真核生物基因

的表達調控1編輯ppt主要內容概述染色體水平上的調控染色質水平上的調控DNA水平上的調控真核細胞Ⅱ類基因的調控區真核細胞Ⅱ類基因的轉錄調控因子2編輯ppt一、概述3編輯pptDNAhnRNAmRNA蛋白質前體活性蛋白質mRNA降解物核細胞質①染色體、染色質、水平上的調控②轉錄調控③轉錄后加工調控④轉運調控⑤翻譯調控⑥mRNA降解的調控⑦翻譯后加工的調控〔一〕真核生物基因表達多層次性4編輯ppt〔二〕真核生物基因表達調控的種類涉及基因的迅速翻開和關閉，刺激信號主要是激素和生長因子短期調控或可逆性調控：長期調控或不可逆性調控：基因永久性或半永久性地開啟和關閉，不可逆地改變細胞生化特征，最終導致細胞分化5編輯ppt二、染色體水平上的調控6編輯ppt〔一〕基因喪失Definition:在細胞分化過程中，通過喪失掉某些基因而去除這些基因的活性。7編輯ppt〔二〕基因擴增Definition:〔amplificationofgene〕指基因組中特定基因的拷貝數專一性大量增加的現象。〔三〕染色體重排(chromosomerearrangement)8編輯ppt三、染色質水平上的調控9編輯ppt〔一〕染色質的結構DNA組蛋白核小體染色質組蛋白是富含精氨酸和賴氨酸的堿性蛋白，有H1、H2A、H2B、H3和H4共5種。10編輯ppt11編輯ppt染色質折疊的放射環模型12編輯ppt核小體顆粒的晶體結構13編輯pptH1的直接功能是阻止核小體的移動，阻礙DNA序列進一步暴露。除去H1會活化局部轉錄活性，是染色質活化的重要事件14編輯ppt由組蛋白和DNA組成的染色質結構限制了轉錄因子對DNA的接近與結合，實際上起著阻遏轉錄的作用。基因轉錄需要染色質發生一系列重要的變化，如染色質去凝集，核小體變成開放式的疏松結構，使轉錄因子等更容易接近并結合核小體DNA。有兩種方式可以顯著改變DNA的易接近性：組蛋白的乙酰化和核小體重塑。15編輯ppt〔二〕染色質的3種狀態阻遏狀態活性狀態激活狀態16編輯ppt〔三〕異染色質化常染色質（euchromatin）異染色質（heterochromatin）組成型異染色質DNA不含有基因兼性異染色質沒有持久的活性，由常染色質凝聚而成著絲粒、端粒、核仁形成區17編輯ppt〔四〕組蛋白的修飾〔Histonemodification〕每種核心組蛋白包括一個～80個氨基酸殘基構成的保守的區域稱為組蛋白折疊域〔histonefolddomain〕和一個突出于核小體核心之外、由20個氨基酸殘基組成的N端尾。N端尾的相互作用對核小體的聚集和染色質折疊非常重要，也是組蛋白的主要修飾部位。核心組蛋白的修飾18編輯ppt乙酰化(acetylation)甲基化(methylation)磷酸化(phosphorylation)乙酰化是最早發現與轉錄有關的組蛋白修飾方式19編輯ppt20編輯ppt21編輯ppt組蛋白修飾與基因活性的關系在含有活性基因的染色體結構域中，組蛋白乙酰化程度增加，組蛋白甲基化程度減少1.核心組蛋白的修飾22編輯ppt23編輯pptAcetylationoccursintwodifferentcircumstancesduringDNAreplication;whengenesareactivated24編輯pptduringDNAreplicationDNA復制時，同時要合成新的組蛋白。在組蛋白組裝成核小體之前被乙酰化，組裝完成后又去乙酰化25編輯pptwhengenesareactivated組蛋白乙酰化，使基因控制區與核小體偶聯變得松弛，使染色質變成活性狀態。26編輯ppt組蛋白乙酰化酶(Histoneacetyltransferase，HATs)組蛋白去乙酰化酶(Histonedeacetylase，HDACs)27編輯ppt許多組蛋白乙酰化酶是以往鑒定過的激活蛋白或輔激活蛋白〔coactivator〕。CBP/p300可乙酰化H4的N端尾，PCAF

