到目前為止，幾十項Nobel生理學和醫學獎，化學獎都與微生物學有關原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細胞結構真核細胞細菌、藍藻、放線菌原核細胞微生物的類群課題1微生物的實驗室培養專題2微生物的培養與應用1.提供營養和條件2.防止污染一.培養基：微生物生存的環境和營養物質1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養微生物異養微生物⑵氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機物是異養型微生物的碳源、氮源、能源(1)pH值如:培養霉菌需酸性、培養細菌需中性或微堿性(2)特殊營養物質----維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）如：培養乳酸桿菌需要在培養基中添加維生素(3)氧氣的含量如:培養厭氧微生物時需要提供無氧的條件2.培養基內所需的其他條件生長因子3.種類：固體培養基液體培養基有無凝固劑瓊脂物理性質：菌落單個或少數菌體特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。功能：定義：菌落鑒定菌種的重要依據固體培養基上大量繁殖子細胞群體形態各異的菌落其它分類：根據化學成分分合成培養基——成分明確天然培養基——成分不明確根據用途分選擇培養基鑒別培養基選擇培養基加入青霉素的培養基

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養基

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養基

分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養基

分離自養型微生物加入青霉素等抗生素的培養基

分離導入了目的基因的受體細胞牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養構成？練習1（多項選擇）1、下列細菌中，能利用含碳無機物作碳源的是A光合細菌B根瘤菌C硝化細菌D乳酸菌2、培養大腸桿菌的培養基中，必需含有的碳源和氮源是A糖、有機酸等B二氧化碳、碳酸鹽C蛋白質D無機氮化物3、下列敘述不正確的是A培養基是為微生物的生長繁殖提供營養的基質B液體培養基和固體培養基所含的最基本物質不相同C微生物在固體培養基上生長時，可以形成肉眼可見的單個細菌A.CA.CB.C.1.無菌范圍：實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具、培養基滅菌實驗操作過程酒精燈旁操作超凈工作臺二.無菌技術：防止外來雜菌的污染耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時接種環、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養基，100KPa、121℃、15～30min二.無菌技術：防止外來雜菌的污染2.消毒與滅菌：思考:1)無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？

2)消毒和滅菌有何不同？3)為什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?4)請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。①培養細菌用的培養基與培養皿②玻棒、試管、燒瓶和吸管③實驗操作者的雙手消毒滅菌條件溫和強烈作用范圍物體表面或內部一部分,不包括芽孢和孢子物體內外所有微生物,包括芽孢和孢子無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。滅菌滅菌消毒營養成分不被破壞培養基培養皿空氣接種環雙手牛奶②巴氏消毒③化學消毒⑤紫外線消毒⑥高壓蒸氣滅菌①灼燒滅菌④干熱滅菌常用的消毒方法和滅菌方法1000ml牛肉膏蛋白胨培養基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g三.大腸桿菌的純化培養：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養基1.計算：培養基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補水定容4.調pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養基、培養皿分散成單個細胞,形成單個菌落冷卻至50℃，在酒精燈火焰附近倒平板?思考1溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

答:②加瓊脂的目的是什么?答:可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑思考2在滅菌前,用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養基的錐形瓶的目的是什么？答:

②培養皿能否用高壓蒸汽滅菌？答:?在滅菌時能避免水蒸汽凝結時浸濕棉塞,在取出培養基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因為培養皿要保持干燥,應該用干熱滅菌.討論:(1).培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？(2).為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？(3).平板冷凝后，為什么要將平板倒置？(4).在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？提示：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個平板1個不劃線1.接種：接種環防止劃破培養基（重復實驗）（空白對照）平板劃線法：稀釋涂布平板法問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。2.在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量移液器⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋10