結(jié)果用于評價食品的保健作用時，應(yīng)考慮結(jié)果的重復(fù)性和劑量反應(yīng)關(guān)系，并由此找出其最小有作用劑量。4.4食試食試驗3.11.2結(jié)果用于評價食品的保健作用時，應(yīng)考慮結(jié)果的重復(fù)性和劑量反應(yīng)關(guān)系，并由此找出其最小有作用劑量。4.4食試食試驗3.11.2試驗原那么盡可能動物試驗和人體試食試驗相結(jié)合，綜合進(jìn)行評價。3.11.3結(jié)果判定3結(jié)果判定亞急性試驗項目中2項結(jié)果為陽性，那么可判定該受試物對較高劑量一次輻射有拮抗作用。亞慢性或慢量測定血(或組織)中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定組織中脂褐質(zhì)含量測定3.2.1.1.31主題內(nèi)容和適用X圍本程序和檢驗方法規(guī)定了評價食品保健作用的統(tǒng)一程序和檢驗方法。抗輻射、抗突變、抑制腫瘤、調(diào)節(jié)血脂、改善性功能等作用。本程序和檢驗方法規(guī)定了評價食品保健作用的人體試食試驗規(guī)程。2進(jìn)行食品保健作用評價的基本要求2.1.1提供受試物的物理、化學(xué)性質(zhì)(包括化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、穩(wěn)定性等)等有關(guān)資料。2.1.2受試物必須是規(guī)格化的產(chǎn)品，即符合既定的生產(chǎn)工藝、配方及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2.1.3提供受試物安全性毒理學(xué)評價的資料，受試物必須是已經(jīng)過食品安全性毒理學(xué)評價確認(rèn)為安全的物質(zhì)。2.2.1根據(jù)各種試驗的具體要求，合理選擇實驗動物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系動物。2.2.2動物的性別不限，可根據(jù)試驗需要進(jìn)行選擇。動物的數(shù)量的要求為小鼠每組至少10只（單一性別大鼠每組至少8只(單一性別)。動物的年齡可根據(jù)具體試驗需要而定。2.3給受試物的劑量及時間量測定血(或組織)中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定組織中脂褐質(zhì)含量測定3.2.1.1.3大鼠脂代謝紊亂模型法：結(jié)果為陽性時，可初步判定該受試物具有調(diào)節(jié)血脂作用。人體試食試驗陽性，可判定該受陽性，說明該受試物具有耐缺氧作用。3.8抗輻射作用3.8.1試驗項目3.8.1.1亞急性試驗30天存么3.6.1.1減除體現(xiàn)人多余的脂肪，不單純以減輕體重為標(biāo)準(zhǔn)。3.6.1.2每日營養(yǎng)素的攝入量應(yīng)基本2.3.1各種試驗至少應(yīng)設(shè)3量測定血(或組織)中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定組織中脂褐質(zhì)含量測定3.2.1.1.3大鼠脂代謝紊亂模型法：結(jié)果為陽性時，可初步判定該受試物具有調(diào)節(jié)血脂作用。人體試食試驗陽性，可判定該受陽性，說明該受試物具有耐缺氧作用。3.8抗輻射作用3.8.1試驗項目3.8.1.1亞急性試驗30天存么3.6.1.1減除體現(xiàn)人多余的脂肪，不單純以減輕體重為標(biāo)準(zhǔn)。3.6.1.2每日營養(yǎng)素的攝入量應(yīng)基本2.3.2給受試物的時間應(yīng)根據(jù)具體試驗而定，原那么上至少1個月。3試驗項目、試驗原那么及結(jié)果判定小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)抗體生成細(xì)胞檢測血清溶血素測定小鼠碳廓清試驗驗項目動物誘發(fā)性腫瘤試驗動物移植性腫瘤試驗免疫功能試驗NK細(xì)胞活性測定單核－巨噬細(xì)胞功能測定3.103驗項目動物誘發(fā)性腫瘤試驗動物移植性腫瘤試驗免疫功能試驗NK細(xì)胞活性測定單核－巨噬細(xì)胞功能測定3.103試驗項目、試驗原那么及結(jié)果判定3.1免疫調(diào)節(jié)作用3.1.1試驗項目3.1.1.1.1臟器/體重比值體內(nèi)脂肪含量3.6.3試驗原那么在進(jìn)行減肥試驗時，除以上指標(biāo)必測外，還應(yīng)進(jìn)行機(jī)體營養(yǎng)狀況檢測，運動耐量測定血(或組織)中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定組織中脂褐質(zhì)含量測定3.2.1.1.3外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗單向免疫擴(kuò)散法測定IgG、IgA、IgM吞噬與殺菌試驗要求選擇一組能夠全面反映免疫系統(tǒng)各方面功能的試驗，其中細(xì)胞免疫、體液免疫入單核－巨噬細(xì)胞功能三個方面至少各選擇1種試驗，在確保安全的前提下盡可能進(jìn)行人體試食試驗。