可乙酰化H3的N端尾28編輯ppt去乙酰化與基因活性的阻遏有關在酵母中，SIN3和Rpd3與Ume6形成復合物，能阻遏該啟動子轉錄。Rpd3有組蛋白去乙酰化酶活性29編輯ppt2.H1組蛋白磷酸化H1組蛋白對核小體起裝配作用，確定核小體方向性，并將根本的串珠進一步組裝到30nm的纖維中。H1組蛋白磷酸化后與DNA親和力下降，造成染色質疏松，可提高染色質的活性有絲分裂中H1的磷酸化導致其對DNA的親和力下降，可能與具有轉錄活性的染色質伸展狀態相似。組蛋白修飾與基因活性的關系30編輯ppt1、組蛋白H1與染色質結合不緊密；2、4種核內組蛋白含量雖然正常，但是乙酰化程度比非活性染色質的高；3、活性染色質中，組蛋白H2B很少磷酸化；4、核小體結構結合了兩種小分子量的非組蛋白HMG14和HMG17；5、組蛋白H3的巰基暴露。6.處于轉錄活化的染色質區域，對DNaseI敏感性比無轉錄活性區高得多活性染色質特征31編輯ppt〔五〕染色質的重塑〔chromationremodeling〕Definition:

染色質和單個核小體內發生的任何可檢測到的變化32編輯ppt兩種改變染色質結構的模型占先模型(Pre-emptivemodel)動力學模型(Dynamicmodel)33編輯ppt占先模型(Pre-emptivemodel)如果在啟動子部位形成了核小體，那么轉錄因子和聚合酶不能與DNA結合，反之亦然。34編輯ppt動力學模型(Dynamicmodel)在ATP水解釋放能量的驅動下，各種轉錄因子將核小體從DNA中置換出來。35編輯ppt染色質重塑涉及在基因組一個較短的區域中核小體位置的改變或者結構的改變，是一個能量依賴的過程，由染色質重塑復合物〔chromatinremodelingcomplex〕催化完成。36編輯ppt染色質重塑復合物37編輯pptSWI/SNF類復合物有解旋酶活性，在ATP作用下，使核小體DNA螺旋程度降低，組蛋白八聚體沿DNA移動，核小體結構松散。染色質重塑復合物的作用機理38編輯ppt染色質活化過程〔1〕轉錄因子結合于特定序列〔2〕染色質重塑復合物結合〔3〕轉錄因子被釋放轉錄因子、組蛋白乙酰化酶和染色質重塑復合體的結合順序因啟動子的不同而不同。39編輯ppt染色質結構重塑〔4〕乙酰化酶復合物結合組蛋白被修飾40編輯ppt〔5〕新的轉錄因子與DNA結合。〔6〕RNA聚合酶與DNA結合。〔7〕轉錄起始需要來自于特異性轉錄因子經中介復合體傳遞來的正調控信號。41編輯ppt〔六〕活性染色質的DNase敏感性處于轉錄活化的染色質區域，對DNaseI敏感性比無轉錄活性區高得多。是由于此區域染色質結構變得松散，DNaseI易于接觸到DNA。對DNaseI敏感性只反映該基因具有被轉錄的潛能。并不反映該基因一定在轉錄。DNaseI超敏感位點〔DNaseIHyperSensitiveSites，DHSS)：大多位于基因5′端啟動子區域，少數位于其他部位。超敏感位點實際上是一段100-200bp的DNA序列特異暴露的區域，可能被一些非組蛋白結合而抑制了同組蛋白結合，失去了組蛋白的保護。42編輯ppt人類β-珠蛋白基因簇的超敏感位點43編輯ppt5’端調控位點，起初級調控作用，它即是一簇超敏感位點。是染色體DNA上一種順式作用元件，結構域中含有多種反式作用因子的結合序列，可能參與蛋白質因子的協同作用，使啟動子處于無組蛋白狀態。