人類染色體標本的制備及G顯帶核型分析安徽醫科大學基礎醫學院生物學教研室[目的和要求]1.掌握染色體標本的制備方法和G顯帶技術。2.熟悉人類外周血淋巴細胞的培養方法及G顯帶染色體的核型分析技術。[實驗原理]

染色體作為細胞遺傳信息的載體，出現于有絲分裂期。用于人類染色體標本制備的材料可為骨髓細胞、外周血淋巴細胞、絨毛細胞、羊水細胞等。其中最簡便的就是抽取少量外周靜脈血進行短期培養，經秋水仙素處理（秋水仙素可阻斷有絲分裂期細胞中微管的聚集，使紡錘體不能形成，從而使有絲分裂停滯在中期時相，此時染色體具有最典型的形態），再經低滲、固定等處理，獲得更多的中期分裂相以用于核型分析。染色體的帶紋是染色體標本經過特殊處理后，每條染色體上沿縱軸顯示出的一定數量、著色程度不同、寬窄不等的橫紋。染色體帶是染色體固有的、穩定的特征。染色體G顯帶是多種顯帶技術中的一種，是將染色體標本經胰蛋白酶處理后再用吉姆薩（Giemsa）染液染色。G顯帶技術因其方法簡便，重復性好，帶紋清晰且可長期保存而應用最為廣泛。核型是指一個體細胞有絲分裂中期的所有染色體，并按其大小、形態特征順序排列所構成的圖像。每一個體細胞含有兩組同樣的染色體，用2n表示。染色體核型分析是細胞遺傳學的重要研究手段，在臨床多種疾病如染色體病、白血病、腫瘤等的診斷及研究中具有重要意義。人類體細胞的正常核型組染色體號主要特征A組B組C組D組E組F組G組

123亞中著絲粒染色體中央著絲粒染色體4————5亞中著絲粒染色體、無隨體6————12、X亞中著絲粒染色體大小13————15近端著絲粒染色體、有隨體161718亞中著絲粒染色體中央著絲粒染色體19————20中央著絲粒染色體21————22、Y近端著絲粒染色體、有隨體Y染色體略大、長臂平行伸展、無隨體基因組與核型基因組：生物體內單倍體染色體組成叫做生物體的基因組(genome)，它代表了一個生物體染色體中儲存的全部遺傳信息。顯帶染色體：pq3211234643215213121212354121324用特殊的染色方法使染色體沿其長軸顯示出明暗交替或染色深淺不同的橫紋——帶。正常男性：46，XY正常女性：46，XX正常人體細胞染色體帶型模式圖[實驗用品]1．器具：采血器具、超凈工作臺、培養瓶、恒溫培養箱、恒溫水浴鍋、10ml刻度離心管、低速離心機、量筒、載玻片、托盤天平、光學顯微鏡、染缸、電吹風、酒精燈、剪刀、膠水。2．材料：人外周靜脈血。3．試劑：RPMI-1640培養液、小牛血清、肝素、植物血凝素（PHA）、秋水仙素(20μg/ml)、0.075mol/L氯化鉀低滲液、0.85%生理鹽水、固定液（甲醇:冰醋酸=3:1，現配現用）、Giemsa原液、0.25%胰蛋白酶溶液、磷酸鹽緩沖液。[實驗步驟](一)人類外周血染色體標本的制備1．采集人外周靜脈血1ml，迅速與適量肝素混勻抗凝。2.超凈工作臺內將抗凝血加入RPMI-1640培養液中，每瓶加0.3～0.5ml全血。輕輕混勻。3.37℃恒溫培養箱靜置培養72h左右（培養24h后水平輕搖培養瓶一次，以懸浮混勻血細胞）。4.培養至68～72h（即終止培養前2～4h），每瓶加秋水仙素(20μg/ml)至終濃度0.1～0.2μg/ml，輕搖培養瓶混勻，繼續培養2～4h。5.終止培養，將培養物吹打混勻后轉移到10ml玻璃離心管，配平，1800rpm離心6min。6.低滲棄上清。加入37℃預溫的0.075mol/L氯化鉀8ml，吸管輕輕吹打混勻，37℃低滲處理20min。7.預固定加入1ml新鮮配制的固定液（甲醇:冰醋酸=3:1），輕輕混勻，1800rpm離心6min。8.固定：棄上清，加入上述新鮮固定液8ml，輕輕混勻，室溫下靜置固定20min。9.棄上清，重復固定1次。10.棄上清，根據沉淀量多少加入適量滴數新鮮固定液，輕輕混勻