在一組試驗中，受試物對免疫系統(tǒng)某方面的試驗具有增強(qiáng)作用而對其他試驗無抑制作用，可以判定該受試物具有該方面的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)；對任何一項免疫試驗具有抑制作用可判定該受試物具有免疫抑制效應(yīng)。在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核－巨噬細(xì)胞功能及NK細(xì)胞功能檢測中，如有兩個以上(含兩個)功能檢測結(jié)果陽性，即可判定該受試物具有免疫調(diào)節(jié)作用。項目Ames試驗或V79細(xì)胞基因突變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗3.9.2試驗原那項目Ames試驗或V79細(xì)胞基因突變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗3.9.2試驗原那，可以判定該受試物具有該方面的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)；對任何一項免疫試驗具有抑制作用可判定該受試物具有免疫抑制H-PX)活力測定3.2.1.2人體試食試驗血中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定血中超氧化)200目篩網(wǎng)、24孔培養(yǎng)板，96孔培養(yǎng)板(平底)，手術(shù)器械、二氧化碳培養(yǎng)箱、酶聯(lián)免疫檢測儀、超凈工小鼠生存試驗大鼠生存試驗果蠅生存試驗血(或組織)中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定組織中脂褐質(zhì)含量測定血(或組織)中超氧化物歧化酶(SOD)活力測定血(或組織)中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力測定血中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測定血中超氧化物歧化酶(SOD)活力測定血中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH－PX)活力測定生存試驗，但果蠅種系分類地位與人較遠(yuǎn)，故必須輔助過氧化脂質(zhì)含量測定及抗氧化酶活力測定才能判斷是否具有.2.4NK細(xì)胞活性測定3.1.2試驗原那么要求選擇一組能夠全面反映免疫系統(tǒng)各方面功能的試驗，其中細(xì)酰胺(200mmol/L)生存試驗，但果蠅種系分類地位與人較遠(yuǎn)，故必須輔助過氧化脂質(zhì)含量測定及抗氧化酶活力測定才能判斷是否具有.2.4NK細(xì)胞活性測定3.1.2試驗原那么要求選擇一組能夠全面反映免疫系統(tǒng)各方面功能的試驗，其中細(xì)酰胺(200mmol/L)，青霉素(100U/mL)，鏈霉素(100ug/L)及5×10－5mol/殖反應(yīng)：將脾細(xì)胞懸液加入到96孔培養(yǎng)板中，200ul/孔，每一份脾細(xì)胞懸液分裝6個孔，3孔加ConA衰老機(jī)制比較復(fù)雜，迄今尚無一種公認(rèn)的衰老機(jī)制學(xué)說，因而無單一、簡便、實用的衰老指標(biāo)可供應(yīng)用，應(yīng)采用盡可能多的試驗方法，以保證試驗結(jié)果的可信性。動物試驗，除上述生存試驗，過氧化脂質(zhì)含量測定、抗氧化酶活力測定3個方面各選一項必做外，可能時應(yīng)多選擇一些指標(biāo)(如腦、肝組織中單胺氧化酶(MAO-B)活力測定等)加以輔助。生存試驗是最直觀、最可靠的實驗方法，果蠅具有自下而上期短，繁殖快，飼養(yǎng)簡便等優(yōu)點，通常多選果蠅作生存試驗，但果蠅種系分類地位與人較遠(yuǎn)，故必須輔助過氧化脂質(zhì)含量測定及抗氧化酶活力測定才能判斷是否具有延緩衰老作用。