中藥復方制烏頭的歷史沿革、化學成分及藥理作用研究

何首烏是蓼科植物的一種干燥的腫瘤根，味苦甘甜澀味，性平熱于肝、心、腎經。具有清熱解毒、消瘀、瘧疾、潤腸排便等功效。具有補肝、腎、精血、黑素發、肌肉骨骼、稀釋、降脂等功效。目前臨床多采用制何首烏入藥。筆者現從何首烏炮制歷史沿革、炮制工藝、炮制前后化學成分及藥理作用研究等幾個方面對其綜述如下。1加輔料制、藥汁制幾種大類刑罰試驗裝置何首烏歷代炮制方法有凈制、切制、不加輔料制、加輔料制、藥汁制幾大類20多種炮制方法,其炮制歷史沿革見表1?，F今常用的僅有凈制、切制和加輔料黑豆蒸制,其他炮制方法多未沿用。2制備工藝對麻黃病的凈化作用2.1.1切制趙氏等以吸水率為指標,采用旋轉響應表面試驗設計對何首烏飲片潤制工藝進行研究,結果飲片潤制過程中吸水率達51%時達到潤漲要求,適宜的室溫潤制工藝為何首烏∶潤制用水量=1∶1,潤制時間12h,適宜的加熱潤制工藝為何首烏∶潤制用水量=1∶1,潤制溫度71℃,潤制時間131min。2.1.2炮制方法范氏等對燉制和蒸制2種方法炮制的何首烏進行薄層色譜(TLC)定性鑒別和HPLC含量測定,燉制法炮制的何首烏中游離大黃素及2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷含量均高于蒸制法,經TLC檢測,采用蒸制法炮制的何首烏中各種成分基本隨水蒸氣流失。李氏等通過偏光顯微鏡觀察淀粉粒在何首烏炮制過程中的變化,并比較何首烏各炮制品中的蒽醌類成分、總糖、卵磷脂、二苯乙烯苷、水溶性浸出物的含量。以反復蒸曬7次含量最高,隨后各成分的含量有所下降,確定何首烏作為補益藥應用時,采用七蒸七曬炮制品較好。2.1.3炮制時間任氏等將何首烏分別采用黑豆汁拌蒸0、2、4、6、8、10h和傳統工藝(九蒸九曬)炮制后,用高效液相色譜法(HPLC)測定炮制飲片中二苯乙烯苷的含量,結果不同炮制工藝的飲片中二苯乙烯苷含量順序為傳統工藝炮制品>生品>黑豆汁拌蒸品。用黑豆汁拌蒸,二苯乙烯苷的含量先逐漸上升而后下降,以6h為峰,說明應規范何首烏飲片的炮制時間。張氏等以二苯乙烯苷的含量為指標,采用正交試驗法對炮制工藝進行優選研究,結果顯示蒸制時間48h為最佳條件。田氏等以何首烏中二苯乙烯苷、多糖、大黃素的含量為指標,采用正交設計綜合評分法優化黑豆汁燉何首烏的工藝,結果優化所得工藝為燉36h、干燥9h、干燥溫度80℃。羅氏等用硫酸-苯酚法測定何首烏及其炮制品中還原性糖、水溶性糖和多糖的含量,結果何首烏炮制后均較生品含糖量高,并確定清蒸何首烏最佳條件為蒸制35h、100℃干燥。趙氏等以結合蒽醌的量和淀粉糊化程度為指標,研究120℃下長、寬、高在0.8~1cm粒狀何首烏和切片厚度在2~4mm厚片何首烏常用2種規格飲片的清蒸工藝,顯示粒狀蒸制6h最佳,片狀蒸制4h最佳。陳氏等通過觀察制何首烏不同蒸制時間對小鼠耳殼急性炎癥腫脹的影響,尋找黑豆汁拌蒸何首烏最佳蒸制時間,結果確定以黑豆汁制10h為抗炎作用最佳蒸制時間。2.1.4炮制輔料解氏等采用HPLC和分光光度計對清蒸和黑豆汁蒸何首烏中有效成分進行比較分析,結果清蒸和黑豆汁蒸何首烏中蒽醌和二苯乙烯苷無明顯差別,認為用清蒸代替黑豆汁蒸是可行的。張氏等以何首烏中二苯乙烯苷、游離蒽醌的含量為指標,考察不同炮制方法(黑豆汁蒸制、黑豆汁煮制、甘草煮制)對何首烏成分的影響,結果表明甘草制何首烏中二苯乙烯苷含量較高,其他略低于生品,游離蒽醌含量均降低,建議制何首烏的炮制方法以黑豆汁蒸或煮8h及甘草煮為好。2.2微波制備工藝及設備研究2.2.1高壓蒸制丘氏等采用正交設計,以水浸出物、二苯乙烯苷、水溶性糖含量為指標優化何首烏高壓炮制工藝,比較高壓炮制品與傳統炮制品各指標含量、HPLC指紋圖譜、不同分子量糖百分含量比的差異,結果高壓炮制何首烏影響因素大小依次為蒸制溫度>蒸制時間>干燥溫度,高壓炮制法和傳統炮制法熱動力過程不同,所炮制的何首烏無論是醇溶性成分變化還是多糖分子量變化都存在差異。