〔七〕染色質的功能區域1.基因座控制區(locuscontrolregion,LCR)44編輯pptLCR是一種遠距離順式調控元件使LCR界限之內的基因具有潛在活化的可能是基因簇中每個基因表達所必需的45編輯ppt人類的β－珠蛋白基因簇長約60Kb，含有5個功能基因，它們的排列順序是5’－ε－γG－γA－δ－β－3’。其中ε在胚胎早期表達，γG和γA在胎兒時期表達，δ和β在成體中表達。每個β－珠蛋白基因都有自己的一套調控系統，但它們的表達還要受到基因簇上游12Kb的基因座控制區〔locuscontrolregion,LCR〕的控制。46編輯pptLCR最初是在研究地中海貧血病的過程中被發現的，地中海貧血是一種由α或β珠蛋白缺陷導致的血液病。許多地中海貧血是由珠蛋白基因編碼區突變造成的，但是也有一些地中海貧血是由于β－珠蛋白基因簇上游12Kb的區域發生大范圍缺失，導致了整個基因簇沉默。因此，LCR具有增強轉錄的功能。47編輯ppt人類β－珠蛋白基因LCR的增強子活性已由實驗證明。將連接或不連接LCR的人類β－珠蛋白基因分別轉化小鼠細胞。研究發現，如果缺少LCR，β－珠蛋白基因轉錄水平通常不到內源小鼠β－珠蛋白基因的1％。假設是連接上LCR，外源β－珠蛋白基因的表達水平與小鼠自身的β－珠蛋白基因的表達水平相當。48編輯ppt2.核基質結合區〔matrtixassociatedregion,MAR〕Definition:

染色質通過DNA特定序列結合在核基質蛋白質上，形成環狀結構。這特定的DNA序列稱為核基質結合區49編輯ppt在靠近MAR位點的地方經常有拓撲異構酶II的識別位點，意味著每一個巨大的環狀DNA的超螺旋程度受到獨立的調控。增強子以及其他調控元件也經常靠近MAR位點。在某些情況下，染色質重塑也是從MAR位點開始的，并且影響整個染色質環。50編輯pptMAR功能：限定DNA的環，使環狀結構成為相對獨立的結構功能單位51編輯pptDefinition:

:可以阻止激活或失活效應傳向相鄰的結構功能單位的DNA序列3.限定子〔delimiter〕或絕緣子〔insulator〕52編輯ppt絕緣子是一組在真核生物基因組中建立獨立的轉錄活性區的調控元件，它具有兩種性質。第一，當絕緣子位于增強子或者沉默子與啟動子之間時可以阻斷增強子或者沉默子對啟動子的作用。第二，絕緣子可以使其界定的基因的表達不受位置效應的影響。53編輯ppt絕緣子的功能增強子屏蔽的活性。在啟動子和增強子之間的絕緣子阻止啟動子接受增強子的轉錄激活影響阻礙物活性。在啟動子和濃縮、阻礙狀態的染色質之間的絕緣子可以阻止啟動子受到濃縮染色質〔由沉默子誘導〕阻抑基因轉錄的影響54編輯ppt滑動模型。當激活蛋白結合到增強子上，刺激信號或激活蛋白本身沿DNA滑向啟動子。而絕緣子可能與一個或多個蛋白結合，阻擋滑向啟動子的信號。環化模型。兩個絕緣子將一個增強子隔離出來。當蛋白質結合到這些絕緣子上后，它們相互作用，將增強子隔離在環形結構中，從而不能激活附近啟動子的轉錄。絕緣子活性機理的兩種假說55編輯ppt果蠅兩個串聯基因上的絕緣子效應56編輯pptDNA結構域可能有以下三種位點57編輯ppt四、DNA水平上的調控58編輯ppt〔一〕DNA的甲基化〔methylation〕甲基化位點主要在CpG序列59編輯ppt半甲基化全甲基化60編輯pptHpaII能切割非甲基化的CCGG序列DNA甲基化的檢測MspI能切割甲基化或非甲基化的CCGG序列61編輯pptMspIHpaIIMspI酶切HpaII酶切62編輯ppt基因不能表達的組織中呈甲基化狀態，活性基因低甲基化狀態DNA甲基化與基因活性63編輯pptDNA甲基化抑制轉錄機理影響染色質的結構，穩定染色質的失活狀態，阻止轉錄因子的進入，防止其活化。