生化指標(biāo)測定應(yīng)選用老齡鼠，除設(shè)老齡對照外，最好同時增設(shè)少齡對照，以比較受試物抗氧化的程度，必要時可將動物試驗與人體試食試驗相結(jié)合綜合評價。若大鼠或小鼠生存試驗為陽性，即可判定該受試物具有延緩衰老的作用。若果蠅生存試驗，過氧化脂質(zhì)和抗氧化酶三項指標(biāo)均為陽性，即可判定該受試物具有延緩衰老的作用。若過氧化脂質(zhì)和抗氧化酶兩項為陽性，可判定該受試物具有抗氧化作用，并提示可能具有延緩衰老作用。跳臺試驗避暗試驗穿梭箱試驗水迷宮試驗韋氏記憶量表術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)解釋。進(jìn)行未列入程序X圍的保健食品功能學(xué)評價時，應(yīng)由保健食品的3結(jié)果判定亞急性試驗項目中術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)解釋。進(jìn)行未列入程序X圍的保健食品功能學(xué)評價時，應(yīng)由保健食品的3結(jié)果判定亞急性試驗項目中2項結(jié)果為陽性，那么可判定該受試物對較高劑量一次輻射有拮抗作用。亞慢性或慢么可判定該受試物具有抑制腫瘤的作用。3.11調(diào)節(jié)血脂作用3.11.1試驗項目大鼠脂代謝紊亂模型法人體抗氧化酶活力測定血(或組織)中超氧化物歧化酶(SOD)活力測定血(或組織)中谷胱甘肽過氧化物酶(GS3.3.2.1試驗應(yīng)通過訓(xùn)練前、訓(xùn)練后及重測驗前3種不同的給予受試物方法觀察其對記憶全過程(記憶的獲得、記憶鞏固、記憶再現(xiàn))的影響。3.3.2.3人體試食試驗為必做項目，并應(yīng)在動物試驗有效的前提下進(jìn)行。3.3.2.4除上述試驗項目外，還可以選用嗅覺厭惡試驗、味覺厭惡試驗、操作式條件反射試驗，連續(xù)強(qiáng)化程序試驗、比率程序試驗、間隔程序試驗。動物試驗2項或2項以上的指標(biāo)為陽性，且2次或2次以上的重復(fù)測試結(jié)果一致，可以認(rèn)為該受試物具有改善該類動物記憶作用；若人體試食試驗結(jié)果陽性，那么可認(rèn)為該受試物具有改善人體記憶作用。3.4促進(jìn)生長發(fā)育作用況。3.1.1.2儀器和材料RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2－巰基乙醇(2－ME)、青霉素、況。3.1.1.2儀器和材料RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2－巰基乙醇(2－ME)、青霉素、組和1個對照組。3個劑量組中，其中1個劑量應(yīng)相當(dāng)于人推薦攝入量的10倍左右。3實驗方法3.1ConA3結(jié)果判定亞急性試驗項目中2項結(jié)果為陽性，那么可判定該受試物對較高劑量一次輻射有拮抗作用。亞慢性或慢料提示對人有保健作用時，在保證安全的前提下，應(yīng)進(jìn)行必要的人體試食試驗。4.3在將本程序所列試驗的陽性3.4.2.1給受試物的時間可根據(jù)具體情況選擇在母鼠孕期或哺乳期至成年期。在胎仔情況、體重及食物利用率、生理發(fā)育、神經(jīng)反射4類指標(biāo)中有3類以上(含3類)指標(biāo)為陽性，可認(rèn)為受試物有促進(jìn)生長發(fā)育的作用。負(fù)重游泳試驗爬桿試驗血乳酸血清尿素氮運動試驗與生化指標(biāo)檢測相結(jié)合。在進(jìn)行游泳或爬桿試驗前，動物應(yīng)進(jìn)行初篩。除以上生化指標(biāo)外，還可檢測血糖、乳酸膠氫酶、血紅蛋白以及磷肌酸等指標(biāo)。及食物利用率、生理發(fā)育、神經(jīng)反射4類指標(biāo)中有3類以上(含及食物利用率、生理發(fā)育、神經(jīng)反射4類指標(biāo)中有3類以上(含3類)指標(biāo)為陽性，可認(rèn)為受試物有促進(jìn)生長發(fā)育分離、門齒萌出、開眼、長毛時間、陰道開放、睪丸下降時間。3.4.1.4神經(jīng)反射指標(biāo)平面翻正、前肢抓力光密度值。也可將溶解液直接移入1mL比色杯中，在721分光光度計上比色測定，波長570nm。3.1.力測試以及與健康有關(guān)的其它指標(biāo)的觀察。人體試食試驗為必做項目，動物試驗與人體試食試驗相結(jié)合，綜合進(jìn)行若1項以上(含1項)運動試驗和2項以上(含2項)生化指標(biāo)為陽性，即可以判斷該受試物具有抗疲勞作用。體重體內(nèi)脂肪重量(睪丸及腎周圍脂肪墊)體重，體重指數(shù)，腰圍，腹圍，臀圍體內(nèi)脂肪含量標(biāo)的觀察。人體試食試驗為必做項目，動物試驗與人體試食試驗相結(jié)合，綜合進(jìn)行評價。)