連錢草醇提工藝研究

連金草，又稱江蘇金草，是屬于嘴唇科的血毒癥性激活丹（nakai）kuber。2005年版藥典一部收載該品種,全國各地均有分布。具有利濕通淋,清熱解毒,散瘀消腫的功效,臨床上用于治療熱淋、石淋,濕熱黃疸等疾病。文獻報道連錢草含有黃酮、熊果酸、揮發(fā)油、無機鹽等化學(xué)成分。結(jié)合文獻,以總黃酮、熊果酸及出膏率為指標,采用正交試驗優(yōu)選最佳提取條件,確定連錢草的醇提生產(chǎn)工藝。1材料和方法1.1naka草甲醇為色譜純,其他試劑均為分析純。連錢草由江蘇南京同仁堂藥廠提供,為唇形科植物活血丹Glechomalongituba(NaKai)Kupr.的干燥地上部分。1.2蒸發(fā)光散射法貝克曼DU-640紫外分光光度計,Waters-2695型液相色譜儀,Alltech-2000型蒸發(fā)光散射檢測器,Empower色譜工作站,梅特勒百萬分之一及萬分之一電子天平。1.3標準物質(zhì)蘆丁(批號0080-9705)、熊果酸(批號110742-200314)對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供。1.4方法1.4.1正交實驗的設(shè)計根據(jù)文獻報道及預(yù)試驗結(jié)果,選擇乙醇提取,影響乙醇提取的主要因素有乙醇濃度、加入乙醇量、提取時間、提取次數(shù),選用以上4個因素,各取3個水平進行L9(34)正交實驗,見表1。1.4.2樣品溶液的制備取連錢草50g,根據(jù)已選定提取工藝條件提取,每次提取后用紗布過濾,濾液合并濃縮至500ml。1.4.3指標組成的測量1.4.3.檢測曲線及方法(1)標準溶液的配制:精密稱取120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品約20mg,置100ml量瓶中,加50%乙醇適量,溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成濃度約為0.2mg/ml的對照品溶液。(2)標準曲線的制備:精密吸取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分別置25ml量瓶中,加水至6ml,加5%亞硝酸鈉溶液1ml,混勻,放置6min,加10%硝酸鋁溶液1ml,搖勻,放置6min,加氫氧化鈉試液10ml,再加水至刻度,搖勻,放置15min,以相應(yīng)的溶液為空白,照分光光度法,在510nm波長處測定吸收度。(3)樣品測定:精密量取樣品液5ml,稀釋定容至50ml,精密量取2ml,平行兩份,按上法依法測定。(4)出膏率的測定:精密量取樣品液10ml,水浴蒸干,于105℃干燥3h,移置干燥器中,冷卻30min,迅速稱定重量。計算,即得。1.4.3.熊乳酸對照品溶液(1)色譜條件:色譜柱:漢邦Lichrospher5-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),柱溫:30℃,流動相:甲醇∶水∶冰醋酸(83∶17∶0.1),流速:1.0ml/min,ELSD檢測器漂移管溫度:72℃,氣體流速1.9L/min。理論塔板數(shù)按熊果酸峰計算應(yīng)不低于20000。(2)對照品溶液配制:精密稱取減壓干燥至恒重的熊果酸對照品適量,制成濃度約為1mg/ml的對照品溶液。(3)樣品制備:取正交提取液50ml,回收至無醇味,加乙酸乙酯萃取2次,每次30ml,提取液回收溶劑,用甲醇溶解并稀釋定容至10ml。1.4.4熊乳酸含量與總黃酮與出膏率的權(quán)重系數(shù)選用總黃酮、熊果酸、出膏率為指標進行試驗,篩選最佳提取工藝。對正交實驗3個評分指標,采用綜合評分法進行數(shù)據(jù)分析,結(jié)合功效,將熊果酸含量權(quán)重系數(shù)定為0.4,總黃酮與出膏率的權(quán)重系數(shù)定為0.3。熊果酸含量評分=熊果酸含量/最大熊果酸含量×0.4×100總黃酮含量評分=總黃酮含量/最大總黃酮含量×0.3×100出膏率評分=出膏率/最大出膏率×0.3×100綜合評分=熊果酸含量評分+總黃酮含量評分+出膏率評分1.4.5檢查實驗取連錢草粗粉50g,平行3份,根據(jù)已選擇的工藝提取制備。2結(jié)果2.1正交試驗結(jié)果及離散度分析結(jié)果見表2、3。2.2試驗結(jié)果見表4。驗證實驗結(jié)果表明,所篩選的提取工藝基本穩(wěn)定。3正交試驗結(jié)果3.1實驗結(jié)果表明,影響熊果酸含量的因素依次為:A>D>B>C,最佳組合為A2B2C2D3;影響總黃酮含量的因素依次為D>A>C>B,最佳組合為A1B3C3D3;影響出膏率的因素依次為:A>D>C>B,最佳組合為A1B3C2D3。3.2根據(jù)綜合評分的極差及方差分析結(jié)果:乙醇濃度與提取次數(shù)各水平間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,其余因素差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。提取的最優(yōu)工藝為:A2B2C2D3,根據(jù)實際生產(chǎn),確