云南省腫瘤腫瘤醫(yī)院病理科李磊淺談冰凍切片的體會(huì)云南省腫瘤腫瘤醫(yī)院病理科李磊淺談冰凍切片的體會(huì)1影響術(shù)中病理診斷準(zhǔn)確性的因素

低溫對(duì)組織的損傷,細(xì)胞著色力及快速出片影響1

切片破碎、皺褶多、空洞、冰晶現(xiàn)象2

切片厚薄不均、細(xì)胞重疊、色調(diào)不正3

顏色對(duì)比不協(xié)調(diào)、染色不均、模糊不清4

病理申請(qǐng)單書(shū)寫(xiě)不規(guī)范、送檢不及時(shí)等5影響術(shù)中病理診斷準(zhǔn)確性的因素低溫對(duì)組織2取材速凍如何提高冰凍切片的質(zhì)量

技術(shù)員溫度切片固定染色包埋取材速凍如何提高冰凍切片的質(zhì)量技術(shù)員溫度切片固定染色包埋3相互溝通理解取材醫(yī)生臨床醫(yī)生技術(shù)員診斷醫(yī)生相互溝通理解取材醫(yī)生臨床醫(yī)生技術(shù)員診斷醫(yī)生4取材送檢組織宜新鮮、及時(shí)并避免遇水取材器械保持干燥、清潔組織本身含水較多則可用濾紙吸干避免不必要的脂肪附著通過(guò)申請(qǐng)單的病史及所取組織有初步認(rèn)知程度小結(jié)：

以上諸多要求，其實(shí)我們最主要的目的就是從根源上控制冰晶的產(chǎn)生，因?yàn)楸?huì)導(dǎo)致細(xì)胞間針狀裂隙，細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，細(xì)胞核普遍增大，影響診斷準(zhǔn)確性。取材送檢組織宜新鮮、及時(shí)并避免遇水取材器械保持干燥、清潔組織5冰凍切片制作與質(zhì)量控制課件6冰凍組織的包埋包埋組織時(shí)應(yīng)將組織周邊多留出O.C.T.用于牽引展開(kāi)切片之用,否則出刀、入刀處會(huì)有皺褶影響制片效果。O.C.T.中的小氣泡應(yīng)盡量去除,以免影響旁邊組織產(chǎn)生擠壓和皺褶。較小的組織在包埋時(shí)可以先制作一個(gè)O.C.T.凍托,待凍托基本凝固時(shí),將組織放在凍托上,再在周?chē)派螼.C.T.后速凍。囊壁類組織需要立埋時(shí),可將幾條囊壁緊靠一起卷成U字形,可以幫助囊壁更好保持側(cè)立。OCT的放置不宜過(guò)多，太多了影響速凍時(shí)間產(chǎn)生冰晶。包埋冰凍組織的包埋包埋組織時(shí)應(yīng)將組織周邊多留出O.C.T7冰凍切片制作與質(zhì)量控制課件8速凍為什么速凍呢？如何才能保證速凍？盡量減少冰晶的產(chǎn)生當(dāng)然是為了減少冰產(chǎn)生凍錘的使用半導(dǎo)體制冷液氮速凍為什么速凍呢？如何才能保證速凍？盡量減少冰晶的產(chǎn)生當(dāng)然是9凍錘的使用