200目篩網(wǎng)、24孔培養(yǎng)板，96孔培養(yǎng)板()200目篩網(wǎng)、24孔培養(yǎng)板，96孔培養(yǎng)板(平底)，手術(shù)器械、二氧化碳培養(yǎng)箱、酶聯(lián)免疫檢測儀、超凈工用受試物的效應(yīng)資料，若體外或體內(nèi)動物試驗未觀察到或不易觀察到食品的保健效應(yīng)或觀察到不同效應(yīng)，而有關(guān)資in(1000r/min)。然后將細(xì)胞懸浮于2mL的完全培養(yǎng)液中，用臺酚蘭染色計數(shù)活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95么可判定該受試物具有抑制腫瘤的作用。3.11調(diào)節(jié)血脂作用3.11.1試驗項目大鼠脂代謝紊亂模型法人體在動物試驗中，體重及體內(nèi)脂肪墊2個指標(biāo)均陽性，并且對機(jī)體健康無明顯損害，即可初步判定該受試物具有減肥作用。在人體試食試驗中，體內(nèi)脂肪量顯著減少，且對機(jī)體健康無明顯損害，可判定該受試物具有減肥作用。小鼠常壓耐缺氧實驗?zāi)腿毖鯇嶒炾栃裕f明該受試物具有耐缺氧作用。30天存活率或平均存活時間白細(xì)胞總數(shù)小鼠睪丸染色體畸變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗項目Ames試驗或V79細(xì)胞基因突變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗項目Ames試驗或V79細(xì)胞基因突變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗3.9.2試驗原那結(jié)果用于評價食品的保健作用時，應(yīng)考慮結(jié)果的重復(fù)性和劑量反應(yīng)關(guān)系，并由此找出其最小有作用劑量。4.4食活率或平均存活時間白細(xì)胞總數(shù)3.8.1.2亞慢性或慢性試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗試驗體重體內(nèi)脂肪重量(睪丸及腎周圍脂肪墊)3.6.2.2人體試食試驗體重，體重指數(shù)，腰圍，腹圍，臀圍亞急性試驗項目中2項結(jié)果為陽性，那么可判定該受試物對較高劑量一次輻射有拮抗作用。亞慢性或慢性試驗中2項結(jié)果為陽性，那么可判定該受試物對小劑量多次輻射有拮抗作用。Ames試驗或V79細(xì)胞基因突變試驗小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗小鼠睪丸染色體畸變試驗Ames試驗與V79細(xì)胞基因突變試驗任選一項，采用體內(nèi)與體外試驗相結(jié)合的原那么。抗突變?nèi)椩囼炛杏袃身棡殛栃詴r，那么可判定該受試物具有抗突變作用。動物誘發(fā)性腫瘤試驗動物移植性腫瘤試驗L的2－巰基乙醇，用無菌的1mol/LL的2－巰基乙醇，用無菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH調(diào)pH至7.0－7.2，即完全％以上)，最后RPMI1640完全培養(yǎng)液將細(xì)胞數(shù)調(diào)成5×105個/mL。3.1.2.3.2淋巴細(xì)胞增，可以判定該受試物具有該方面的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)；對任何一項免疫試驗具有抑制作用可判定該受試物具有免疫抑制孔培養(yǎng)板(平底)，手術(shù)器械、二氧化碳培養(yǎng)箱、超凈工作臺、液體閃爍儀、多頭細(xì)胞取集器、49型玻璃纖維濾NK細(xì)胞活性測定單核－巨噬細(xì)胞功能測定動物誘發(fā)性腫瘤試驗及動物移植性腫瘤試驗兩項中任選一項，同時必做2項免疫功能試驗動物誘發(fā)性腫瘤試驗及動物移植性腫瘤試驗兩項試驗中有一項為陽性，并且對免疫功能無抑作用，那么可判定該受試物具有抑制腫瘤的作用。大鼠脂代謝紊亂模型法人體試食試驗盡可能動物試驗和人體試食試驗相結(jié)合，綜合進(jìn)行評價。大鼠脂代謝紊亂模型法：結(jié)果為陽性時，可初步判定該受試物具有調(diào)節(jié)血脂作用。人體試食試驗陽性，可判定該受試物對人體具有調(diào)節(jié)血脂作用。2人體試食試驗韋氏記憶量表臨訂記憶量表3.3.2試驗原那么3.3.2.1試驗應(yīng)通過訓(xùn)練前、訓(xùn)練后及重紙。2人體試食試驗韋氏記憶量表臨訂記憶量表3.3.2試驗原那么3.3.2.1試驗應(yīng)通過訓(xùn)練前、訓(xùn)練后及重紙。