回歸教材重難點(diǎn)06微生物的選擇、培養(yǎng)與計(jì)數(shù)【★01教材方位直擊】本題主要考查微生物的篩選與培養(yǎng)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)探究，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分、種類及作用；掌握分離微生物常用的兩種方法及操作過程；掌握探究實(shí)驗(yàn)的原則，能結(jié)合圖中信息知識(shí)答題，同時(shí)本章節(jié)會(huì)經(jīng)常以流程圖，來考查微生物的分離和培養(yǎng)，土壤中尿素分解菌的分離與計(jì)數(shù)與纖維素分解菌等微生物分離的原理及方法，是常考的內(nèi)容，同時(shí)也會(huì)伴隨著滅菌方法的考察，學(xué)生要準(zhǔn)確記憶培養(yǎng)基的種類及作用，同時(shí)對(duì)于微生物計(jì)數(shù)的計(jì)數(shù)，學(xué)生要能掌握直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法的計(jì)數(shù)原理，準(zhǔn)確掌握并運(yùn)用公式進(jìn)行計(jì)算。【★02重難點(diǎn)背誦歸納】易錯(cuò)點(diǎn)01．培養(yǎng)基（1）概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。（3）營(yíng)養(yǎng)成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的要求。2．無菌技術(shù)（1）目的：獲得純凈培養(yǎng)物。（2）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。（3）不同對(duì)象的無菌操作方法[連線]：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源凡能提供所需碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物體的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)化合物：CO2、NaHCO3等；有機(jī)化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機(jī)化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)必不可少的微量有機(jī)物酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內(nèi)含量很高不僅是優(yōu)良的溶劑而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定外界攝入無機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素，包括大量元素細(xì)胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)，某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑無機(jī)化合物易錯(cuò)點(diǎn)02：微生物的純化1.方法：（1）平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。（2）稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。稀釋操作時(shí)：每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。（3）涂布平板時(shí)：稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，且各個(gè)細(xì)節(jié)均需保證“無菌”，應(yīng)特別注意：①酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。②吸管頭不要接觸任何其他物體。③吸管要在酒精燈火焰周圍使用。2.注意事項(xiàng)：（1）倒平板操作：①培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右時(shí)才能倒平板，原因是瓊脂在44℃以下凝固。②培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開。③整個(gè)操作過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。④平板冷凝后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。⑤若倒平板時(shí)，培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底之間的部位，這個(gè)平板應(yīng)丟棄。（2）平板劃線操作：①第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束仍需灼燒接種環(huán)。②灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。③劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。④劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。3．平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線分離法可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較少、較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌4.兩種菌種保存方法的比較項(xiàng)目臨時(shí)保藏法甘油管藏法適用對(duì)象頻繁使用的菌種長(zhǎng)期保存的菌種培養(yǎng)基類型固體斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基溫度4℃－20℃方法菌落長(zhǎng)成后于冰箱中保存，每3～6個(gè)月將菌種從舊的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上將培養(yǎng)的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內(nèi)保存缺點(diǎn)菌種易被污染或產(chǎn)生變異易錯(cuò)點(diǎn)03：微生物的選擇分離與計(jì)數(shù)1.