在組織冷凍過(guò)程中,組織內(nèi)可產(chǎn)生大量的冰晶影響冰凍切片的診斷,為了防止組織內(nèi)冰晶的產(chǎn)生最好的辦法是使用凍錘。新鮮標(biāo)本包埋后放入冷凍臺(tái)時(shí),不能將凍錘馬上按壓在組織上,那樣會(huì)使組織受擠壓變形。應(yīng)該待O.C.T.60%~70%凝固時(shí)再將凍錘輕壓在組織上,這樣既能防止冰晶的產(chǎn)生又能得到較平整的切面。凍錘的使用10冰凍切片制作與質(zhì)量控制課件11溫度溫度過(guò)低組織過(guò)硬溫度溫度過(guò)低組織過(guò)硬12溫度過(guò)高硬度不夠溫度過(guò)高硬度不夠13小結(jié)：技術(shù)員切片溫度組織硬度控制最佳溫度是獲得既薄又完整切片的基礎(chǔ)1溫度過(guò)低組織過(guò)硬導(dǎo)致切片破碎2溫度過(guò)高硬度不夠無(wú)法切片3小結(jié)：技術(shù)員切片溫度組織硬度控制最佳溫度是獲得既薄又完整切片14切片組織凍結(jié)后將組織連同樣本托固定到冷凍頭上,設(shè)定切片厚度4um。用樣品快進(jìn)按鈕將樣品移近刀口,調(diào)整要切的平面,利用慢進(jìn)按鈕先粗切修出組織最完整切面后細(xì)切1~2張棄用,繼續(xù)細(xì)切時(shí)左手持毛筆輕拉O.C.T.邊緣,右手切片,雙手勻速配合。待組織切片完整拉下鋪于組織樣品上,（也可以使用廢片輕輕拖至切片刀刃上，右手半切組織過(guò)程中，順勢(shì)將廢棄組織與待切組織片粘連，輕輕向后拉動(dòng)，當(dāng)組織切到位點(diǎn)以后，就形成一張完整的切片）再用常溫載玻片粘貼后迅速放入乙醚酒精混合固定液中中固定2分鐘左右。切片組織凍結(jié)后將組織連同樣本托固定到冷凍頭15冰凍切片制作與質(zhì)量控制課件16切片注意事項(xiàng)1、樣本托放入機(jī)頭時(shí)，必須根據(jù)組織的結(jié)構(gòu)及走勢(shì)來(lái)放置。2、較硬的組織切片時(shí)，組織表面呈膠凍狀時(shí)，將其修切去，因?yàn)槔鋬鍪亲韵露希砻娉誓z凍狀時(shí)(例如內(nèi)膜癌的子宮肌壁帶全層)，下面組織已符合切片最佳時(shí)機(jī)。3、組織過(guò)凍時(shí)，可帶上薄膜手套用拇指置于組織塊表面幾秒鐘。4、組織有部分不需要或阻礙我們獲得高質(zhì)量切片時(shí)，可將其挖除。5、切片時(shí)，注意觀察組織表面有無(wú)包膜，結(jié)節(jié)，但修片時(shí)也必須注意觀察重點(diǎn)病變的微小病灶避免修切過(guò)度，造成誤診，漏診，切片厚度4~5um，淋巴結(jié)切片3um為宜。切片注意事項(xiàng)1、樣本托放入機(jī)頭時(shí)，必須根據(jù)組織的結(jié)構(gòu)及走勢(shì)來(lái)17OCT疑似病變組織診斷醫(yī)生所取材組織OCT疑似病變組織診斷醫(yī)生所取材組織18冷凍常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策1、取材常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策1.1取材常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策組織被擠壓:取材刀剪必須鋒利，切割時(shí)不可來(lái)回銼動(dòng)夾取組織時(shí)切勿猛壓，以免擠壓損傷組織。

1.2組織塊過(guò)大:冷凍時(shí)間延長(zhǎng)易產(chǎn)生冰晶，在不影響病理診斷的前提下，標(biāo)本取材盡量小一些冷凍常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策1、取材常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策1.1取材常見(jiàn)問(wèn)題19切片后用載玻片貼片時(shí)手不能顫抖,而且在貼附組織時(shí)手要有一個(gè)向下伸展的動(dòng)作,切片機(jī)的蓋打開(kāi)越小越好。2.組織貼附不平或有皺褶:切片后用載玻片貼片時(shí)手不能顫抖,而且在20

常見(jiàn)于組織結(jié)構(gòu)軟硬不同的組織,解決方法:標(biāo)本較硬的部分?jǐn)[在上端,先切較軟的部分,依次切到硬的部分,同時(shí)用毛筆輕輕地展開(kāi),或用抗卷板才能切出完整的切片。3.組織擠壓、皺縮:常見(jiàn)于組織結(jié)構(gòu)軟硬不同的組織,解決方法:標(biāo)本較硬的部分214.組織破碎

組織破碎:如果組織冰凍過(guò)頭,使之發(fā)脆就會(huì)發(fā)生破碎,這時(shí)用手貼在組織上片刻稍加溫使其軟化即可切出完整的切片。4.組織破碎組織破碎:如果組織冰凍過(guò)頭,使之發(fā)脆就會(huì)發(fā)生225脫片

冰凍切片一般很少脫片,偶爾見(jiàn)于壞死組織或纖維較多的組織，或者載玻片不清潔切片太厚或組織本身的原因。

解決方法:將組織切片切得更薄2-3um,切片固定后用吹風(fēng)機(jī)吹干或用防脫片貼片后染色，染色時(shí)輕拿輕放，防止人為脫片。5脫片冰凍切片一般很少脫片,偶爾見(jiàn)于壞死組織或纖維較236冷凍欠佳致切片困難:

