艾滋病檢測技術新進展及其應用1整理ppt內容提要1.HIV急性期感染或窗口期感染檢測（Ab/Ag聯合檢測和集合PCR）2.嬰幼兒早期診斷（nestRT-PCR）3.快速檢測策略及質控2整理ppt1、HIV-1持續流行：全球HIV流行和AIDS仍繼續增加，尤其是MSM同性戀人群，多達50%HIV傳播發生在疾病急性和早期，（流行病學意義）2、高病毒RNA水平：性傳播感染仍具首位，生殖道HIVRNA水平相當于血液中HIVRNA水平。高病毒載量、獨特的病毒特性以及缺乏中和抗體，急性期感染者感染性極高。VL>10Mcopies/mm33、極易垂直傳播：懷孕婦女感染HIV非常常見，增加HIV垂直傳播的危險。2011年4月全國報告的HIV感染者（5560例）中，母嬰傳播占1.3%；AIDS病人（2806例）中，母嬰傳播占1.0%。

公共衛生意義：HIV-1流行形勢嚴峻為什么HIV急性感染（AHI）越來越受到重視？3整理ppt4、應盡早盡快進行診斷：

HIV感染急性期，感染者無癥狀和流感樣癥狀而經常漏檢而誤診，感染者本人不知自己感染狀態，極易在高危人群中傳播5、應盡早進行人群干預：

實時對感染者及其配偶、孕婦感染者及其嬰兒進行干預，知曉感染狀態，減少危險性行為；了解和干預復雜的性傳播網6、應盡早進行病毒干預：在AHI時期進行可能的干預以限制HIV復制和整合入病毒潛伏池、（整合后不可治愈），早期抗病毒治療的必要性(轉變觀念)7、指導疫苗研究：基于急性期感染時期的傳播性/奠基者病毒的特性8、建立人類自然模型：

研究AHI個體，為詳細了解人類HIV傳播事件提供最好的機會公共衛生意義：早診斷、早干預、早治療、降兩率、指導疫苗研究為什么HIV急性感染（AHI）越來越受到重視？4整理ppt方法：前瞻性隨訪高危人群隊列發現陽轉感染者（MSM,IDU,SW,單陽伴侶）限制：1）前瞻性隨訪HIV陰性人群的巨額花費；

2）在陽轉時刻或接近陽轉時難以找到研究對象，難以采集到急性期血清陰性病毒血癥期峰值的樣本；（美國國防部聯手NIH已經啟動疫苗免疫性隊列研究RV217，每周二次檢測HIVRNA，試圖發現AHI；我國十一五重大專項也啟動了急性期感染的研究）前瞻性隊列研究：高危人群橫斷面研究：普通人群血液中心通常使用集合（6-96份血漿）NAT篩查，陽性集合拆分并檢測出個體感染者，使用病毒特異性“區別”NAT檢測確認，陽性者納入轉診和報告系統美國北卡衛生部門制定和實施了全州所有公共HIV檢測點篩查AHI規劃，對所有抗體陰性樣本進行集合NATRNA檢測。及時轉診、咨詢、治療和前瞻性研究如何發現

HIV急性感染AHI？5整理pptRNA+Ab-P24+Ab-血清陽轉后的方法RNAp24Ab血清陽轉抗體檢測臨界值

特異性抗體比例時間反應指標感染

血清陽轉前的方法怎樣檢測HIV-1早期感染?6整理ppt從感染HIV到抗體呈陽性反應這段時間血漿中含有高濃度HIVRNA有很高的傳染性現在普遍認為2周～3個月,個別案例達6個月。HIV血清陽轉窗口期7整理pptHIV感染各種檢測方法的窗口期HIVAb檢測（第三代試劑）：窗口期約28天HIVAb/Ag聯合檢測（第四代試劑）：窗口期約15天核酸檢測：窗口期約10天8整理ppt病毒載量值范圍為3.84~6.84Log10Copies/mL；28例窗口期病例，病毒載量百萬級有10份（35.71%）；十萬級9份（32.14%）；萬級的樣品7份（25%）；萬級以下的樣品2份，占總樣品數的7.14%。窗口期感染者的病毒學特征9整理ppt