DNA甲基化直接干預轉錄因子與啟動子內識別位點結合；抑制作用通過甲基化CpG結合蛋白〔methylatedCpGbindingproteins,MeCP〕起作用，這種因子與轉錄調控因子競爭甲基化DNA結合位點。64編輯pptMeCP-1CH3CH3CH3CH3CH3TFRNApolIIMeCP-1可與多個甲基化的CpG位點結合65編輯pptMeCP-2CH3CH3CH3CH3CH3SIN3HDACTFRNApolIIMeCP-2能結合到單個甲基化的CpG堿基對上，還結合Sin3阻遏復合體(含HDAC活性)，66編輯pptCpG島〔CpG–richislands〕富含CpG的區段稱為CpG島67編輯ppt幾乎管家基因都含CpG島一般位于基因的5’端區域大多數CpG島是未甲基化的CpG島中的核小體中H1含量低，其它組蛋白被廣泛乙酰化，并有超敏感位點未甲基化CpG島可能說明基因具有潛在活性，68編輯ppt五、真核細胞Ⅱ類基因的調控區69編輯ppt轉錄水平的調控主要是通過順式作用元件與反式作用因子相互作用來實現的順式作用元件(cis-regulatingelement)啟動子、增強子、沉默子、絕緣子、應答元件70編輯ppt啟動子調控元件增強子（enhancer）沉默子（

silencer）核心啟動子(corepromotor)上游啟動子元件(upstreampromotorelement,UPE)基本啟動子(basalpromotor)轉錄起始位點(Inr)71編輯ppt〔一〕啟動子〔promotor〕核心啟動子(corepromotor)TATA-box：TBP的結合位點，決定轉錄方向、起始位點啟動子上游元件(UPE)CCAAT-box:CTF、C/EBP的結合位點GC-box:sp1的結合位點UPE影響轉錄起始頻率，增強轉錄起始復合物的組裝能力在酵母中稱為上游激活元件〔UAS〕72編輯ppt73編輯ppt〔二〕增強子〔enhancer〕SV40早期基因調控區的結構74編輯pptDefinition:

指能使與它連鎖的基因轉錄效率明顯增加，并且無方向和位置依賴性的DNA序列。75編輯ppt增強效應十清楚顯增強子與啟動子的相對位置不固定,可以位于基因的5’端上游、內部或3’端下游序列中可以遠離基因的Inr起作用能在兩個方向上起作用一般具有組織和細胞特異性1.增強子的特點76編輯pptr2b基因中的增強子元件是無方向和位置效應的a.構建突變質粒：將X2-X3區域〔包含增強子〕切除后通過四種方式重新插到基因中。質粒A和B：X2-X3片段被正向或反向插到原位置。質粒C和D：X2-X3片段被正向或反向插到另一個XbaI酶切位點，位于基因上游幾百堿基處。b.結果說明，增強子無方向和位置效應。77編輯ppt78編輯ppt2.增強子的種類組織和細胞專一性增強子誘導性增強子只在特定組織和細胞中，特定的轉錄因子與之結合，才能發揮功能。由于調控因子本身活性是誘導性的，造成對增強子的結合和增強子活性有可誘導性79編輯ppt3.增強子的作用機理三種假說a.拓撲結構的改變。激活因子與增強子結合，促進DNA的拓撲結構或形狀發生改變，使啟動子向通用轉錄因子敞開。b.滑動。激活因子與增強子結合，沿DNA滑動直至啟動子，與啟動子直接相互作用激活轉錄。80編輯pptc.環化。激活因子與增強子結合，使增強子與啟動子之間的DNA環化，促進結合蛋白間的互作并激活轉錄。增強子功能的要點，實質上是結合于增強子的激活因子與結合于啟動子的普遍性轉錄因子之間的蛋白質-蛋白質相互作用。