因此認為,高壓炮制法能否代替傳統炮制法尚需藥效學的進一步驗證。李氏等用偏光顯微鏡觀察了淀粉粒在何首烏炮制過程中的變化,并比較何首烏各炮制品的蒽醌類成分、總糖、卵磷脂、二苯乙烯苷、水溶性浸出物的含量,認為何首烏作為補益藥應用時采用高壓蒸7h炮制品較好。許氏等用不同輔料(豆、酒、酒豆、不加輔料)潤制何首烏,再用高壓方法炮制,時間為4、6、8、10h,考察高壓炮制方法對二苯乙烯苷和卵磷脂的影響,優選何首烏炮制工藝,以卵磷脂與二苯乙烯苷為考察指標,結果高壓豆制品>高壓酒制品>高壓酒豆制品>高壓清蒸品,建議采用高壓豆制4h方法炮制何首烏。2.2.2微波炮制李氏等考察了微波干燥和炮制新鮮何首烏的工藝條件,并與傳統炮制方法相比較,采用正交設計,以二苯乙烯苷含量為指標優化微波干燥和炮制新鮮何首烏的工藝條件,確定最佳優選條件為火力60%、加熱時間3min、藥材堆積厚度3cm。結果表明,何首烏經短暫的微波加熱后,二苯乙烯苷的含量較傳統方法所得的炮制品及生品均高,且失水率達50%左右,表明微波技術在干燥和炮制新鮮何首烏方面是可行的。韋氏等采用正交試驗法,以失水率和密度比研究微波對何首烏的干燥和膨化作用,同時以紫外分光光度法測定游離蒽醌和結合蒽醌含量,優化微波炮制何首烏的最佳工藝條件,結果顯示,微波炮制何首烏最佳工藝條件為微波功率60%、炮制時間5min、藥材鋪疊厚度2cm,微波用于新鮮何首烏藥材的快速干燥和膨化效果均較好,但對于降低結合蒽醌含量并不明顯,表明微波用于何首烏炮制的可行性還有待進一步研究。2.2.3發酵方法YuJ等通過比較何首烏生品、傳統炮制品與發酵炮制品的抗氧化活性及致瀉不良反應的差異,發現各種炮制方法均可顯著降低何首烏的致瀉作用,其中用發酵品可顯著降低何首烏致稀便的次數及時間,發酵品的抗氧化活性強于傳統方法炮制的何首烏,利用米根霉發酵得到的何首烏可在降低致瀉作用的同時最大程度地保留何首烏的抗氧化活性,表明該發酵法可成為何首烏炮制方法中新的研究方向。杜氏等采用HPLC考察了何首烏微生物發酵前后二苯乙烯苷類和蒽醌類化學成分的變化,發現何首烏經米根霉發酵后產生了新的蒽醌類成分大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,而二苯乙烯苷類成分無變化;藥理研究發現,大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對家兔腸平滑肌的收縮作用弱于大黃素。這表明在何首烏發酵炮制過程中,米根霉可催化大黃素轉化為大黃素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,從而降低何首烏的瀉下作用,該結果也初步驗證了微生物發酵炮制何首烏的科學性。與此同時,采用HPLC和紫外可見分光光度法(UV)對不同菌株發酵的何首烏樣品及其發酵前后的化學成分進行比較分析,通過篩選發現米根霉、菌株YMS-006具有專一性降解蒽醌類成分而不破壞二苯乙烯苷的能力,獲得了具有發酵炮制作用的菌株。石氏等采用經微生物發酵后的何首烏藥材分別通過乙酸乙酯和正丁醇提取,并對提取物進行硅膠柱正相分離方法得到化學成分,結果在發酵何首烏中通過光譜分析法鑒定得到6個化學成分,化學成分與生何首烏相比沒有發生明顯的變化。劉氏等采用HPLC梯度洗脫的方法測定了不同何首烏的特征圖譜,結果發酵何首烏與同一來源的何首烏、制何首烏之間相關性較好,化學成分總體相似,未發現新成分。秦氏將發酵何首烏和藥典所收載的炮制品種以及何首烏的地上與地下部分進行了系統研究,對發酵何首烏性狀、鑒別、檢查、含量測定等質量控制項進行了研究,建立了TLC鑒別方法;對水分、灰分、總鞣質作了檢查,建立了二苯乙烯苷、游離蒽醌的HPLC含量測定方法,擬定了發酵何首烏質量標準。