WB條帶WB不確定RNA陽性p2426(65%)7(26.9%)p24+gp1609(22.5%)3(33.3%)p24+p174(10%)4(100%)p24+p551(2.5%)1(100%)合計401540份WB不確定樣品WB條帶10整理pptHIV急性期感染或窗口期感染檢測方法1.Ab/Ag聯合檢測:ELISA2.HIVRNA檢測:集合PCR11整理pptHIVAb/Ag聯合檢測檢測早期HIV感染的效果與單獨HIV-1抗原的試劑相當與RT-PCR方法相比，平均滯后時間是大約3.23天與第三代抗體試劑相比，窗口期縮短了1.56到5.32天檢測獻血員的特異性是99.80%第四代試劑的敏感性和特異性均有所提高12整理pptHIVAb/Ag聯合檢測試劑的原理HIVAg檢測：HIVAg固相

血清/血漿結合物1/結合物2HIV1Ab: 抗p24單抗

………..…生物素標記的抗HIV單抗……..親和素標記的過氧化物酶結合物

TMB/H2SO4PHIVAb檢測:IgG,IgA,IgM固相

血清/血漿

稀釋液/結合物2HIV1Ag: gp160重組蛋白

………………..

gp41多肽過氧化物酶結合物

功能性保守多肽

….....................

功能性保守多肽過氧化物酶結合物HIV2Ag: gp36多肽

…………………..gp36多肽過氧化物酶結合物TMB/H2SO4P13整理pptHIVAb/Ag特點HIV-Ab與HIV-Ag雙檢測系統—HIV-Ag和HIVP24抗體共同包被—HRP標記HIV-Ag和HRP標記親和素共同組成酶標試劑雙抗原夾心法測HIV-Ab——包被抗原+HRP標記抗原雙抗體夾心LAB法測HIV-Ag——包被抗體＋生物素標記抗體＋HRP標記親和素生物素-親和素反應系統應用14整理pptHIV-Ag/Ab試劑對BBIpanel檢測結果

24種國外抗體試劑窗口期與萬泰試劑一致，均27天。

ABBOTT（2種）、萬泰和伯樂抗原試劑窗口期均為7天，靈敏度一致。15整理ppt集合HIVRNART-PCR樣本的路線16整理ppt集合的拆分檢測路線17整理ppt一級pool二級pool單份樣品WB檢測結果地點編號病載編號病載編號病載（C/ml）ZC1-51.68E+3ZC1LOW

LOW

ZC2LOW

LOW

ZC3LOW

LOW

ZC44.43E+3230361.80E+5陰性豫-柘城ZC5LOW

LOW

ZC11-153.92E+2ZC11LOW

LOW

ZC12LOW

LOW

ZC13LOW

LOW

ZC141.37E+3231351.05E+4陰性豫-柘城172346.34E+3陰性晉-絳縣ZC15LOW

LOW

TF1-51.36E+3TF1LOW

LOW

TF24.06E+3172185.39E+3陰性晉-絳縣TF3LOW

LOW

TF4LOW

LOW

TF5LOW

LOW

TFD7.26E+4TFD13.32E+5050193.21E+6陰性晉-臨汾TFD2LOW

LOW

TFD3LOW

LOW

TFD4LOW

LOW

TFD5LOW

LOW

Low：低于檢測限HIV窗口期感染樣品各級POOL檢測結果18整理ppt

50份標本混合

陽性 每10份標本再檢測 陽性 每一份標本再檢測集合HIV核酸檢測用于血液篩查集合HIVRNA檢測方法用于在HIV抗體陰性的血清（血漿）樣本中篩查處于急性感染期HIVRNA陽性的樣本。19整理ppt注*RT1和RT2檢測均為陰性的樣品為按陰性咨詢同時，為進一步排除假陰性的樣品將保留血漿，集中進行ELISA復檢，ELISA復檢為陽性的樣品進一步做WB確認，同時進行隨訪。咨詢后，需要檢測者采集抗凝血先用RT1再用RT2進行檢測按陰性咨詢報告陰性任何一種試劑檢測為陽性兩次檢測均為陰性集中進行ELISA檢測*集中進行ELISA、WB檢測求詢者HIV抗體陰性及WB不確定樣本WB確認HIV抗體陽性樣品做PooledHIVRNART-PCR檢測做BED-CEIA檢測窗口期檢測程序20整理ppt

應用集合PCR技術發現窗口期感染者MSM VCT IDU

篩查- 篩查+

集合PCR WB +結合流行病史，判斷窗口期感染21整理pptMSM人群早期感染建議檢測流程2023/9/5男男性行為人群HIV-1早期感染檢測策略及新發感染率研究22整理ppt嬰幼兒HIV感染的診斷HIV感染產婦生嬰幼兒在出生后18個月內可應用HIV核酸檢測進行早期HIV感染診斷。逆轉錄PCR（RT-PCR）方法，一般需擴增HIVgag和pol和env基因片段。如果兒童第一次采血時已滿12個月，則應首先進行HIV抗體檢測。對于抗體陽性者進行HIV核酸檢測。如果已滿18個月，不做核酸檢測。23整理ppt感染嬰兒平均S/CO值隨月齡變化曲線（24個感染嬰兒(3個死亡)，82個樣本）n:樣本數

嬰幼兒感染診斷：12月內核酸檢測，13-17月先抗體，陽性者檢測核酸，18個月以上抗體檢測24整理ppt25整理ppt核酸檢測流程26整理ppt27整理ppt快速檢測，是艾滋病實驗室多了一種檢測方法。快速檢測，是為了更多、更快的的發現感染者?？焖贆z測，不是為了取代實驗室，但不能因為有了實驗室而放棄使用快速檢測?？焖贆z測28整理ppt“五擴大七加強”擴大宣傳教育覆蓋面擴大監測檢測覆蓋面擴大預防母嬰傳播覆蓋面擴大綜合干預覆蓋面擴大抗病毒治療覆蓋面加強血液管理加強醫療保障加強關懷救助加強權益保護加強組織領導加強防治隊伍建設加強國際合作國務院國發【2010】48號：29整理ppt擴大監測檢測覆蓋面要進一步加強監測檢測網絡建設，依托現有醫療衛生資源，配備必要的設備和人員，擴大檢測服務范圍，推廣使用快速簡便的檢測方法，提高檢測可及性。組織各級各類醫療衛生機構主動開展艾滋病病毒檢測咨詢。30整理ppt建立快速檢測點，擴大檢測覆蓋率我國地域遼闊，在一些有檢測需求但尚不具備條件建立實驗室的醫療機構、農村鄉（鎮）衛生院、社區衛生服務中心和艾滋病自愿咨詢檢測點（VCT）需要建立快速檢測點，以擴大檢測覆蓋面、發現更多的艾滋病病毒感染者。31整理ppt年HIV報告即AIDS新發現合計晚發現%200737419107194813822.3200845572107905636219.1200948193134336162621.8201048249160896433825.0疫情的新特征（病人發現晚）要求開展快檢以盡早盡快發現32整理ppt增加檢測可及性是中國控制艾滋病的關鍵1.知曉HIV感染狀況能夠得到有效的陽性的干預。2.通過行為改變可以減少2/3的HIV經性傳播。3.及時的抗病毒治療可以減少病毒載量從而減少二代傳播–“治療作為預防”—90%以上的效能。4.如果有>60%的HIV+知曉自己的感染狀態并獲得相應服務——HIV疫情達到控制。5.為什么目前HIV+發現率不高<25%？主動檢測的渠道有限（主要通過CDC系統，醫院初檢陽性的丟失率高），檢測過程繁瑣（出結果時間太長，二次隨訪失訪）。33整理ppt中國HIV感染知曉率（2010年）28%知道自己感染34整理ppt在中國增加檢測可及性的關鍵HIVTestingSites–Increase1.增加HIV檢測點HIVTestingprocedures–Simplify(UserFriendly)2.簡化HIV檢測流程——越快越好，同一場所兩次檢測將會促進可及性，大大減少結果告知以及隨訪過程中的丟失，簡化檢測，比如使用快檢會使更多更低級別的場所能夠提供HIV檢測——增加可及性。05九月2023?2010Bill&MelindaGatesFoundation|3535整理ppt快速檢測是區別于常規ELISA的一種初篩方法，只是艾滋病實驗室多了一種檢測方法。快速檢測是在不具備篩查實驗室條件的地點開展目標人群的檢測，是為了更多、更快的發現感染者。開展快速檢測仍然需要經過專業培訓，接受上級有關部門監督和管理，檢測點不是為了取代實驗室，只是篩查實驗室的補充?？焖贆z測的定義36整理ppt國家參比實驗室：RT1+RT2組合結果37整理ppt云南：快速試劑檢測陽性結果與WB結果的符合性快速結果WB確證結果一致性SD陽性388373陽性，9份陰性，6份不確定(其中3份隨訪檢測陽轉)，12假陽性96.9%雅培陽性389374陽性，10份陰性，5份不確定(其中3份隨訪檢測陽轉)，12假陽性96.9%SD、雅培雙陽性379373，2份陰性，4份不確定(其中3份隨訪檢測陽轉)，3假陽性99.2%1檢測樣本：1435份，同時用SD與雅培試劑進行檢測，一種或兩種方法陽性（共398份）用WB進行確證。2雅培陽性SD陰性10份，WB8份陰性，1份陽性，1份不確定SD陽性雅培陰性9份，WB7份陰性，2份不確定38整理ppt云南：快速試劑檢測陽性結果與WB結果討論快速試劑應用可縮短服務對象檢測結果等待時間，提高初篩陽性結果告知率、CD4細胞檢測率、隨訪率兩種快速檢測結果陽性比一種快速檢測陽性與確證結果的符合率高。兩種快速試劑檢測陽性與確證結果一致率低于替代策略II（兩種ELISA檢測陽性，S/CO>6+快速檢測陽性，一致性100%，中國艾滋病性病，2008年第3期）該比較的局限性：兩種快速試劑均為進口試劑，沒有對陰性樣本進行對比。部分國產快速檢測試劑質量需進一步提高39整理ppt