選擇培養(yǎng)基是指通過培養(yǎng)混合的微生物，僅得到或篩選出所需要的微生物，其他不需要的種類在這種培養(yǎng)基上是不能生存的。2.分解纖維素的微生物的分離的實(shí)驗(yàn)原理：（1）土壤中存在著大量纖維素分解酶，包括真菌、細(xì)菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。（2）在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法：（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）：①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②操作：a.設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。b.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。【★03真題好題演練】真題演練：1.（2021·河北省）葡萄酒生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生大量的釀酒殘?jiān)ㄆぴＤ壳斑@些皮渣主要用作飼料或肥料，同時(shí)研究者也采取多種措施拓展其利用價(jià)值。回答下列問題：（1）皮渣中含有較多的天然食用色素花色苷，可用萃取法提取。萃取前將原料干燥、粉碎的目的分別是__________，萃取效率主要取決于萃取劑的__________。萃取過程需要在適宜溫度下進(jìn)行，溫度過高會(huì)導(dǎo)致花色苷__________。研究發(fā)現(xiàn)，萃取時(shí)輔以纖維素酶、果膠酶處理可提高花色苷的提取率，原因是____________________。（2）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對(duì)應(yīng)的三個(gè)平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95，則每克皮渣中微生物數(shù)量為__________個(gè)。（3）皮渣堆積會(huì)積累醋酸菌，可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時(shí)，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至__________性，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣的目的是______________________________。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時(shí)，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中可加入乙醇作為__________。（4）皮渣堆積過程中也會(huì)積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時(shí)，乳酸菌有可能混入其中，且兩者菌落形態(tài)相似。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌_________。（簡(jiǎn)要寫出實(shí)驗(yàn)步驟和預(yù)期結(jié)果）【答案】（1）利于萃取劑溶解花色苷、使原料與萃取劑充分接觸（2）性質(zhì)和使用量（3）分解（4）纖維素酶、果膠酶可破壞細(xì)胞壁，有利于提高花色苷的提取率（5）8.8×106（6）中性或偏堿（7）使培養(yǎng)基不透明，從而使醋酸菌菌落周圍出現(xiàn)透明圈（8）碳源（9）實(shí)驗(yàn)步驟：將平板置于無氧環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和透明圈大小

預(yù)期結(jié)果：若菌落繼續(xù)生長(zhǎng)，且透明圈增大，則為兼性厭氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能繼續(xù)生長(zhǎng)，透明圈不再擴(kuò)大，則為醋酸菌菌落【解析】（1）天然食用色素花色苷可用萃取法提取，萃取劑與水應(yīng)不混溶，萃取前將原料干燥，有利于萃取劑溶解花色苷，提高溶解率；粉碎的目的是使原料與萃取劑充分接觸；萃取效率主要取決于萃取劑的性質(zhì)和使用量。萃取過程需要在適宜溫度下進(jìn)行，溫度過高會(huì)導(dǎo)致花色苷分解。萃取時(shí)輔以纖維素酶、果膠酶處理，可破壞細(xì)胞壁，有利于提高花色苷的提取率。（2）為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對(duì)應(yīng)的三個(gè)平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95，則三個(gè)平板中平均菌落數(shù)為（78+91+95）÷3=88，每克皮渣中微生物數(shù)量為88÷0.1×104=8.8×106個(gè)。（3）醋酸菌屬于細(xì)菌，制備醋酸菌初篩平板時(shí)，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，滅菌后在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣可使培養(yǎng)基不透明，醋酸菌產(chǎn)生的醋酸可分解碳酸鈣，產(chǎn)生透明圈，根據(jù)這一特點(diǎn)可篩選出醋酸菌，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中醋酸菌以乙醇為碳源，先把乙醇氧化為乙醛，再把乙醛氧化為乙酸。（4）醋酸菌為好氧菌，與兼性厭氧型的乳酸菌菌落形態(tài)相似，且二者產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物均可使碳酸鈣分解，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌，可將平板置于無氧環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)，觀察菌落形態(tài)和透明圈大小。若菌落繼續(xù)生長(zhǎng)，且透明圈增大，則為兼性厭氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能繼續(xù)生長(zhǎng)，透明圈不再擴(kuò)大，則為醋酸菌菌落。