81編輯ppt82編輯ppt多重增強子能使一個特定基因對各種激活因子的不同組合產生應答。這種排布格局使細胞能對基因在不同組織或不同發育階段產生精細的調控。4.多個增強子〔MultipleEnhancers〕的作用83編輯ppt金屬硫蛋白(Metallothionein，MT)基因是單一基因受多種不同機制調控的例子金屬應答元件(MRE)在應答重金屬時激活基因轉錄GC框:轉錄激活因子Sp1的應答元件本底水平增強子(BLE):轉錄激活因子AP-1的應答元件糖皮質激素應答元件(GRE):可被糖皮質激素和受體組成的激活因子激活轉錄金屬硫蛋白是真核細胞中幫助細胞對付重金屬中毒的防御性機制84編輯ppt海膽Endo16基因的多增強子模塊的排布情況激活因子的不同組合，就會在不同細胞中造成基因不同水平的表達大號和中號的彩色橢圓形和長方形表示激活因子；橙色小橢圓形表示結構轉錄因子；增強子成簇排列，分別記為G,F,E,DC,B和A；長垂直線代表限定模塊的限制性位點；BP為根本啟動子。P56885編輯ppt海膽Endo16基因中模塊A的綜合功能(a)在早期發育中,模塊A是唯一開啟的模塊,它通過根本啟動子(BP)刺激基因轉錄.(b)在中胚層的晚期發育中,模塊A通過整合模塊G和B的作用,共同刺激轉錄.(c)在外胚層的晚期發育中,模塊A通過整合模塊F和E的作用,阻遏基因轉錄.(d)在成骨間質細胞的晚期發育中,模塊A整合模塊DC的作用,抑制基因轉錄.(e)LiCl處理能逆轉來自模塊A外胚層和成骨間質細胞的阻遏信號,刺激基因轉錄.86編輯pptDefinition:

基因的負調控元件，當其結合特異蛋白因子時，對基因轉錄起阻遏作用。〔三〕沉默子〔silencer〕87編輯ppt沉默子是抑制基因轉錄的順式元件。能引起染色質彎曲纏繞，產生類似于異染色質的結構，致使轉錄因子無法與鄰近基因的啟動子相結合，從而使基因處于關閉沉默狀態。有時同一DNA順式元件既能表現出增強子的活性，又能表現出沉默子的活性，這完全取決于與之結合的蛋白質的特性。88編輯ppt〔四〕應答元件(Responseelement)熱激應答元件(heatshockresponseelement，HSE)金屬應答元件(metalresponseelement，MRE)糖皮質激素應答元件(glucor-ticoidresponseelement，GRE)血清應答元件(serumresponseelement，SRE)能與某個〔類〕專一蛋白因子結合，從而控制基因特異表達的DNA上游序列應答元件能被在一些特定情況下表達的調控因子識別89編輯ppt應答元件的特點：1.可以位于啟動子或增強子內2.與轉錄起始點的位置不固定〔多在-200以內;單個功能充分,但多為多拷貝;可位于啟動子/增強子內部〕.3.多基因由同一因子調控〔如：熱激效應〕4.同一基因由多種途徑調控〔如：金屬硫蛋白基因〕.5.各效應元件不管位置如何都有獨立的活化功能.90編輯ppt熱激反響是單一因子調控多個基因的例子在真核生物中，熱激基因有一個保守的共有序列HSE，被轉錄因子HSTF識別。溫度升高時，HSTF的激活使一組熱激基因起始轉錄。HSTF(heatshocktranscriptionfactor):熱休克(基因)轉錄因子91編輯ppt六、真核細胞Ⅱ類基因的轉錄調控因子92編輯ppt93編輯pptDNA結合結構域(DNAbindingdomain)轉錄激活結構域(Transcriptionactivationdomains)自身活性的調控結構域調控因子的結構特性94編輯ppt螺旋-轉角-螺旋〔Helix-turn-helix，HTH〕鋅指結構〔zincfinger〕亮氨酸拉鏈〔leucinezipper〕螺旋-環-螺旋〔helix/loop/helix，HLH〕〔一〕DNA結合結構域〔DNAbindingdomain〕95編輯ppt螺旋-轉角-螺旋〔Helix-turn-helix，HTH〕96編輯ppt識別螺旋，與靶序列DNA的大溝結合97編輯ppt是一種常出現在DNA結合蛋白中的結構基元長約30個aa，其中4個氨基酸〔Cys或2個Cys，2個His〕與一個Zn原子相結合。