2008年至2011年4月確證實驗室快速檢測陽性數ELISA結果WB結果備注陽性數陰性數陽性數陰性數不確定數

省臨檢中心117110791811

遵義市CDC1701682152412

小計28727892431223

陽性符合性快速與ELISA96.9%

快速與WB:84.6%

ELISA與WB:87.4%

貴州：快速檢測試劑與ELISAWB符合性40整理ppt示范區檢測人數快速陽性數ELISA陽性數確證陽性數確證陰性數確證不確定南明區5540732323200紅花崗區1699488701銅仁市2172963545490盤縣325731010901織金縣24399382626120小計151102151130128212陽性符合率

快速與ELISA:86%快速與WB84.8%

ELISA與WB98.5%

貴州：母嬰阻斷示范區項目快檢結果分析41整理ppt艾滋病病毒抗體快速檢測技術手冊

(2011年版）1、人員要求2、檢測點的設置3、要求與管理3、試劑選擇4、樣本采集及注意事項5、檢測策略及流程6、實驗記錄7、結果報告與告知8、檢測質量控制9、生物安全及個人防護。42整理ppt人員要求從事HIV快速檢測的人員需有相關的檢驗或醫學知識，經過縣級以上相關專業技術部門培訓，取得合格證書。未經正規培訓或培訓后考核未合格的人員,不得進行快速檢測工作。對從事快速檢測的人員,應根據需要進行再培訓。43整理ppt檢測點的設置各省可根據艾滋病流行情況和防治工作整體需求，統籌考慮檢測點設置，有效開展快速檢測。根據當地艾滋病流行情況和實際需求，可在有檢測需求、但不具備建立實驗室條件的地方設置檢測點。檢測點可由當地艾滋病確證實驗室或篩查實驗室負責培訓、驗收，衛生行政部門負責審批，在當地衛生行政部門與省艾滋病確證中心實驗室備案。44整理ppt檢測點的要求快速檢測所在房間溫度可控，保證室內達到試劑要求的溫度，有檢測臺面，光線充足，可以消毒。需配備快速檢測所需物品，至少包括：普通冰箱、消毒與污物處理設備、一次性消耗品、安全防護用品和資料柜。嚴格按照快速試劑說明書要求檢測，保存原始記錄及必須參加?。ǖ厥屑墸┙M織的快速檢測能力驗證。45整理ppt檢測點的管理省艾滋病確證中心實驗室負責本省HIV快速檢測的實施及其質量保證。統籌考慮檢測點的發展與規劃，組織本省快速檢測能力驗證活動。各市級艾滋病確證實驗室指導本地檢測點的建立與管理，進行人員培訓、現場督導和質量管理。46整理ppt快速檢測試劑（RT）是在ELISA基礎上發展起來的一種檢測技術，它用膠體金或硒標記抗原、抗體后以層析方法進行檢測。