2.（2021·湖南省）大熊貓是我國(guó)特有的珍稀野生動(dòng)物，每只成年大熊貓每日進(jìn)食竹子量可達(dá)12~38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素分解菌。回答下列問題：（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即_________。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以_________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類屬于_________培養(yǎng)基。（2）配制的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌處理，目的是_________。檢測(cè)固體培養(yǎng)基滅菌效果的常用方法是_________。（3）簡(jiǎn)要寫出測(cè)定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)的實(shí)驗(yàn)思路_________。（4）為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進(jìn)行玉米秸稈降解實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株_________，理由是_________。菌株秸稈總重（g）秸稈殘重（g）秸稈失重（%）纖維素降解率（%）A2.001.5124.5016.14B2.001.53235014.92C2.001.4229.0023.32【答案】（1）C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶（2）纖維素（3）選擇（4）為了殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）（5）不接種培養(yǎng)（或空白培養(yǎng)）（6）將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個(gè)平板（每個(gè)稀釋度至少涂布三個(gè)平板），對(duì)菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則可根據(jù)公式推測(cè)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)（7）C（8）接種C菌株后秸稈失重最多，纖維素降解率最大

【解析】（1）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長(zhǎng)，其他微生物則不能生長(zhǎng)。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基從功能上分類可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，故該培養(yǎng)基從功能上分類屬于選擇培養(yǎng)基。（2）配制培養(yǎng)基的常用高壓蒸汽滅菌，即將培養(yǎng)基置于壓力100kPa、溫度121℃條件下維持15～30分鐘，目的是殺死培養(yǎng)基中的所有微生物（微生物和芽孢、孢子）。為檢測(cè)滅菌效果可對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，即將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，若在適宜條件下培養(yǎng)無菌落出現(xiàn)，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，否則說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。（3）為測(cè)定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)，常采用稀釋涂布平板法，在適宜的條件下對(duì)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌進(jìn)行純化并計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)照組應(yīng)該涂布等量的無菌水。將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個(gè)平板（每個(gè)稀釋度至少涂布三個(gè)平板），對(duì)菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則可根據(jù)公式推測(cè)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)。（4）測(cè)定酶活力時(shí)可以用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。由表格可知，在適宜的條件下，C菌株在相同的溫度和時(shí)間下，秸稈失重最多，纖維素降解率最大，說明該菌株的纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶活力最大。3.（2021·浙江省）回答下列（一）小題：（一）某環(huán)保公司從淤泥中分離到一種高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物細(xì)菌菌株，制備了固定化菌株。（1）從淤泥中分離細(xì)菌時(shí)常用劃線分離法或________法，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成________。對(duì)分離的菌株進(jìn)行誘變、________和鑒定，從而獲得能高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的菌株。該菌株只能在添加了特定成分X的培養(yǎng)基上繁殖。（2）固定化菌株的制備流程如下；①將菌株與該公司研制的特定介質(zhì)結(jié)合；②用蒸餾水去除________；③檢驗(yàn)固定化菌株的________。菌株與特定介質(zhì)的結(jié)合不宜直接采用交聯(lián)法和共價(jià)偶聯(lián)法，可以采用的2種方法是________。（3）對(duì)外，只提供固定化菌株有利于保護(hù)該公司的知識(shí)產(chǎn)權(quán)，推測(cè)其原因是________。