3.1.2.3實驗步驟3.1.2.3.1脾細(xì)胞懸液制備無菌取脾，置于盛有適量無菌Hanks液的小抗突變?nèi)椩囼炛杏袃身棡殛栃詴r，那么可判定該受試物具有抗突變作用。3.10抑制腫瘤作用3.10.1試胸腺/體重比值脾臟/體重比值3.1.1.1.2細(xì)胞免疫功能測定小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)3大鼠交配試驗小鼠交配試驗對性功能的維持具有重要意義，必要時可對血清睪酮水平進(jìn)行測定。交配試驗(大、小鼠交配試驗任選一項)或勃起試驗中有一項試驗結(jié)果為陽性，即可判定該受試物具有改善性功3.13人體試食試驗規(guī)程4評價食品保健作用時需要考慮的因素4.1人的可能攝入量除一般人群的攝入量外，還應(yīng)考慮特殊的和敏感的人群(如兒童、孕婦及高攝入量人群)。4.2人體資料由于存在著動物與人之間的種屬差異、在將動物試驗結(jié)果外推到人時，應(yīng)盡可能收集人群服用受試物的效應(yīng)資料，若體外或體內(nèi)動物試驗未觀察到或不易觀察到食品的保健效應(yīng)或觀察到不同效應(yīng)，而有關(guān)資料提示對人有保健作用時，在保證安全的前提下，應(yīng)進(jìn)行必要的人體試食試驗。試物具有延緩衰老的作用。若過氧化脂質(zhì)和抗氧化酶兩項為陽性，可判定該受試物具有抗氧化作用，并提示可能具項或2項以上的指標(biāo)為陽性，且2次或2次以上的重復(fù)測試結(jié)果一致，可以認(rèn)為該受試物具有改善該類動物記憶作3動物應(yīng)達(dá)到二級實驗動物的要求。2.3給受試物的劑量及時間2.3.1試物具有延緩衰老的作用。若過氧化脂質(zhì)和抗氧化酶兩項為陽性，可判定該受試物具有抗氧化作用，并提示可能具項或2項以上的指標(biāo)為陽性，且2次或2次以上的重復(fù)測試結(jié)果一致，可以認(rèn)為該受試物具有改善該類動物記憶作3動物應(yīng)達(dá)到二級實驗動物的要求。2.3給受試物的劑量及時間2.3.1各種試驗至少應(yīng)設(shè)3個劑量組，1個目，并應(yīng)在動物試驗有效的前提下進(jìn)行。3.3.2.4除上述試驗項目外，還可以選用嗅覺厭惡試驗、味覺厭惡4.4食品保健作用的檢測及評價應(yīng)由衛(wèi)生部認(rèn)定的保健食品功能學(xué)檢驗機(jī)構(gòu)承擔(dān)。附加說明--------------------------------------------------------------------------------本程序和檢驗方法由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。本程序和檢驗方法由衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法》起草小組負(fù)責(zé)起草。本程序和檢驗方法由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所負(fù)責(zé)解釋。進(jìn)行未列入程序X圍的保健食品功能學(xué)評價時，應(yīng)由保健食品的研制生產(chǎn)者提出檢驗及評價方法，經(jīng)保健食品功能學(xué)檢驗機(jī)構(gòu)驗證及衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所組織專家評審，報衛(wèi)生部批準(zhǔn)后方可列入本程序。本程序中無明確判定方法的人體試食試驗結(jié)果，可由負(fù)責(zé)試驗單位組織專家組(至少五人)，按本程序提出的原那么要求共同予以評價，并提出判定結(jié)果。免疫調(diào)節(jié)作用檢驗方法動物試驗1實驗動物選用小鼠。推薦使用近近交系小鼠，如C57BL/6J、BALB/C等，6－8周齡，18－22g，雌雄均可，數(shù)量為單一性別每組至少10只。定小鼠碳廓清試驗小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗3.1.1.1.5NK細(xì)胞活性測定3.1.1.2人體L的2－巰基乙醇，用無菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH調(diào)pH至7.0－7.2，即完全清睪酮水平進(jìn)行測定。3.12.3結(jié)果判定交配試驗(大、小鼠交配試驗任選一項)或勃起試驗中有一項試驗結(jié)取集于玻璃纖維濾紙上。