結構像手指狀。鋅指結構〔zincfinger〕98編輯ppt99編輯ppt

Cys2/Cys2型Cys2/His2型見于甾體激素受體見于SP1，TFⅢA等100編輯ppt含有多個鋅指單元，如SP1有3個，TFⅢA有9個形成α-螺旋而插入DNA的大溝Cys2/His2型101編輯ppt鋅指可以形成α-螺旋而插入DNA的大溝中102編輯ppt甾體激素受體含兩個鋅指Cys2

/Cys2型103編輯pptGlyGlyGlnSer糖皮質激素特異性雌激素特異性104編輯ppt亮氨酸拉鏈〔leucinezipper〕DNA結合蛋白質和其它蛋白質中的一種結構基元(motif)。兩個蛋白質的α-螺旋之間，依靠leu周期性側鏈交錯相插，形成一個穩定的非共價結合的拉鏈結構。可以形成二聚體105編輯ppt亮氨酸拉鏈堿性區106編輯ppt107編輯pptC/EBPJunFosGCN4108編輯ppt具有DNA結合和形成二聚體的功能；可形成兩個α-螺旋，兩個螺旋之間由環狀結構相連；DNA結合功能是由一個較短的堿性區域所決定的。

螺旋-環-螺旋〔helix/loop/helix，HLH〕109編輯ppt110編輯ppt轉錄調控因子〔主要是活化因子〕的主要功能是依賴于轉錄激活結構域進行蛋白質-蛋白質相互作用，控制轉錄起始復合物的形成和調控其活性。一般由DNA結合結構域外的20-100個氨基酸組成〔二〕轉錄激活結構域〔Transcriptionactivationdomains〕111編輯ppt1．酸性結構域(acidicα–helixdomain)也叫做“酸斑〔acidblobs〕〞或“帶負電的長鏈〔negativenoodles〕〞富含酸性氨基酸存在于許多轉錄因子的激活結構域中，如：yeastGcn4andGal4,哺乳動物的糖皮質激素受體的兩個激活結構域112編輯ppt2．富含谷氨酰胺激活結構域(glutamine-richdomain)：富含谷氨酰胺〔SP1，OCT－1，OCT－2，SRF等〕3．富含脯氨酸激活結構域(proline-richdomain)富含脯氨酸有一個能激活轉錄的連續脯氨酸殘基鏈〔AP－2、Jun等〕113編輯ppt配基結合產生的活化誘導物作為配基，與轉錄因子結合，使無活性的轉錄因子改變結構，迅速作出應答反響。酵母的MT基因啟動子ACE1無活性Cu2+ACE1有活性ACE1〔三〕轉錄調控因子自身活性的調控114編輯ppt蛋白質-蛋白質相互作用調控轉錄因子的活性類固醇激素〔如糖皮質激素〕脂溶性的，能夠穿過細胞膜與類固醇激素受體〔轉錄因子〕相互作用。steroidGREInhibitor(HSP90)GlucocorticoidreceptorDissociation,dimerization115編輯ppt在沒有類固醇激素時，該受體與抑制蛋白結合，游離在細胞質中.有類固醇激素時,激素結合到受體上，出來。將其從阻抑物中釋放受體二聚化并轉移到核中。受體與其特異的DNA結合序列結合(應答元件)，從而激活靶基因。116編輯ppt蛋白質的糖基化，如Sp1磷酸化與去磷酸化調控因子的核內定位與DNA的結合活性調控轉錄活性117編輯pptGHGHreceptorJAKJAKPSTATPSTATTargetgeneSTATSTAT細胞因子與受體結合，受體被活化受體二聚化，JAK聚集，受體與JAK在膜上相連鄰近的JAK之間自我磷酸化，并磷酸化受體中的Tyr依靠SH2結構域，STAT蛋白結合于受體的P-TyrSTAT的特定Tyr也被JAK磷酸化STAT二聚化STAT轉移到核內，和特定順式作用元件結合，調節基因轉錄JAK-STATpathway

