第十章常見植物脫毒與快繁技術

宜職院08.9

目的與要求了解農作物、果樹、花卉、藥用植物的脫毒和快繁的生產意義與基本技術，根據地方特點和組培技術現狀，例舉部分植物進行講授，并結合學生查閱資料共同探討。具有農作物、果樹、花卉、藥用植物快繁基本技術，具備馬鈴薯、草莓等植脫毒技術，進行微型薯生產基本知能，有利用圖書及網絡資源收集相關資料，了解相關行業信息的能力，并具備一定交流探討能力。

第一節農作物的脫毒與快繁

植物組織培養技術已廣泛運用于農作物育種和良種繁育，尤其是許多無性繁殖類農作物脫毒及良種快繁，對提高農作物生產的產量和品質發揮了極其重要的作用。一、馬鈴薯的脫毒和快繁

（一）莖尖培養脫毒

1、取材生產大田頂芽，或塊莖，預培養抽生的枝條污染較少。供試材料存在病毒可結合熱處理脫毒。

2、消毒自來水沖洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液5～10min，無菌水沖洗2～3次。

3、接種解剖鏡下，解剖刀切取0.1～0.3mm帶有1～2個葉原基的莖尖，接種到培養基上。

4、培養條件MS、Miller，25±2℃，1000lx，4周后增至2000～3000lx，光照16h。

5、病毒鑒定目測法和指示植物鑒定法。（二）微型薯生產技術

由試管苗生產的重1～30g的微小馬鈴薯被稱為微型薯。不帶病毒，增產效果一般在40%以上。

1、試管生產微型薯一般只有1～5g。用組織培養方法生產微型薯分以下兩個步驟：

（1）單莖段擴大繁殖

（2）微型薯的誘導。

2、溫室多層架盤工廠化生產

3、低網畦生產二、甘薯的脫毒與快繁（一）莖尖培養1、莖尖培養脫毒取高產、優質母株枝條，切成帶1芽小段。自來水流水沖洗，70%酒精10s，0.1%的升汞10min，無菌水4～5次，或2%次氯酸鈉5min，無菌水3～4次。2、莖尖剝離和培養解剖鏡下剝去芽上較大幼葉，切取0.3～0.5mm含1～2個葉原基的莖尖分生組織，迅速接種到制備好的培養基上。3、病毒檢測

目測法和指示植物鑒定法。

（二）脫毒苗擴繁和種薯的生產

通過病毒檢測的脫毒苗先在試管內進行切段快繁。30d左右長成有6～8片展開葉的試管苗。待試管苗繁殖到一定數量后，即可在防蟲條件下于無菌基質中進行栽培繁殖。所結小薯即為原原種薯。以原原種（苗）為種植材料，在防蟲條件下的無病毒土壤上培育出的薯塊即為原種。以原種苗在大田條件下生產所結薯塊即為生產用種薯（良種）。

紅薯原原種煉苗第二節果樹脫毒快繁

利用組織培養方法繁殖果樹植株具有占地面積小，繁殖周期短，全年都能進行繁殖，繁殖系數高等特點。還可以消除果樹的某些病毒病，適應果樹向品種更新快、矮化密植以及無病毒栽培方向發展的需要。

一、草莓（一）草莓離體快繁技術1、外植體6～7月份匍匐莖15～20cm長時取材。2、培養基初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA0.2mg/L增殖MS+6-BA0.5～1.0mg/L。3、生根和馴化1/2MS+IBA0.2～1.0mg/L根2～3cm時煉苗，一周后發新根，四周后可移栽。（二）花藥培養脫毒1、花藥培養脫毒技術春季取單核期花蕾（直徑約4mm），4～5℃低溫處理24h。浸入70%酒精30s，漂白粉或0.1%氯化汞10～15min。剝取花藥放在培養基上。誘導培養基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.2mg/L，繼代培養基為MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.05mg/L2、脫毒苗的檢測指示植物小葉嫁接鑒定法和電子顯微鏡鑒定法。草莓小葉嫁接法二、柑橘1、莖尖微芽嫁接砧木種子45℃溫水浸泡5min—55～56℃熱水處理50min—取出吸干—消毒—剝去種皮—種子接種于MS培養基—27±1℃暗培養—2周后萌發芽苗可作砧木。

接穗材料強健新梢—熱空氣處理45min(50℃)—取lcm長芽條—消毒處理—切取0.14～0.18mm微莖尖。砧木苗切去長根和子葉，上胚軸留1～1.5cm切除頂部，垂直于莖，切開一個倒T字形切口，將微莖尖放置于砧木切口內，莖尖底部和砧木切口形成層緊密貼合。

嫁接苗轉植于新鮮培養基上，27±1℃、16h光照，2～4周后抽生新芽，成活率可達20%～50%。5～8周可移植。

柑橘花藥培養示意圖2、無病毒苗的繁殖經無病毒苗鑒定后選出無病毒良種苗木，可建立原種母本園。在隔離區，按無病苗的栽培要求建成無病良種母本園，供繁殖無病苗木采穗用。三、香蕉（一）花序軸切片培養1、花序軸切片香蕉果穗已完全抽出時采上部末結實花序，無菌下剝取苞片除去子房。取頂端10～15cm長的花序軸段，滅菌后橫切成2～3cm厚的薄片，再縱切成數片。2、培養過程常用MS培養基，也可用SM或改良MS，繼代也可用Knudson培養基。香蕉雄花序外植體誘幼苗過程（二）影響試管育苗的關鍵技術