突出優點為快速、試劑便于保存、檢測不需要特殊設備并可以單份檢測，比較適用于基層醫療單位和標本初篩。挑戰：進一步提高檢測靈敏度和特異性，實現檢測多元化，進行定量和半定量檢測膠體金紙條將會更加廣泛地應用于各個領域。47整理ppt艾滋病快速檢測試驗（RT）快速HIV試劑的原理*顆粒凝集（ParticleAgglutination,PA)免疫滲漏（Immunoconcentration,Flowthrough,FT)免疫層析（Immunochromatograpy,lateralflow,IF)48整理ppt快速檢測：膠體金（或膠體硒）原理和方法原理包括HIV-和HIV-2抗原直接包被于硝酸纖維素膜上的檢測線，將HIV抗體包被于質控線，通過利用膠體金(或膠體硒）標記HIV-1和HIV-2抗原,采用免疫層吸雙抗原夾心法原理來檢測待測樣品中可能存在的HIV抗體。操作方法操作簡單，只需在加樣處加上樣品。49整理ppt艾滋病快速檢測試劑構造50整理ppt艾滋病快速檢測：膠體金（或膠體硒）結果判讀結果判讀反應區和質控區均出現紅色條帶為陽性。質控區有條帶，反應區無條帶為陰性。反應區和質控區均無條帶則實驗無效。51整理ppt艾滋病快速檢測的優點1.操作更快2.不需要成批實驗3.不需要使用特殊儀器4.檢測的當時就給出結果5.只能采用經過SFDA批準的快速HIV抗體檢測，以確保質量52整理ppt快速檢測試劑使用要求

必須使用經國家食品藥品監督管理局注冊批準的快速試劑。試劑必須在有效期內使用。根據檢測目的選擇試劑。初篩選擇敏感性高的試劑，復檢選擇特異性高的試劑。推薦使用臨床評估質量好并且近幾年連續考評結果穩定的試劑53整理ppt快速檢測試劑主要使用以下人群MSM現場干預VCT（自愿咨詢檢測）PMTCT（母嬰阻斷）和婚前檢查擴大檢測(鄉鎮衛生院、社區醫療衛生服務站）PITC（醫療機構主動提供檢測咨詢）54整理ppt快速檢測策略和流程當檢測點上有兩種快速檢測試劑時：常規檢測當檢測點上有兩種快速檢測試劑時：應急檢測當檢測點上只有一種快速檢測試劑時55整理ppt末梢血樣本采集方法和注意事項56整理ppt靜脈血樣本采集和注意事項57整理ppt1、常規檢測樣品初篩試驗快檢試劑1陽性反應陰性反應復檢試驗快檢試劑1+快檢試劑2均陽性反應一陰一陽均陰性反應送確證試驗室報告陰性HIV抗體快速檢測流程圖58整理ppt兩種快檢試劑同時檢測樣品均陽性反應一陰一陽均陰性反應送確證試驗室報告陰性HIV抗體快速檢測流程圖按疑似陽性咨詢告知按陰性咨詢并告知2、應急檢測59整理ppt樣品初篩試驗快檢試劑陽性反應陰性反應復檢試驗將樣本轉送篩查實驗室均陽性反應一陰一陽均陰性反應送確證實驗室報告陰性