【答案】（1）涂布分離（2）單菌落（3）篩選（4）未固定的細(xì)菌（5）降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的能力（6）包埋法和吸附法（7）特定介質(zhì)能為菌株繁殖提供X【解析】1.分離純化細(xì)菌最常用的方法是劃線分離法（平板劃線法）和涂布分離法（稀釋涂布平板法）。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體——菌落。劃線分離法，方法簡(jiǎn)單；涂布分離法，單菌落更易分開，但操作復(fù)雜些。2.固定化酶（insolubleenzyme）就是將水溶性的酶用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。固定化的方法有吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法等。3.植物組織培養(yǎng)的原理是植物細(xì)胞具有全能性，其具體過程：外植體→愈傷組織→胚狀體→新植體，其中脫分化過程要避光，而再分化過程需光。4.在植物組織培養(yǎng)時(shí)，通過調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。（一）分析題意可知，本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菑挠倌嘀蟹蛛x到一種高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的細(xì)菌菌株，制備固定化菌株。（1）分離純化細(xì)菌最常用的方法是劃線分離法或涂布分離法，兩種方法均能在固體培養(yǎng)基上形成單菌落。為了獲得能高效降解富營(yíng)養(yǎng)化污水污染物的菌株，還需對(duì)分離的菌株進(jìn)行誘變處理，再經(jīng)篩選和鑒定。（2）固定化的方法有吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法和包埋法等。由于菌株與特定介質(zhì)的結(jié)合不宜直接采用交聯(lián)法和共價(jià)偶聯(lián)法，故可以采用的2種方法是包埋法和吸附法。（3）由于該菌株只能在添加了特定成分X的培養(yǎng)基上繁殖，可推測(cè)特定介質(zhì)能為菌株繁殖提供X，故該公司對(duì)外只提供固定化菌株，有利于保護(hù)該公司的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。4.（2021·全國(guó)甲卷）加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。某同學(xué)通過實(shí)驗(yàn)比較了幾種洗衣粉的去漬效果（“+”越多表示去漬效果越好），實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。加酶洗衣粉A加酶洗衣粉B加酶洗衣粉C無酶洗衣粉（對(duì)照）血漬++++++++油漬++++++++根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果回答下列問題：（1）加酶洗衣粉A中添加的酶是__________；加酶洗衣粉B中添加的酶是__________；加酶洗衣粉C中添加的酶是__________。（2）表中不宜用于洗滌蠶絲織物的洗衣粉有__________，原因是___________。（3）相對(duì)于無酶洗衣粉，加酶洗衣粉去漬效果好原因是___________。（4）關(guān)于酶的應(yīng)用，除上面提到的加酶洗衣粉外，固定化酶也在生產(chǎn)實(shí)踐中得到應(yīng)用，如固定化葡萄糖異構(gòu)酶已經(jīng)用于高果糖漿生產(chǎn)。固定化酶技術(shù)是指___________。固定化酶在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)是_________（答出1點(diǎn)即可）。【答案】（1）蛋白酶（2）脂肪酶（3）蛋白酶和脂肪酶（4）加酶洗衣粉A和加酶洗衣粉C（5）蠶絲織物的主要成分是蛋白質(zhì)，會(huì)被蛋白酶催化水解（6）酶可以將大分子有機(jī)物分解為小分子有機(jī)物，小分子有機(jī)物易溶于水，從而將污漬與洗滌物分開（7）利用物理或化學(xué)方法將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)（8）固定在載體上的酶可以被反復(fù)利用，可降低生產(chǎn)成本（或產(chǎn)物容易分離，可提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，或固定化酶穩(wěn)定性好，可持續(xù)發(fā)揮作用）【解析】加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶。其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽，使污跡容易從衣物上脫落。（1）從表格中信息可知，加酶洗衣粉A對(duì)血漬的洗滌效果比對(duì)照組的無酶洗衣粉效果好，而血漬含有大分子蛋白質(zhì)，因此，加酶洗衣粉A中添加的酶是蛋白酶，同理，加酶洗衣粉B中添加的酶是脂肪酶；加酶洗衣粉C對(duì)血漬和油漬的洗滌效果比無酶洗衣粉好，油漬中有脂肪，因此，加酶洗衣粉C中添加的酶是蛋白酶和脂肪酶。（2）蠶絲織物中有蛋白質(zhì)，因此，表中不宜用于洗滌蠶絲織物的洗衣粉有加酶洗衣粉A、加酶洗衣粉C，原因是蠶絲織物主要成分是蛋白質(zhì)，會(huì)被蛋白酶催化水解。（3）據(jù)分析可知，相對(duì)于無酶洗衣粉，加酶洗衣粉去漬效果好的原因是：酶可以將大分子有機(jī)物分解為小分子有機(jī)物，小分子有機(jī)物易溶于水，從而將污漬與洗滌物分開。（4）固定化酶技術(shù)是指利用物理或化學(xué)方法將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，所以固定在載體上的酶還可以被反復(fù)利用。所以固定化酶在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)是：降低生產(chǎn)成本（或產(chǎn)物容易分離，可提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，或固定化酶穩(wěn)定性好，可持續(xù)發(fā)揮作用）。好題演練：1．（2022·陜西渭南·）進(jìn)行垃圾分類收集可以減少垃圾處理時(shí)間，降低處理成本。科研小組欲分離及培養(yǎng)若干種微生物用于處理濕垃圾，如剩菜剩飯、骨頭、菜根菜葉、果皮等食品類廢物。