2.2.4膨化方法郭氏等利用醋酸鎂比色法分別測定膨化前后何首烏中游離和結合蒽醌的含量,結果膨化使何首烏中游離和結合蒽醌的含量都有所下降,但后者比前者下降更明顯,表明從何首烏炮制的目的來說擠壓膨化可以用于何首烏的炮制加工。朱氏等采用HPLC測定何首烏膨化前后樣品溶液中大黃素含量,結果何首烏膨化后大黃素含量降低了0.0108%,相對降低27.48%。這表明膨化技術會降低何首烏中大黃素含量,膨化作為一種新型的中藥材加工方法并不適用于何首烏。3配方中各成分的作用何首烏的化學成分主要有蒽醌類、二苯乙烯苷類、糖類、卵磷脂、鞣質及微量元素等,炮制對各成分均有一定影響,包括已知成分的含量變化和新成分的產生。3.1張結合劑對玉米中化學成分的影響2010年版《中華人民共和國藥典》以二苯乙烯苷和結合蒽醌的含量控制生何首烏的質量,二苯乙烯苷和游離蒽醌的含量控制制何首烏的質量,其中二苯乙烯苷的含量生何首烏不得少于1.0%,制何首烏不得少于0.70%。生何首烏含結合蒽醌以大黃素(C15H10O5)和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量計,不得少于0.05%;制何首烏含游離蒽醌以大黃素(C15H10O5)和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量計,不得少于0.10%。張氏等采用紫外分光光度法,以0.5%醋酸鎂-甲醇溶液顯色測定蒽醌含量,采用HPLC測定大黃素的含量。結果炮制后,何首烏中結合蒽醌類成分明顯降低,總蒽醌類含量有所升高,結合蒽醌占總蒽醌的比例明顯降低;結合大黃素含量明顯降低,總大黃素含量有所升高,結合大黃素占總大黃素的比例明顯降低。史氏采用UV測定何首烏炮制前后蒽醌類和二苯乙烯苷的含量變化,結果制何首烏中游離蒽醌的含量略高于生何首烏,而結合蒽醌的含量生何首烏則明顯高于制何首烏;二苯乙烯苷的含量生何首烏高于制何首烏。張氏等采用HPLC對何首烏中5種主要化學成分大黃素、大黃素甲醚、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷以及2,3,5,4’-四羥基反式二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量在炮制過程中不同時間的動態變化進行研究,結果所測5種成分的含量均明顯降低。陳氏等采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定制何首烏中化學成分含量的動態變化,結果2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷隨著炮制時間的延長,其含量呈下降趨勢;游離蒽醌類物質大黃素與大黃素甲醚,炮制后均比炮制前高,且都在炮制后32h達最高峰。王氏等采用HPLC測定生何首烏、清蒸制何首烏和黑豆制何首烏中大黃素和二苯乙烯苷含量,并分別對其含量進行比較,發現生何首烏中二苯乙烯苷含量顯著高于制首烏,而制何首烏中大黃素含量顯著高于生何首烏。一般認為,炮制使何首烏中的部分結合蒽醌苷類分解生成游離蒽醌,而降低了其瀉下作用。3.2不同碳量玉米糖和雙糖含量對糖品品質的影響劉氏等采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測法(HPLC-ELSD)測定何首烏炮制過程中單糖和雙糖含量的變化,結果隨炮制時間的延長,何首烏中的單糖D-葡萄糖含量逐漸升高,D-果糖含量逐漸降低,雙糖蔗糖含量逐漸降低,其總量也逐漸降低,表明何首烏在炮制過程中單糖和雙糖含量不斷變化。趙氏等用硫酸-苯酚法測定制何首烏飲片總糖含量,結果清蒸品的總糖含量高于黑豆汁拌蒸品,隨蒸制時間、蒸制溫度的增加,制何首烏的總糖增加。