的6-BA與NAA的濃度分別在0.5-1.0mg/L和0.05-0.1mg/L時，芽的增殖方式屬于腋芽增殖；當培養基中的6-BA與NAA的濃度分別高于1.0mg/L和0.1mg/L時芽的兩種增殖方式都存在。由此可以得出最佳配方:WPM培養基+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，此時增殖倍數較高，長勢良好，生長速度快。表7WPM與NAA和6-BA對矮化砧木Gisela6增殖的影響Table7EffectsofWPMandNAAand6-BAontheproliferationofdwarfrootstockGisela6處理NAA（mg/L）6-BA（mg/L）增殖倍數長勢增殖方式10.050.21.5較弱叢芽增殖20.050.53.3一般腋芽增殖30.051.04.3一般腋芽增殖40.051.55.8一般叢芽增殖與腋芽增殖50.052.07.2良好叢芽增殖與腋芽增殖60.080.21.8較弱叢芽增殖70.080.54.2一般腋芽增殖80.081.07.7良好腋芽增殖90.081.57.9良好叢芽增殖與腋芽增殖100.082.07.5良好叢芽增殖與腋芽增殖110.100.23.7一般叢芽增殖120.100.57.9良好腋芽增殖130.101.08.0良好叢芽增殖與腋芽增殖140.101.57.9良好叢芽增殖與腋芽增殖150.102.07.4良好叢芽增殖與腋芽增殖160.150.26.7一般叢芽增殖170.150.57.8一般腋芽增殖180.151.07.9良好叢芽增殖與腋芽增殖190.151.57.1良好叢芽增殖與腋芽增殖200.152.07.5良好叢芽增殖與腋芽增殖210.200.26.7一般叢芽增殖220.200.57.8良好腋芽增殖230.201.07.2良好叢芽增殖與腋芽增殖240.201.57.9良好叢芽增殖與腋芽增殖250.202.07.9良好叢芽增殖與腋芽增殖綜合表6和表7可以得出：在以MS培養基為基本培養基時只出現了一種增殖方式，但是在以WPM培養基為基本培養基時出現了兩種不同的增殖方式，而且增殖倍數明顯高。綜合所有因素可以得出最佳配方為：WPM培養基加1.0mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA。3.4生根的結果與分析經過30天的觀察統計，根據公式計算可以得出表8，從表8中可以看出，加入適度的IBA都會對根的生長分化有促進作用。不難分析，根的生長分化隨著IBA濃度的增加，根的三種生長指標都有顯著的增高，在濃度為0.5mg/L時三種指標都達到了最高，當IBA濃度高于0.5mg/L時，這三個指標都有明顯的降低。由此可以得出最佳配方：1/2WPM基本培養基中加入0.5mg/L的IBA，此時長勢最好，各項指標最高。表8IBA對生根的影響Table8EffectofIBAonRooting處理IBA濃度（mg/L）生根率（%）平均根長（cm）平均根系數（條）10.1211.12.620.2421.76.130.5892.612.040.8692.18.051.0501.57.660150.81.53.5葉片愈傷組織的結果與分析3.5.1TDZ與NAA組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響離體葉片在接種培育5天左右后開始出現變化，傷口處出現卷曲的現象，并且隨著時間的推移，愈傷組織首先在傷口處形成，接著愈傷組織慢慢的在整個葉片中都形成，不過不同的濃度組合表現出不一樣的效果。經計算得出了表9，從表9中不難得到：雖然在設計的濃度范圍內都會形成愈傷組織，但當TDZ和NAA的濃度分別為0.5mg/L和0.1mg/L時其誘導率達到最大，在此基礎上增加二者或者降低二者的濃度都會對愈傷組織的形成造成不好的影響。由此可以得出最佳配方：WPM培養基加0.5mg/L的TDZ和0.1mg/L的NAA表9TDZ與NAA組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響Table9EffectsofcombinationofTDZandNAAonCallusofdwarfrootstockGisela6處理TDZ（mg/L）NAA（mg/L）接種數完全愈傷化數誘導率（%）10.20.0530826.720.20.083093030.20.10301136.740.20.1530124050.20.20301447.760.30.05301033.370.30.08301136.780.30.10301343.390.3030.20301653.3110.50.05301653.3120.50.08301756.7130.50.10301860140.50.15301756.7150.50.20301756.7160.80.05301550170.80.08301653.3180.80.10301653.3190.8080.20301653.3211.00.05301653.3221.00.08301447.7231.00.10301653.3241.0000.20301447.73.5.26-BA與NAA組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響離體葉片在接種培育5天左右后開始發生變化，愈傷組織首先在傷口處形成，接著愈傷組織慢慢的在整個葉片中都形成，不過不同的濃度組合表現出不一樣的效果。經計算得出了表10，從表10中不難得到：雖然在設計的濃度范圍內都會形成愈傷組織，但當6-BA和NAA的濃度分別為2.0mg/L和0.2mg/L時其誘導率達到最大，在此基礎上增加二者或者降低二者的濃度都會使愈傷組織的形成量降低。由此可以得出最佳配方：WPM培養基加2.0mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA。表106-BA與NAA組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響Table10Effectsofcombinationof6-BAandNAAonCallusofdwarfrootstockGisela6處理6-BA（mg/L）NAA（mg/L）接種數完全愈傷化數誘導率（%）10.50.23093020.50.33093030.50.5301033.340.50.8301136.750.51.030124060.80.2301343.370.80.330124080.80.5301343.390.80.8301653.3101.01.0301550111.00.2301446.7121.00.3301550131.00.5301653.3141.00.8301860151.01.0301963.3161.50.2301550171.50.3301756.7181.50.5301756.7191.50.8301653.3201.51.0301653.3212.00.2301756.7222.00.3301653.3232.00.5301963.3242.00.8301756.7252.01.0302273.33.5.36-BA與2,4-D組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響經過多天的記錄與分析得出，離體葉片在接種培育3天左右后開始發生變化，愈傷組織首先在傷口處形成，接著愈傷組織慢慢的在整個葉片中都形成，不過不同的濃度組合表現出不一樣的效果。經計算得出了表11，從表11中可以看出在設計的濃度范圍內都會培育出愈傷組織；2,4-D的加入效果非常好，愈傷組織的形成隨著其濃度的升高而提高；但當6-BA和2,4-D的濃度分別為1.0mg/L和4.0mg/L時其誘導率達到最大，當加入的6-BA的濃度為2.0mg/L時，雖然沒有顯著提高愈傷組織的形成，但是此濃度下離體葉片長勢良好；此濃度組合的設計最大的缺陷就是隨著培養時間的增長愈傷組織會慢慢的變黑甚至死亡，因此得出結論該配方不適合誘導離體葉片的愈傷組織。表116-BA與2，4-D組合對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響Table11Effectsof6-BAand2and4-DcombinationsonDwarfingGisela6callus處理6-BA（mg/L）2，4-D（mg/L）接種數完全愈傷化數誘導率（%）10.51.0301240.020.51.5301550.030.52.0301756.740.53.0301653.350.54.0302066.760.81.0301550.070.81.5301653.380.82.0301756.790.83.0301550.0100.84.0301550.0111.01.0301446.7121.01.5301653.3131.02.0301756.7141.03.0302066.7151.04.0302273.3161.51.0301756.7171.51.5301860.0181.52.0301963.3191.53.0301653.3201.54.0301756.7212.01.0301550.0222.01.5301653.3232.02.0301446.7242.03.0301550.0252.04.0301860.03.6瓊脂濃度對矮化砧木Gisela6愈傷組織誘導處理的結果與分析瓊脂在培養基的配置中是必不可少的，瓊脂的加入量對愈傷組織的誘導情況也影響。從培養30天的觀察統計中可以得到下表12，從表12中可以發現，當瓊脂的濃度為6g/L時，此時愈傷組織形成的速度最快，誘導率也是最高；當瓊脂的濃度高于或低于此標準的濃度時雖然誘導率也不低，但是培養基水分的含量降低，導致離體葉片無法正常生長。因此得出最佳配方：使用給出培養基配方再加入的瓊脂濃度為6g/L最好。表12瓊脂的濃度對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響Table12EffectofagarconcentrationonGisela6callusofDwarfRootstock處理瓊脂濃度（g/L）接種數完全愈傷化數誘導率（%）14301860.025302170.036302583.347301963.358301860.06030310.03.7葉片放置方式對矮化砧木Gisela6愈傷組織誘導處理的結果與分析根據以往試驗情況來看，葉上表皮置于培養基上和葉下表皮置于培養基上得到結果是不一樣的。從培養30天的觀察統計中可以得到表13，從表13中可以發現，雖然兩種接種方式都可以誘導愈傷組織，但是采用葉上表皮放置方式的誘導率遠高于用葉下表皮接種。因此得出最佳配方：使用給出培養基配方再將葉上表皮置于培養基上進行離體葉片對愈傷組織的誘導效果更好。表13葉片的放置方式對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響Table13EffectofleafplacementoncallusGisela6ofDwarfRootstock處理葉片的放置方式接種數完全愈傷化數誘導率（%）1正面接種302790.02背面接種302066.73.8葉片不同部位對矮化砧木Gisela6愈傷組織誘導處理的結果與分析經過多天的統計觀察發現葉柄處的愈傷組織是最先形成的，經計算得出表14。從表14的數據中不難得出：葉片這三部分雖然都能夠誘導愈傷組織，但是差異依然很大；葉基部的誘導率可以達到百分之百，最適合誘導；葉中部的的誘導率一般；葉尖部誘導率最低。因此可以得到最佳方式：使用給出培養基配方再用葉基部接種，效果最好。表14葉片的不同部位對矮化砧木Gisela6愈傷組織的影響Table14EffectsofdifferentpartsofleavesonCallusofdwarfrootstockGisela6處理葉片的不同接種部位接種數完全愈傷化數誘導率（%）1葉尖部301136.72葉中部302066.73葉基部30301004.討論4.1蔗糖與外植體污染關系的分析生產中造成莖段組培污染的原因很多，如溫度、光照、空氣等，除卻這些可控的環境因素，本實驗著重討論蔗糖的有無與污染率的關系。古在豐樹教授在1980第一次使用了無糖組織培養這一個新概念，這種新型的組培方式又叫光自養微繁，其特點是利用現代技術，用二氧化碳代替糖作為碳源，提供適宜的環境條件，促進植物光合作用，以此促進植物