芽的反復增殖是香蕉試管育苗的技術關鍵。

芽的增殖效果如何，較重要的衡量指標是增殖率和代期（—次繼代培養的時間），均與生長調節劑關系最為密切。細胞分裂素以6-BA3～4mg／L為宜，增殖率可達到4以上，代期為3～4周，因而增殖效率高。第三節蔬菜組織培養

一、番茄

1、花藥培養

⑴取花藥3～7mm長、單核中期的花蕾。

⑵將花蕾用0.1‰吐溫40溶液浸泡5min—70％酒精15s—3％的漂白粉10min—無菌水沖洗—接種

⑶從花蕾中取出花藥，接種在DBMII＋2.0mg/LNAA＋1.0mg/LKIN的培養基上，27℃、24h光照后黑暗下培養。2、葉培養

⑴取無菌幼嫩葉片，切成5×5mm的小塊。

⑵MS＋0.2mg/LIAA＋2mg/LBA27℃、光。

⑶25天后，愈傷組織分化芽。一個月后每切塊長出2～5個芽。

⑷芽轉到無激素的MS培養基上，5～10d后形成根。

3、胚培養⑴外植體的制備授粉后30～40d果實—95%乙醇消毒—5%NaCl中5min—無菌蒸餾水充分淋洗除去種子上的膠狀復被。⑵培養基MS附加硫胺素3.0um。pH6.0。附加2.4－D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈傷組織啟動和保存培養基。⑶培養條件愈傷組織啟動和保存暗培，27℃。再生生根20～30℃、16h/d，熒光下進行二、甘藍1、取材和處理剝去葉球的葉片，留下中心柱和腋芽，—70%酒精1-2分鐘—0.2%升汞10-15分鐘—剝離腋芽—接種在繁芽培養基上（MS+IAA0.2-0.5mg/L+6BA1.0-3.0mg/L）2、培養

光照1000-3000lx,12-13h/d,20±2℃，濕度50%-60%。3、擴大繁殖重復進行擴繁，直到達到要求繁殖數量為止。第四節觀賞植物的組織培養蘭花蘭花系蘭科植物，在自然條件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有幾倍，所以無法大量繁殖生產，而且由于長期進行無性繁殖，帶病毒株增多，逐漸使種性降低，影響生長。

1、取材和處理切取lOcm長生長健壯的莖尖，去苞葉洗凈—75％酒精—5％的漂白粉10min—無菌水沖洗—接種。在蘭花葉片組織培養中，應選擇帶有嫩葉的花梗，以后的處理方法同莖尖。2、原球莖的誘導培養莖尖生長點或葉片接種在原球莖誘導培養基上。因蘭花種類而異，可以用固體培養基或液體培養基(液體培養基中應加比較多的蔗糖)。凡原球莖切口處不變褐或變褐物質排出量較少的種類，可用固體培養基，而易變褐的種類，最好用液體培養基，誘導溫度應于23℃，光照強度1500-20001x。原球莖的增殖3、苗的分化培養蘭科植物與其他草本花卉不同，它不易受生長調節物質的影響，一般是將原球莖轉入離子濃度較低的培養基中，加入一些如椰子汁等天然提取物質，效果會更好，原球莖很快再生成植株。lcm高的幼苗轉移到壯苗培養基上培養3～6個月，使其長3～4片葉、3～4條根、3～10cm高，可移栽在泥炭和蛭石中，保濕弱光施肥。原球莖再分化蝴蝶蘭第五節藥用植物離體培養蘆薈蘆薈不能自花授粉結實，因此，用種子繁殖非常困難。目前的繁殖方法主要是分株和分蘗，但難以快速、大量地繁殖種苗，這也是當前蘆薈種苗昂貴的重要原因之一。（一）材料和培養基

取l0-l5cm高的蘆薈幼苗

誘導培養基為MS+(1-6mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA

分化培養基為MS+(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA

生根培養基為MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333（二）繁殖方法

1、愈傷組織培養

莖尖部分—75%乙醇30-60s—升汞5-l0min—無菌水沖洗數次—解剖刀取出組織切塊—接種

培養條件:光照10-12h，1000一2000Lx，(25士)2℃。15-25d后，可膨大成愈傷組織，1周后，就可將愈傷組織轉管進行繼代培養或分化培養。2、繼代、分化培養

同誘導

3、生根培養

培養條件同分化，半個月后即可生根。

4、煉苗

清水噴濕，在15-25℃、濕度60%-80%的條件下煉苗24h，也可視情況縮短為l2h。

5、移栽

將幼苗移栽入由蛭石組成的馴化苗圃中馴化，定期噴施馴化培養液和清水，15-20d后，即可移栽。第六節樹木的離體培養銀杏是園林綠化的珍貴樹種，亦有較高的藥用價值，以葉及種皮入藥，它的葉的制劑能顯著擴張腦血管，可治療腦血栓、冠心病、心肌梗塞及大動脈炎等。種仁、有小毒、性平、有斂肺、定喘等功能。因此可說全身都是寶。但常規繁殖較難，因此組織培養有很大應用價值。胚培養（一）取材：選擇生長飽滿的銀杏種子。（二）操作：1、升汞進行表面消毒，無菌條件下剝除外皮和胚乳。接種在MS

培養基上。培養條件：光照1500

LX，溫度25度。2、愈傷組織的誘導：1/2MS+IBA濃度梯度（1、3、5、7、10PPM）誘導愈傷組織。將培養3天后的銀杏胚接種在此培養基上，誘導出大量的愈傷組織。3、愈傷組織繼代培養：