液體雙試劑測定尿酸的臨床應用

排尿是臨床上常用的生化指標。痛、腎、心血管疾病、糖尿病與血清減少有關。因此,尿酸的檢測與分析對臨床診斷、了解病情進展,有重要的參考價值。在日常生化檢驗工作中,我們發現單獨測定尿酸時測定結果比較理想,而在測定完膽堿酯酶(CHE)后緊接著測尿酸,尿酸的檢測結果偏低。筆者懷疑這可能是測試項目間的交叉污染所致,本文作以下探討。1材料和方法1.1材料表面1.1.1試劑3a4eCHE試劑為寧波美康生物科技有限公司提供的液體雙試劑。CHE試劑1(R1):5,5-二硫代-2-硝基苯甲酸2.5×10-4mol/L及磷酸鹽緩沖液(pH7.7)0.1mol/L;試劑2(R2):硫代丁酰膽堿,濃度為0.006mol/L。尿酸(UA)為德賽診斷系統有限公司提供液體雙試劑。UA試劑1(R1):2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸(TBHBA)1mol/L及磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7.0)100mol/L;試劑2(R2):4-氨基安替比林0.3mol/L,鐵氰化鉀10μmol/L,過氧化物酶(POD)≥2000U/L,尿酸酶≥30U/L,及PBS(pH7.0)100mol/L。校準品:德國羅氏診斷有限公司提供。質控品:英國朗道實驗有限公司提供。1.1.2儀器ADVIA1200全自動生化分析儀。運行狀態良好。1.1.3參考參數40份臨床血清標本均無黃疸、無溶血且無脂血,其測定值均在參考范圍內。1.2b有污染因素干擾正常開機清洗管道及比色杯,做UA校正且質控在控。將本次試驗分成8組:Ⅰ組:標準對照組,單獨測定40份標本的UA值(確保無其他因素干擾);Ⅱ組:每份標本先測CHE接著測UA;Ⅲ組:每份標本先測尿素(UREA)再測UA;Ⅳ組:每份標本先測CHE加測不受污染的UREA后再測UA;Ⅴ組:每份標本蒸餾水倍比稀釋后測UA;Ⅵ組:每份標本用CHE的R1試劑倍比稀釋后測UA;Ⅶ組:每份標本用CHE的R2試劑倍比稀釋后測UA;Ⅷ組:更換清洗管道,加強儀器對試劑針、樣品針及比色杯的清洗功能后先測CHE再測UA。1.3統計處理采用SPSS11.5軟件分析,比較采用F檢驗,兩兩比較采用SNK-q檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。2、、、組的檢測結果比較表1與對照組Ⅰ組相比:Ⅱ組的結果明顯降低,差異有統計學意義(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ組的結果差異無統計學意義(P>0.05)。與對照組Ⅴ組相比:Ⅵ組的結果差異無統計學意義(P>0.05),但Ⅶ組的測定結果明顯低于對照組(P<0.05)。結果見表1,2。3試劑攜帶污染由表1可以看出,在ADVIA1200全自動生化分析儀上,UREA對UA的測定無明顯的影響,而CHE對UA的測定有嚴重的干擾。在CHE和UA中間加測UREA后,UA的測定值不受影響,原因可能CHE對UA的交叉污染導致UA結果明顯偏低,而這種污染在加測UREA后又被消除。全自動生化儀代替手工,具有多項目、多樣本、檢測迅速的優點。但是由于共用試劑針、樣本針、比色杯及攪拌棒,測試項目間存在交叉污染,其交叉污染主要表現在:(1)試劑針、樣品針、攪拌棒及比色杯的攜帶污染;(2)前者試劑成分影響后者;(3)前者項目的反應顏色影響后者;(4)前者pH值影響后者pH值反應環境。在本實驗中,CHE和UA的試劑的pH值比較接近,對UA的影響不大。CHE試劑為無色對UA的紅色反應產物無影響。從本次試驗結果可看出:CHE對UA的影響主要是試劑針、樣品針、攪拌棒及比色杯攜帶CHE的R2試劑(硫代丁酰膽堿)對UA測定的干擾。試劑攜帶污染原因:(1)一種試劑中含有另一試驗的測定物質而直接干擾其測試結果;(2)一種試劑中含有改變另一試驗反應條件或影響其反應進程的物質而間接干擾其測試結果。由該試劑引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接干擾。在有試劑污染的情況下,下一個項目所測定的是前后2個項目反應的綜合作用結果。CHE的R2試劑對UA測定干擾就是R2試劑影響UA反應進程。本儀器的反應杯是塑料的,相比石英杯更具吸附污染。在2個測試項目間用去離子水清洗,如清洗不徹底一個項目對緊隨其后的一個或幾個項目測定會帶來一定程度的試劑污染,并且隨著儀器使用時間的累加及儀器狀況的下降,試劑交叉污染的程度會有所加劇,就會影響測試結果的準確性。從表2的Ⅶ組和Ⅴ組數值的比較可以看出CHE的R2試劑使UA的測定結果明顯降低。要消除交叉污染,必須做到:(1)操作人員平時多留心、多觀察,綜合生化分析儀的工作流程、測試項目的反應原理和試劑的組成來考慮,合理設計項目測定順序,把受污染項目放在施污染項目之前測定或者中間插入一個或幾個非污染項目,盡可能避免交叉污染,必要時更換方法及試劑。(2)設置特殊的沖洗程序,從表1中Ⅷ組數值與Ⅰ組數值的比較可以看出,在相鄰項目間增加沖洗次數或使用酸堿液清洗,才能基本消除試劑針攜帶污染的影響。(3)加強儀器的清洗及維護,