不易成形，產(chǎn)生搓板狀，厚薄不均破碎或糊糊狀:組織冷凍時(shí)間不夠或冷凍機(jī)內(nèi)設(shè)定的溫度未達(dá)到要求可延長(zhǎng)冷凍時(shí)間或調(diào)低冷凍機(jī)冷凍溫度若為刀片的溫度不夠冷，要預(yù)冷刀片。6冷凍欠佳致切片困難:不易成形，產(chǎn)生搓板247、切片出現(xiàn)冰晶

主要是冷凍速度不夠快捷，組織取材太厚、切片時(shí)組織溫度太低、動(dòng)作力度過(guò)大等因素造成。因此組織取材要適中為避免組織脫落，取好的組織底部及周?chē)皶r(shí)入放適量的OCT,然后迅速放入冷凍機(jī)內(nèi),不宜過(guò)多,否則會(huì)影響速凍時(shí)間而產(chǎn)生冰晶7、切片出現(xiàn)冰晶主要是冷凍速度不夠快捷，組織取材太厚25染色常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策

細(xì)胞核不清晰，核漿染色對(duì)比度不好應(yīng)選擇合適的蘇木精和伊紅配方，為了加快染色時(shí)間，蘇木精提前配制成熟后再加溫使用，成熟蘇木精加溫后染色時(shí)間1～2min即可，由于蘇木精加溫后容易被破壞，應(yīng)及時(shí)更換，蘇木精染色后應(yīng)顯微鏡下觀察，確認(rèn)細(xì)胞核染色清晰方可進(jìn)行下一步染伊紅前切片一定要用流水沖洗干凈，否則，伊紅難著色或著色不均勻。染色常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)策細(xì)胞核不清晰，核漿染色對(duì)比度不好26固定冰凍切片在病理快速診斷中運(yùn)用廣泛，但要做好一張優(yōu)良的冰凍切片并非容易，尤其是冰凍組織固定不良會(huì)造成切片背景不清，染色不良等問(wèn)題。所以一種合適的固定液是冰凍切片的必備條件。我院病理科產(chǎn)用乙醚酒精冰醋酸苦味酸混合固定液。固定冰凍切片在病理快速診斷中運(yùn)用廣泛，但要做好27染色選用新鮮配置的改良Harris蘇木素1蘇木素加溫，染色力強(qiáng)，但加速其氧化，需經(jīng)常更換2藍(lán)化時(shí)選用溫水，建議不使用稀氨水3為了提高染片效率，染色所用各梯度酒精、二甲苯需按時(shí)更換4染色選用新鮮配置的改良Harris蘇木素1蘇木素加溫，染色力28染色

固定蘇木素鹽酸酒精藍(lán)化70%AL伊紅95%AL80%AL無(wú)水酒精1無(wú)水酒精2無(wú)水酒精4無(wú)水酒精3二甲苯1二甲苯2封片染色

固定蘇木素鹽酸酒精藍(lán)化70%AL伊紅95%AL80%A29冰晶會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞間針狀裂隙，細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，細(xì)胞核普遍增大，影響診斷準(zhǔn)確性。冰晶會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞間針狀裂隙，細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，細(xì)胞核普遍增大，影響30冰凍切片制作與質(zhì)量控制課件31組織過(guò)凍以后照成的組織破碎，影響診斷準(zhǔn)確性組織過(guò)凍以后照成的組織破碎，影響診斷準(zhǔn)確性32請(qǐng)大家看一下這張切片是什么原因照成的？？？？？回答對(duì)了有香吻哦！親請(qǐng)大家看一下這張切片是什么原因照成的？？？？？回答對(duì)了有香吻33小結(jié)總之制作一張優(yōu)良的冰凍切片，診斷醫(yī)生和技術(shù)員都需要高度的責(zé)任心及相互之間的溝通與合作，尤其是技術(shù)員在日常工作中不斷的摸索、學(xué)習(xí)和提高，練就一身過(guò)硬的技術(shù)，盡可能一次把切片做好，更好的為臨床服務(wù)，減少病人的痛苦。小結(jié)總之制作一張優(yōu)良的冰凍切片，診斷醫(yī)生和技術(shù)員都需要高度的34討論1、冰凍固定液固定標(biāo)本時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)組織切片的影響有沒(méi)有?如果有，到底影響了哪些方面？除了適當(dāng)?shù)墓潭〞r(shí)間有