請(qǐng)分析回答：（1）科研小組從土壤中篩選產(chǎn)脂肪酶的菌株時(shí)，配制的培養(yǎng)基需要以__________為唯一碳源。制備固體培養(yǎng)基的步驟是；計(jì)算→稱量→溶化→__________→__________。接種微生物最常用的方法是__________。（2）獲得產(chǎn)脂肪酶的菌株后，在處理含油垃圾的同時(shí)，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。現(xiàn)獲得可產(chǎn)脂肪酶的A、B兩種菌株，并進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖1所示。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株__________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是______________________________。（3）科研小組從土壤中篩選淀粉分解菌時(shí)，加碘液染色后，選擇培養(yǎng)基上出現(xiàn)了A、B和C三種菌落（如圖2所示）。若要得到淀粉酶活力最高的菌株，應(yīng)選擇__________（填“A”“B”或“C”）菌落進(jìn)一步純化。經(jīng)檢測(cè)A菌落為硝化細(xì)菌，A菌落能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)且沒有形成透明圈的原因是____________________。（4）在微生物分解處理垃圾的過程中，纖維素分解菌能夠分泌纖維素酶，該酶可將纖維素分解為葡萄糖。纖維素酶由三種復(fù)合酶組成，其中__________酶可將纖維二糖分解為葡萄糖。【答案】（1）脂肪滅菌倒平板稀釋涂布平板法和平板劃線法（2）B該菌株增殖速度快，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力強(qiáng)（3）C硝化細(xì)菌為自養(yǎng)細(xì)菌，能夠利用空氣中的二氧化碳合成有機(jī)物，但硝化細(xì)菌不能產(chǎn)生淀粉酶，所以無透明圈（4）葡萄糖苷【分析】分析圖1可知，菌株A的細(xì)胞密度增殖速率低于菌株B，脂肪剩余量菌株A高于菌株B。從圖2中可知，ABC三種菌株中，BC菌落周圍出現(xiàn)透明圈，而A菌落周圍未出現(xiàn)透明圈。（1）科研小組從土壤中篩選出產(chǎn)脂肪酶的菌株時(shí)，需設(shè)置只利于產(chǎn)脂肪酶的菌株生長(zhǎng)，而其他雜菌生長(zhǎng)受抑制的培養(yǎng)基，因此配制的培養(yǎng)基需要以脂肪為唯一碳源。制備固體培養(yǎng)基的步驟是：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，其次還有穿刺接種和斜面接種。（2）據(jù)圖1分析可知，菌株B增殖速度快，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力強(qiáng)，故應(yīng)選擇菌株B進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究。（3）科研小組從土壤中篩選淀粉分解菌時(shí)，加碘液染色后，選擇培養(yǎng)基上出現(xiàn)了A、B和C三種菌落，淀粉遇碘液會(huì)變藍(lán)，而淀粉酶能夠分解淀粉，則不同產(chǎn)酶活力的菌株周圍會(huì)形成不同直徑的透明圈，淀粉酶活力越強(qiáng)的菌株周圍的透明圈越大，因此若要得到淀粉酶活力最高的菌株，應(yīng)選擇C菌落進(jìn)一步純化，這是因?yàn)镃菌株的透明圈直徑與菌落直徑比值最大。經(jīng)檢測(cè)A菌落為硝化細(xì)菌，A菌落能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)且沒有形成透明圈的原因是硝化細(xì)菌為自養(yǎng)細(xì)菌，能夠利用空氣中的二氧化碳合成有機(jī)物，但硝化細(xì)菌不能產(chǎn)生淀粉酶，所以無透明圈。（4）纖維素酶由三種復(fù)合酶組成，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。2．（2021·河南·）培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。基本培養(yǎng)基能滿足野生型菌株的最低營(yíng)養(yǎng)要求，一些突變型菌株因合成能力出現(xiàn)缺陷，需要在補(bǔ)充培養(yǎng)基（基本培養(yǎng)基中添加所缺陷的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）上才能正常生長(zhǎng)，可以滿足各種營(yíng)養(yǎng)缺陷型的該微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為完全培養(yǎng)基。回答下列問題：（1）培養(yǎng)基一般都含有__________四類成分；制備固體培養(yǎng)基的步驟包括計(jì)算、稱量、溶化、__________、倒平板；其中“計(jì)算”的依據(jù)是____________________。（2）借助完全培養(yǎng)基和基本培養(yǎng)基，采用影印法培養(yǎng)可以篩選出合成能力有缺陷的突變型菌株，過程如圖所示。用__________（填工具）將菌液接種到完全培養(yǎng)基上；由基本培養(yǎng)基上得到的結(jié)果推測(cè)，菌落__________最可能是合成能力有缺陷的突變型菌株。（3）為鑒定某突變型菌株的具體缺陷類型，將其涂布接種于以下5組添加了不同類型氨基酸的基本培養(yǎng)基中，觀察其生長(zhǎng)狀況。結(jié)果該菌株只能在A、C兩組培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，則該菌株為__________（填氨基酸名稱）營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株。簡(jiǎn)述如何臨時(shí)保存所鑒別出的菌株：______________________________。組別氨基酸組合A組氨酸蘇氨酸谷氨酸天冬氨酸亮氨酸B精氨酸蘇氨酸賴氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸C酪氨酸谷氨酸賴氨酸色氨酸丙氨酸D甘氨酸天冬氨酸甲硫氨酸色氨酸絲氨酸E半胱氨酸亮氨酸苯丙氨酸丙氨酸絲氨酸【答案】（1）碳源、氨源、水和無機(jī)鹽滅菌培養(yǎng)基的配方比例和用量（2）涂布器2、7（3）谷氨酸將鑒別出的菌株接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌落長(zhǎng)成后放在4℃的冰箱中保藏（以后每3～6月轉(zhuǎn)移一次，將菌種轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上）【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。