丘氏等采用硫酸-蒽酮比色法測定何首烏及其炮制品中水溶性總糖、單糖-低聚糖、多糖的含量,結果何首烏炮制后水溶性總糖含量升高,其中單糖-低聚糖、多糖均有所增加,以多糖含量增加為主。3.3不同處理對兒茶素含量的影響劉氏等用皮粉法測定何首烏炮制品中的鞣質含量,結果鞣質含量隨炮制時間延長而逐漸下降;進一步通過HPLC測定何首烏不同炮制品中沒食子酸和兒茶素含量,發現兒茶素含量隨炮制時間的延長呈現降低趨勢至16h檢測不到,而沒食子酸含量隨炮制時間的延長逐漸升高至40h最高,然后在48h含量降低。說明何首烏炮制前后沒食子酸和兒茶素的含量發生明顯變化。采用黑豆汁蒸法、黑豆汁燉法和清蒸法炮制相同時間,2種成分含量無明顯差異,而與高壓蒸法比較差異明顯。陳氏等采用RP-HPLC觀察制何首烏中沒食子酸在炮制時間變化過程中含量的動態變化,發現沒食子酸炮制后含量明顯增加,但隨著炮制時間延長其含量變化不大。3.4認同地面炮的質量指標周氏等采用鉬藍-分光光度法測定何首烏炮制過程中磷脂的含量,方法簡便、靈敏、專屬性強,為何首烏及其不同炮制品的質量評價提供了有效的方法。趙氏等用鉬藍比色法測定制何首烏飲片的磷脂含量,結果顯示,黑豆汁拌蒸品的磷脂含量高于清蒸品,隨蒸制時間、蒸制溫度的增加,制何首烏中磷脂減少。3.5藥質量前后微量元素的總量及溶出特性金氏等應用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)技術對中藥炮制前后18種微量元素的總量及溶出特性的改變進行考察,黃芪、大黃、黃芩、地黃、何首烏炮制后,微量元素的溶出率總體呈現上升趨勢。提示中藥炮制可改變微量元素的總量和溶出特性。3.6新產生成分ddmp和5-二羥基-4-化合物ddmp、3,5-二羥基-4-化合物ddmp、h通過對制何首烏化學成分進行分離和波譜數據分析鑒定,確定何首烏炮制后新產生的化學成分為5-羥基麥芽酚、5-羥甲基糠醛(5-HMF)、2,3-二氫-3,5-二羥基-6-甲基-4氫-吡喃-4-酮(DDMP)、3,5-二羥基-2-甲基-4氫-吡喃-4-酮、琥珀酸。有研究采用HPLC分析何首烏炮制后新產生成分DDMP和5-HMF的含量隨炮制時間的變化情況,結果在炮制60h時間內,隨炮制時間延長,DDMP含量逐漸升高,至炮制24h達到最高,隨后開始逐漸降低;5-HMF含量隨炮制時間的延長逐漸升高。4烏制品致瀉強度及hplc值趙氏等采用小鼠瀉下半數有效量(ED50)為評價指標,考察何首烏生品和經4個不同炮制時間處理過的何首烏制品致瀉強度的差異,結果致瀉強度順序為生品何首烏>1h制品何首烏>2h制品何首烏>3h制品何首烏>4h制品何首烏;而HPLC測得的結合型蒽醌含量高低順序為:生品何首烏>1h制品何首烏>2h制品何首烏>3h制品何首烏>4h制品何首烏。說明何首烏致瀉強度與結合型蒽醌含量間具有量-時-效關系。4.2肝氧化作用檢測小鼠肝損傷中抗氧化酶系統的關系趙氏等通過溴代苯致小鼠肝中毒實驗,觀察了何首烏3種炮制品的抗氧化作用,結果生何首烏、制何首烏、制何首烏顆粒對溴代苯誘發的小鼠肝損傷有不同程度的保護作用,可使肝組織中的超氧化物歧化酶(SOD)含量明顯增加,丙二醛(MDA)含量明顯下降,表明3種炮制品均有抗氧化作用。4.3急性炎炎作用陳氏等觀察不同蒸制時間制何首烏對二甲苯、巴豆油致小鼠耳殼急性炎癥腫脹的影響,發現黑豆汁拌蒸的何首烏隨著蒸制時間延長,抗炎作用增強。4.4不同濃度苯乙胺對模型大鼠紅細胞系統指標的影響丘氏等建立大鼠血虛動物模型,比較樣品粗多糖的藥效差異,結果生何首烏及不同炮制品水溶性糖含量及其分子量分布不同,除炮制72h制何首烏外,生何首烏粗多糖和其他各制何首烏樣品(傳統籠屜蒸法24、32、40h,流通蒸汽鍋蒸法24、32、48h)粗多糖對模型大鼠紅細胞系統指標