118編輯ppt1.激活因子的二聚化2.激活因子的遠距離作用3.建構性轉錄因子4.中介因子〔四〕轉錄激活因子的作用方式119編輯ppt結合在DNA上，使DNA調控區的形狀發生改變，以致其他蛋白質能夠相互作用而促進轉錄的蛋白質3.建構性轉錄因子或結構轉錄因子〔architecturaltranscriptionfactor〕120編輯ppt人T細胞受體α鏈〔TCRα〕基因的調控區LEF-1是淋巴組織增強子結合因子〔lymphoidenhancerbindingfactor〕,本身并不能活化TCRα基因的轉錄，它是通過結合到增強子的小溝內，使DNA彎曲約130度而起作用的。121編輯ppt人干擾素〔IFN〕β基因上裝配的增強體結構122編輯ppt很多轉錄激活因子需要一類輔激活子的參與才能發揮激活因子的作用。通過輔激活子使激活因子與轉錄裝置偶聯，激活轉錄。因此又被稱為中介因子4.中介因子(mediator)或輔激活因子〔co-activator〕123編輯pptcAMP應答基因RRCC催化亞基調節亞基蛋白激酶A（PKA）124編輯pptcAMPproductionPKAactivatedPKAtranslocatedintonucleusCREB(cAMPresponseelement-bindingprotein)activatedCREBdimerizedandbindtoCREGeneexpression125編輯ppt與CRE元件偶聯的基因被激活的模型126編輯ppt核受體活化基因的激活模型核受體應答基因CBP直接同核受體的激活結構域相互作用CBP結合于稱為甾體受體輔激活因子〔SRC〕的蛋白質，同時CBP接觸根底轉錄裝置127編輯ppt〔五〕蛋白質調控因子功能的研究方法研究核酸與蛋白質相互作用簡單、快速、敏感的方法。根本原理是蛋白質可以與放射性同位素標記的DNA結合，電泳時這種復合物比無蛋白結合的DNA在凝膠中泳動的速度慢，即表現為相對滯后可用于檢測DNA結合蛋白、RNA結合蛋白，并可通過參加特異性的抗體來檢測特定的蛋白質。電泳遷移后滯分析(electrophoresismobilityshiftassay,EMSA)1.蛋白質與DNA的相互作用128編輯ppt放射性標記的DNA細胞蛋白質提取物B蛋白質結合于DNADNA-蛋白質復合物電泳遷移緩慢放射自顯影滯后帶表明DNA與蛋白質結合EMSA原理圖129編輯ppt用于檢測DNA序列上特定蛋白質結合的位置的實驗技術。優點是可以形象地展示出一種特殊的蛋白質因子同特定DNA片段之間的結合區域。DNaseⅠ足跡實驗〔footprintingassay〕130編輯ppt14810*加入蛋白質X(b)32p1510*(a)32p末端標記DNADNaseI足跡實驗加入DNaseI,凝膠電泳放射自顯影110AB足跡(c)4131編輯ppt共轉錄分析2.轉錄激活活性的檢測①構建含有待測轉錄因子X編碼基因的表達性質粒②構建含有蛋白X結合位點和報告基因的質粒X結合位點報告基因X編碼基因③兩種質粒同時轉染宿主細胞④測定報告基因表達產物蛋白X報告基因表達產物132編輯ppt酵母雙雜交系統〔yeasttwo-hybridassay〕研究蛋白質相互作用的非常有效的