HIV抗體快速檢測流程圖3、只有一種快速試劑時60整理ppt實驗記錄可有數碼影像資料或文字記錄文字記錄：檢測序列號，人群來源，受檢者姓名，年齡，性別，檢測日期，檢測試劑盒的名稱，批號，有效期及檢測日期，檢測結果與檢測人等。對快速檢測呈陽性反應的就診者，要收集個人的真實信息，登記身份證號碼和聯系方式（包括移動電話）。填寫《快速檢測陽性反應樣品送檢單》61整理ppt快檢質控1.樣品要求唯一編號，實驗前仔細核對，檢查。2.檢測人員每日檢查室內的溫濕度，實驗環境溫濕度應在試劑盒操作說明書要求的范圍內，試劑和樣品應按要求存放，并做好記錄。3.檢查是否有足夠的試劑庫存,明確試劑在有效期內，禁止使用過期試劑。4.每批實驗如果應用不同批號的試劑，應做好記錄。62整理ppt檢測過程質控1.記錄樣品編碼、姓名、試劑名稱及批號、操作者姓名等。2.核對樣品標號，標記，防止錯號。3.收集并集中擺放全部待檢樣品，包括外部質控品。4.需要在冰箱保存的試劑，從冷藏環境中取出后放置室溫，平衡后再使用。剩余的試劑條應立即放入自封袋中密封，按照試劑廠家提供的說明書開始操作。5.建議每一次最多做10個樣品，確保試紙條的編號與標本編號的準確對應，防止錯號和交叉污染。6.結果判定時，質控帶必須出現實驗才能成立。如未呈現質控條帶，本次試驗結果無效，樣品須重檢。7.每個檢測日做一次外部質控品，更換檢測人員時;更換不同試劑批號時，更換不同的試劑包裝時;更換不同的試劑廠家時均應一次外部質控品。63整理ppt檢測后質控1.實驗結果進行判讀時，應保證判讀地點光線充足。對于難以判讀的條帶，最好有2人判讀。2.復核樣品編號并填寫試驗結果。3.清潔并處理實驗廢棄物。4.向實驗室負責人報告檢測結果。5.檢查試劑庫存量，根據實際需要，提前向上級實驗室申請補充。6.收到試劑時，試劑的外包裝盒或內容物已損傷；標簽出現錯誤、缺失或字跡模糊(特別是產品廠家名稱，批號和貨號，失效期或/和生產日期)；缺失目錄或操作說明書；試劑盒內容物出現滲漏等。提示存在質量隱患，應詳細記錄。64整理ppt部分快速檢測試劑檢測結果比較（相同的樣本，同一人員按說明書進行檢測）65整理ppt快速檢測試驗評價

試劑穩定，可室溫長期保存。試驗時不需任何設備，迅速、簡便、特異性較好，敏感性約相當于中度敏感的ELISA，適用于應急檢測、門診急診個體檢測。目前已有國內產品。一般可在10

30min內判讀結果。66整理ppt

快速試劑使用中存在的問題快速檢測只是初篩檢測，存在一定的假陽性率和假陰性率；技術上屬于主觀判讀，不具備標準化條件；快速檢測的質量控制問題目前沒有有效方法；存在較大的批間誤差，加上不屬于政策規定項目，風險較大，基層醫療衛生單位不愿意承擔責任。擔心敏感性不夠高，不敢出陰性報告；67整理ppt幾種快速檢測試劑質量事故試劑廠家1（2007年12月29日）事件：X確證實驗室報告廠家1（膠體金法）批號為V200707033對12份HIV-1抗體陽性的病人樣品檢測有6份呈假陰性反應。結果：通知轄區內的網絡實驗室暫停使用該廠家的HIV快速試劑，封存現有試劑，退回廠家。

68整理ppt幾種快速檢測試劑質量事故試劑廠家2（2008年2月1日）事件：X人民醫院檢驗科報告試劑廠家2（膠體金法）批號為2007071801對1份HIV-1抗體陽性的病人樣品檢測1份呈假陰性反應。結果：將該樣品和試劑上送中心實驗室復核，結果為該樣品對該批號試劑以及另一批號試劑呈陽性反應。原因：試劑檢測帶的顯色太淺造成漏判和誤判。

69整理ppt幾種快速檢測試劑質量事故試劑廠家3（2008年2月23日）事件：X市CDC報告試劑廠家3（膠體金法）批號為W0680401C對5份HIV抗體確證陽性的病人樣品檢測5份呈假陰性反應。結果：將該批樣品和試劑上送中心實驗室復核，結果為該樣品對該批號試劑反應呈陽性反應。原因：試劑檢測帶的顯色太淺造成漏判和誤判。

70整理ppt幾種快速檢測試劑質量事故試劑廠家4（2009年4月10日）事件：