hplc法同時測定木蝴蝶藥材中木蝴蝶苷b和黃芩苷

中藥木槿屬植物木槿科或木槿科植物（l.）變異種子干燥、成熟的種子。主要產于廣西、云南和貴州，少量來自海南和四川。木蝴蝶味苦、甘,性涼,入肝、肺、胃經,有清肺利咽、疏肝和胃之功效。現代藥理研究表明,木蝴蝶具有明顯的抗癌、抗炎、抗氧化及抗誘變作用。黃酮類化合物是木蝴蝶藥材的有效成分。在質量評價方面,2010年版《中國藥典》木蝴蝶項下僅有木蝴蝶苷B和黃芩苷的薄層定性鑒別,一部增補(第二批)中收載了木蝴蝶苷B的含量測定。文獻中多以黃芩苷的含量為指標對木蝴蝶的質量進行評價。本文采用HPLC法,建立了廣西木蝴蝶藥材中木蝴蝶苷B和黃芩苷的含量測定方法,為木蝴蝶藥材的質量評價提供了試驗數據。1材料表面1.1ters3-3色譜監測和測定Waters高效液相色譜系統(包括2695SeparationsModule四元泵、在線真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、Waters2996PhotodiodeArrayDetector、Empower色譜工作站,美國Waters公司);2004MP6型半微量電子顯示天平(德國Sartorius公司);OHAMSScoutPro型普通電子天平(梅特勒-托利多,常州稱重設備系統有公司);KQ-100DE型醫用數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);微孔濾膜過濾器(天津市騰達過濾器件廠)。1.2《侵權責任法》第32%第843黃芩苷(110715-200815,中國藥品生物制品檢定所)、木蝴蝶苷B(自制,純度大于98%);甲醇(分析純,北京化工廠;色譜純,天津四友公司)、乙腈(色譜純,Fisher公司)、磷酸(分析純,國藥集團)、高純水(自制)。實驗所用木蝴蝶藥材見表1,所有樣品經中國中醫科學院中藥研究所楊濱研究員鑒定為紫葳科植物木蝴蝶O.indicum的干燥成熟種子。2方法和結果2.1流動相aAgilentZorbaxExtend-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相A為0.3%磷酸溶液,B為甲醇,C為乙腈,梯度洗脫,洗脫程序(0~30min,75%~69%A,10%~11.5%B);檢測波長280nm,流速1mL·min-1,柱溫30℃。2.2木聚糖復合提取物對照品溶液精密稱取木蝴蝶苷B和黃芩苷對照品適量,加甲醇溶解配制成質量濃度分別為61.00,276.00mg·L-1的木蝴蝶苷B和黃芩苷混合對照品溶液。色譜圖見圖1。2.3超聲法提取碳醇取木蝴蝶粉末0.5g,精密稱定,置錐形瓶中,精密加入甲醇25mL,稱重,超聲提取30min(功率100W,頻率40kHz),放冷,再稱定質量,用甲醇補足減失的質量,搖勻,過0.2μm微孔濾膜,取續濾液即得。2.4標準曲線和定量限精密吸取上述混合對照品溶液1,5,10,15,20,25μL,進樣分析,每個體積進樣3次,取平均值。以對照品進樣量(μg)為橫坐標(X),對照品峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸,木蝴蝶苷B和黃芩苷的回歸方程分別為Y=2742200X+4948.4(r=0.9999);Y=3024025X+111512.5(r=1.0000)。表明木蝴蝶苷B在0.061~1.525μg,黃芩苷在0.276~6.900μg呈良好的線性關系。木蝴蝶苷B和黃芩苷的定量限分別為2.52,4.6ng(S/N=10);檢測限分別為1.26,0.92ng(S/N=3)。2.5精密度測試取混合對照溶液,在2.1項色譜條件下重復進樣6次,木蝴蝶苷B和黃芩苷峰面積的RSD分別為0.97%,1.22%,表明儀器精密度良好。2.6溶液穩定性試驗取同一供試品溶液,室溫放置,分別于0,4,8,12,24h在上述色譜條件下進樣分析,木蝴蝶苷B和黃芩苷峰面積的RSD分別為0.88%,0.70%,表明供試品溶液室溫下24h內穩定。2.7重復性試驗取同一供試品,按2.3項下方法操作,平行制備6份供試品溶液,在2.1項色譜條件下進樣分析,木蝴蝶苷B和黃芩苷含量的RSD分別為1.71%,2.35%,表明方法的重復性良好。2.8平均回收率稱取已知含量的供試品0.25g×6份,精密稱定。分別加入一定量的混合對照品溶液,按2.3項下方法制備供試品溶液,進樣分析,木蝴蝶苷B和黃芩苷的平均回收率分別為98.06%,100.35%(n=6),RSD3.93%,3.94%。2.9樣品含量測定取木蝴蝶藥材干燥粉末0.5g,精密稱定,按2.3項下方法制備供試品溶液,在2.1項色譜條件下進樣分析,計算各樣品中木蝴蝶苷B和黃芩苷的含量,結果見表1。3討論3.1流量相系統的選擇3.2超聲處理提取率在不同自比較了冷浸、超聲處理和水浴回流3種處理方法,結果表明,超聲處理提取率最高;對不同提取時間進行了考察,結果表明超聲處理提取30min時基本提取完全。3.3檢測波長的選擇木蝴蝶苷B和黃芩苷的最大吸收波長分別為276.9,278.1nm,因此,選擇280nm為2個成分的檢測波長。3.4色譜及形態分析對甲醇-醋酸溶液,乙腈-甲醇-醋酸溶液,乙腈-甲醇-甲酸溶液等多個流動相系統進行考察。結果表明,乙腈-甲醇-磷酸溶液系統能使相鄰成分的分離度達到測定要求,且色譜圖基線平穩,色譜峰對稱性好。本研究從木蝴蝶的主產區廣西收集了8批木蝴蝶藥材,從性狀上可將8批藥材分為兩類:第一類藥材(No.1-3)蝴蝶形