（1）培養(yǎng)基一般都含有碳源、氨源、水和無機(jī)鹽四類成分；制備固體培養(yǎng)基的步驟包括計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；其中“計(jì)算”的依據(jù)是培養(yǎng)基的配方比例和用量。（2）篩選菌株用稀釋涂布平板法，用涂布器將菌液接種到基本培養(yǎng)基上；營(yíng)養(yǎng)缺陷型不能生長(zhǎng)，故2、7最可能是合成能力有缺陷的突變型菌株。（3）該菌株只能在A、C兩組培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，說明兩組培養(yǎng)基都含有該菌需要的氨基酸，即谷氨酸。臨時(shí)保存所鑒別出的菌株方法為：將鑒別出的菌株接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌落長(zhǎng)成后放在4℃的冰箱中保藏（以后每3～6月轉(zhuǎn)移一次，將菌種轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上）。3．（2021·四川·樹德中學(xué)）生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌（目的菌）。培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問題：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10g尿素1g瓊脂15g溶解后自來水定容到1000mL（1）分解尿素的細(xì)菌能分泌____________酶，能將尿素分解成_______________。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基因?yàn)開_______________________________具有選擇作用。（2）用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________（答出兩點(diǎn)即可）。（3）實(shí)驗(yàn)是否需要振蕩培養(yǎng)來提高溶氧量：______（“是”或“否”），原因是______________。轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用___________法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。（4）分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。甲同學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異的原因可能有__________（填序號(hào)）。①取樣不同②培養(yǎng)基污染③操作失誤④沒有設(shè)置對(duì)照（5）要想增加該實(shí)驗(yàn)的說服力，還應(yīng)該怎么做？_____________________。（6）為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?48h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果見表，其中___________倍的稀釋比較合適。稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)>5003672483618【答案】脲NH3和CO2能利用尿素的細(xì)菌能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不能利用尿素的細(xì)菌不能生長(zhǎng)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無機(jī)鹽，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中pH穩(wěn)定否瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡平板劃線法或稀釋涂布平板①②③一是設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，用該培養(yǎng)基不接種樣品觀察；再配制一組完全培養(yǎng)基，接種該樣品培養(yǎng)觀察。二是最后要對(duì)該微生物進(jìn)行鑒定，用酚紅指示劑鑒定該微生物的菌落，看指示劑是否變紅106或105【分析】1.培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。2.培養(yǎng)基的基本成分包括水、無機(jī)鹽、碳源和氮源，此外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。3.微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。4.選擇培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，有利于所需微生物的生長(zhǎng)。【詳解】（1）土壤中的部分細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕福荒蛩卦陔迕傅拇呋驴梢苑纸獬蒒H3和CO2；以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基具有選擇作用是因?yàn)橹挥心芎铣呻迕傅募?xì)菌才能利用尿素，能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不能利用尿素的細(xì)菌不能生長(zhǎng)。（2）用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，可以為細(xì)菌生長(zhǎng)提供鉀、鈉、磷等無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)，二者構(gòu)成緩沖對(duì)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中pH穩(wěn)定。