濾紙片充分干燥后置測量瓶中，加入7mL閃爍液，用液閃儀測定每分鐘脈沖數(shù)(cpm定小鼠碳廓清試驗小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗3.1.1.1.5NK細(xì)胞活性測定3.1.1.2人體L的2－巰基乙醇，用無菌的1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH調(diào)pH至7.0－7.2，即完全清睪酮水平進(jìn)行測定。3.12.3結(jié)果判定交配試驗(大、小鼠交配試驗任選一項)或勃起試驗中有一項試驗結(jié)取集于玻璃纖維濾紙上。濾紙片充分干燥后置測量瓶中，加入7mL閃爍液，用液閃儀測定每分鐘脈沖數(shù)(cpm3實驗方法3.1ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗可任選下列方法之一當(dāng)T淋巴細(xì)胞受ConA、PHA等致分裂原或特異性抗原刺激后發(fā)生母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，活細(xì)胞特別是增殖細(xì)胞通過線粒體水解酶將MTT(一種淡黃色的唑氮鹽)分解為蘭紫色的甲(formaZan)結(jié)晶而顯色，其光密度值能夠反映細(xì)胞的增殖情況。RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液、小牛血清、2－巰基乙醇(2－ME)、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A(ConA)、鹽酸、異完全培養(yǎng)液RPMI1640培養(yǎng)液過濾除菌，用前加入10％小牛血清，1％谷氨酰胺(200mmol/L)，青霉素(100體內(nèi)脂肪含量3.6.3試驗原那么在進(jìn)行減肥試驗時，除以上指標(biāo)必測外，還應(yīng)進(jìn)行機(jī)體營養(yǎng)狀況檢測，運動耐培養(yǎng)液。ConA液用雙蒸水配制成100ug/mL的溶液，過濾除菌，在低溫冰箱(－20℃)保存。無菌H的作用。3.5抗疲勞作用3.5.1體內(nèi)脂肪含量3.6.3試驗原那么在進(jìn)行減肥試驗時，除以上指標(biāo)必測外，還應(yīng)進(jìn)行機(jī)體營養(yǎng)狀況檢測，運動耐培養(yǎng)液。ConA液用雙蒸水配制成100ug/mL的溶液，過濾除菌，在低溫冰箱(－20℃)保存。無菌H的作用。3.5抗疲勞作用3.5.1試驗項目負(fù)重游泳試驗爬桿試驗血乳酸血清尿素氮肝/肌糖原測定3.5.么可判定該受試物具有抑制腫瘤的作用。3.11調(diào)節(jié)血脂作用3.11.1試驗項目大鼠脂代謝紊亂模型法人體無菌Hanks液用前以3.5％的無菌NaHCO3調(diào)pH7.2－7.4。MTT液將5mgMTT溶于1mLpH7.2的PBS中，現(xiàn)配現(xiàn)用。酸性異丙醇溶液96mL異丙醇中加入4mL1mo1/L的HC1，臨用前配制。無菌取脾，置于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中，用鑷子輕輕將脾撕碎，制成單個細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，用Hanks液洗3次，每次離心10min(1000r/min)。然后將細(xì)胞懸浮于2mL的完全培養(yǎng)液中，用臺酚蘭染色計數(shù)活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95％以上)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106個/mL。將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1mL，一孔加50ulConA液(相當(dāng)5ug/mL)，另一孔作為對照，置5％CO2，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/mL)50u1/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1mL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后分裝到96孔培養(yǎng)板中，每個孔分裝3～6孔作為平行樣，用酶聯(lián)免疫檢測儀，以570nm波長測定光密度值。也可將溶解液直接移入1mL比色杯中，在721分光光度計上比色測定，波長570nm。一般采用方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力，受試物組的光密度值顯著