（3）根據(jù)題意，目的菌為來自于牛和山羊的瘤胃中的微生物，因此，實(shí)驗(yàn)中不需要振蕩培養(yǎng)來提高溶氧量，因?yàn)榱鑫钢械奈⑸锒酁閰捬蹙佑|空氣后會(huì)死亡。轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，為了獲得單菌落，常采用平板劃線法或稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，獲得單菌落后再繼續(xù)篩選。（4）根據(jù)生物實(shí)驗(yàn)應(yīng)遵循對(duì)照原則、等量原則、單一變量原則和控制無關(guān)變量原則，A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比其他同學(xué)多，可能是培養(yǎng)基污染造成的，還可能是A同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作過程中污染造成的，也可能是與其他同學(xué)所取土壤樣品不同造成的：土樣不同可能導(dǎo)致計(jì)數(shù)偏差，①正確；培養(yǎng)基污染會(huì)導(dǎo)致菌落數(shù)增加，②正確；操作失誤可能增加微生物的數(shù)量和種類，菌落會(huì)增多，③正確；沒有設(shè)置對(duì)照不會(huì)增加菌落數(shù)目，④錯(cuò)誤。因此，A同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能是①②③。（5）微生物培養(yǎng)過程中，為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有說服力，常需設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，用該培養(yǎng)基不接種樣品觀察；再配制一組完全培養(yǎng)基，接種該樣品培養(yǎng)觀察；另外，為了對(duì)分離的菌種進(jìn)行進(jìn)一步鑒定，還要用酚紅指示劑鑒定該微生物的菌落，看指示劑是否變紅。（6）在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于技術(shù)的平板。由表可知，106或105倍的稀釋比較合適。4．（2021·四川遂寧·）幽門螺桿菌（Hp菌）因?yàn)槠鋵?dǎo)致胃痛、胃癌，成為最臭名昭著的細(xì)菌之一。它是一種異養(yǎng)微厭氧菌，胃里面還有胃酸（pH為1.5左右），絕大部分的細(xì)菌都適應(yīng)不了。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：請(qǐng)回答下列問題：（1）上述培養(yǎng)過程中，能夠“濃縮”幽門螺桿菌的步驟是____。梯度稀釋操作時(shí)如何防止雜菌污染____。（2）有的化工廠會(huì)產(chǎn)生尿素廢水，研究者提出用幽門螺桿菌來處理廢水，如果該方法可行，根據(jù)題干信息可知，該處理過程對(duì)溫度和氧氣的要求是____。（3）實(shí)踐證明有一種尿素分解菌比幽門螺桿菌處理尿素廢水的能力強(qiáng)很多，最可能的原因是前者比后者產(chǎn)生的____多，科學(xué)家用分配色譜法分離該物質(zhì)主要是利用了該物質(zhì)與其他物質(zhì)的____不同。在凝膠色譜柱的裝填過程中，裝柱前需要根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計(jì)算需要的凝膠量的原因是___。（4）為了證明不分餐能導(dǎo)致胃幽門螺桿菌交叉?zhèn)鞑ィ芯空咛崛×四澄秆谆颊呒彝サ?00g剩菜，加入無菌水稀釋。取上述稀釋液分別接種到3個(gè)適宜的培養(yǎng)基中置于適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，三個(gè)平板上胃幽門螺桿菌菌落數(shù)均介于30～300之間且相差不大，求平均值得到菌落數(shù)為B個(gè)。根據(jù)上述情景不能計(jì)算出每克剩菜中的幽門螺桿菌的數(shù)量，原因是______。【答案】選擇培養(yǎng)試管口和移液管應(yīng)該在離火焰1-2cm處（或者火焰附近）37℃左右、低氧（或無氧）脲酶相對(duì)分子質(zhì)量干的凝膠和用緩沖液平衡好的凝膠的體積差別很大因?yàn)椴恢老♂尡稊?shù)和接種體積【分析】1.分解尿素細(xì)菌的分離原理：（1）能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素。（2）配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。2.梯度稀釋操作時(shí)，無菌操作很關(guān)鍵。【詳解】（1）據(jù)圖分析可知，“選擇培養(yǎng)”為“濃縮”幽門螺桿菌的過程。梯度稀釋操作時(shí)，無菌操作很關(guān)鍵，要注意試管口和移液管應(yīng)該在離火焰1-2cm處（或者火焰附近）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。（2）胃幽門螺桿菌是一種異養(yǎng)微厭氧菌，生活環(huán)境具有胃酸（pH為1.5左右），故用幽門螺桿菌來處理廢水應(yīng)該在37℃左右、低氧（或無氧）環(huán)境中進(jìn)行。（3）能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素，若一種尿素分解菌比幽門螺桿菌處理尿素廢水的能力強(qiáng)很多，最可能的原因是前者比后者產(chǎn)生的脲酶多。科學(xué)家用分配色譜法分離該物質(zhì)主要是利用了該物質(zhì)與其他物質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量不同。根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計(jì)算需要的凝膠量的原因干的凝膠和用緩沖液平衡好的凝膠的體積差別很大。（4）不知道稀釋倍數(shù)和接種體積，無法計(jì)算出每克剩菜中的幽門螺桿菌的數(shù)量。5．（2022·江西吉安·）工業(yè)企業(yè)每年都會(huì)產(chǎn)生大量高濃度工業(yè)廢水，工業(yè)廢水進(jìn)入水體，其中的酚類會(huì)被酚降解菌分解。從活性污泥中分離高效降解酚類的菌株并計(jì)數(shù)的過程如圖所示。回答下列問題：（1）酚類降解菌的富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K，HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中蛋白胨可為微生物生長(zhǎng)提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有________；實(shí)驗(yàn)中對(duì)所用的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等玻璃制品應(yīng)采用____法進(jìn)行滅菌；對(duì)配制好的培養(yǎng)基應(yīng)采用_______法滅菌。（2）用______吸取1mL培養(yǎng)的菌液注入含______的試管中獲得101稀釋液，以此類推獲得105的稀釋液。（3）取稀釋倍數(shù)為105的菌液0.1mL采用________法接種到三個(gè)平板上，獲得的菌落數(shù)分別是105、125、115，則1mL菌液中含有酚類降解菌__________個(gè)。若菌落長(zhǎng)滿整個(gè)平板，難以計(jì)數(shù)，最可能的原因是____________________________。【答案】碳源、氮源、維生素干熱滅菌高壓蒸汽滅菌無菌移液管9mL無菌水（稀釋）涂布平板1．15×108菌液稀釋度不夠【分析】1.微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。對(duì)異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營(yíng)養(yǎng)要素成分時(shí)并不是起單一方面的作用。2.微生物常見的接種的方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法。【詳解】（1）蛋白胨營(yíng)養(yǎng)豐富，可為微生物生長(zhǎng)提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、氮源、維生素等。實(shí)驗(yàn)中對(duì)所用的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等玻璃制品應(yīng)采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌；對(duì)配制好的培養(yǎng)基應(yīng)采高壓蒸汽滅菌法滅菌；（2）一般用無菌移液管吸取菌液和培養(yǎng)液，所以用無菌移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液注入含9mL無菌水的試管中獲得101稀釋液，以此類推獲得105的稀釋液；（3）若要進(jìn)行微生物的計(jì)數(shù)，需要用（稀釋）涂布平板法培養(yǎng)微生物，所以取稀釋倍數(shù)為10的菌液0.1mL采用（稀釋）涂布平板法接種到三個(gè)平板上，獲得的菌落數(shù)分別是105、125、115，則1mL菌液中含有酚類降解菌=C/V×稀釋倍數(shù)=（105+125+115）÷3÷0.1×105=1.15×108個(gè)。若菌液稀釋度不夠則菌落長(zhǎng)滿整個(gè)平板，難以計(jì)數(shù)，因此若菌落長(zhǎng)滿整個(gè)平板，難以計(jì)數(shù)，最可能的原因是菌液稀釋度不夠。6．（2021·廣東·）測(cè)定水樣是否符合飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，常用濾膜法測(cè)定大腸桿菌的數(shù)目。流程如圖所示，濾膜法的大致流程：用濾膜過濾待測(cè)水樣→水樣中的細(xì)菌留在濾膜上→將濾膜轉(zhuǎn)移到伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）上培養(yǎng)→統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目。據(jù)圖回答問題：（1）過濾待測(cè)水樣用到的濾杯、濾膜和濾瓶首先需要進(jìn)行___________________處理，保證實(shí)驗(yàn)不受其他微生物干擾。與過濾有關(guān)的操作都要在___________________旁進(jìn)行。（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)中的_______________操作。從物理狀態(tài)角度分析，EMB培養(yǎng)基屬于_______________培養(yǎng)基，制備培養(yǎng)基時(shí)需要采用_______________法滅菌。（3）某生物興趣小組的某同學(xué)嘗試按照上述方法進(jìn)行測(cè)定，無菌操作下將10mL待測(cè)水樣加入到90mL無菌水中，稀釋后的100mL菌液通過濾膜法測(cè)得EMB培養(yǎng)基上的菌落數(shù)平均為124，黑色菌落數(shù)平均為31，則推測(cè)1升待測(cè)水樣中的大腸桿菌數(shù)目為___________________個(gè)。（4）該同學(xué)進(jìn)一步思考，利用濾膜法也可能用于測(cè)定待測(cè)水樣中其他微生物的數(shù)目。他取了兩份水樣，一份待測(cè)水樣來自變酸的果酒，從中檢測(cè)到兩種微生物，它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是___________________。另一份來自某公園的觀賞湖，若要通過測(cè)量藍(lán)藻的數(shù)目來研究水華，培養(yǎng)基配方中則必須添加___________________（水、無機(jī)鹽、碳源、氮源）。【答案】（1）消毒滅菌酒精燈火焰（2）接種固體高壓蒸汽滅菌（3）3100（4）有無核膜為界限的（成形的）細(xì)胞核水、無機(jī)鹽、氮源【分析】濾膜法是檢測(cè)水樣中大腸細(xì)菌群的方法，將一定量水樣注入已滅菌的微孔薄膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌被截留在濾膜上，將濾膜貼于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)和鑒定濾膜上生長(zhǎng)的大腸菌群菌落即可推測(cè)計(jì)算出水樣中的大腸桿菌數(shù)；伊紅為酸性染料，美藍(lán)為堿性染料，大腸桿菌在伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基的菌落呈深紫色，并有金屬光澤。（1）過濾待測(cè)水樣需要用到濾杯、濾膜和濾瓶，其中需要對(duì)濾杯、濾膜和濾瓶進(jìn)行消毒滅菌處理，與過濾有關(guān)的操作都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止雜菌的污染。（2）將完成過濾之后的濾膜緊貼在EMB培養(yǎng)基上，這屬于微生物培養(yǎng)