微物與窗學(xué)第8章藥物制劑的微生物學(xué)檢耷掌握藥物的體外試菌試驗(yàn)方法(瓊脂擴(kuò)散法和系列稀輝法)了解藥物的體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)。2.孝握一般滅菌制劑的無菌檢查方法和原理,熟悉特殊藥品的無菌檢查法3.李握非滅菌藥物的微生物總嶽測定方法,熟悉藥品的大腸杄菌檢查方法。4.了解一般藥品的沙門酋、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和破傷風(fēng)桿菌的檢查方法遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物同窗學(xué)第1節(jié)藥物的抗菌試驗(yàn)藥物的體外抗菌試驗(yàn)包括用于區(qū)別藥物是抑菌或殺菌藥物的抑菌試驗(yàn);測定藥物殺菌活性的奀菌試驗(yàn)以及檢查兩種藥物聯(lián)合作用的聯(lián)合抗般抑菌藥物只能抑制微生物生長,不能殺死微生物,抑菌藥物被除去,微生物又可以恢復(fù)繼續(xù)生長。殺菌藥物能殺死微生物,殺菌藥物除去后,微生物仍然不能生長遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物與窗學(xué)藥物的抑菌作用或殺菌作用是在一定條件下相對而言的。在我們檢測時(shí),藥物的作用受到用藥時(shí)培養(yǎng)基的組成、溫度、PH值及所用的菌種、菌量等各個(gè)因素有關(guān)雖然說體外抗菌試驗(yàn)有很多優(yōu)點(diǎn),但是由于體外抗菌試驗(yàn)沒有復(fù)雜的體內(nèi)因素影響,因此藥物體外抗菌試驗(yàn)和體內(nèi)抗菌試驗(yàn)可能會(huì)出現(xiàn)不一致的結(jié)果。所以,一般我們在體外對藥物進(jìn)行測試后,有效的藥再要進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn),如果體內(nèi)試驗(yàn)再次證實(shí)此藥有效的話,才能推薦應(yīng)用到臨床,遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物同窗學(xué)第一節(jié)藥物的體外抑菌謎驗(yàn)藥物的體外抑菌試驗(yàn))體外抑菌試驗(yàn)藥物的體外抑菌試驗(yàn)是常用抗菌試驗(yàn)方法,其中最常用的方法用系列稀釋法和瓊脂擴(kuò)散法稀釋法稀釋法有液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法和固體稀釋法(斜面法)兩種。這兩種方法都可以用來測定藥物的最小抑菌濃度IC):是指該藥物能抑制細(xì)菌生長的最低濃度,通常用μgm或U/m表示具體的液體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法見書本(P138圖8-1)固體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法,又可分為平板法和矧法。遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物與窗學(xué)2.2.瓊脂擴(kuò)散法利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散,并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細(xì)菌生長的原理進(jìn)行的。一般用于細(xì)菌和酵母菌的藥敏試驗(yàn)1.濾紙片法(紙碟法)濾紙片法是最常用的方法,適用于新藥的初篩試驗(yàn)(初步藥物是否有抗菌作用)及臨床的藥敏試驗(yàn)(細(xì)菌藥物第性試驗(yàn)、以便選擇用藥)。濾紙片分濕、干兩種,可以在試驗(yàn)時(shí)用無菌紙片沾取藥物溶液放在含菌的平板表面,也預(yù)先做成一定濃度的干燥紙片。一般來說預(yù)先做成的干燥紙片實(shí)用一些而且準(zhǔn)確一些遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物與窗學(xué)至于干燥紙片的制備方法:選用吸水力強(qiáng)而且質(zhì)地均勻的濾紙,用打洞機(jī)制成6mm直徑的圓紙片,120°℃千燥滅菌2小時(shí)。然后把配制好的各種適宜濃度的抗生素溶液,每100張紙片加入05m藥液,使它均勻浸潤,放在無菌平皿中,37℃C,使它干燥,分裝小瓶中,封口,4℃保存。如果是β-內(nèi)酰胺類抗生素還要放在-20℃C保存。這就制成了干燥的含藥液的紙片,般藥敏試驗(yàn)常采用濾紙片法,我們可以根據(jù)抑菌圈的大小,來判斷菌種對藥物的敏感性,是敏感,中度敏感還是耐藥。遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物同窗學(xué)世界衛(wèi)生組織規(guī)定了抗菌藥物的敏感性評定標(biāo)準(zhǔn),在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下根據(jù)抑菌圈大小來判斷,比如抗生素或化療藥物抑菌圈直徑(mm)耐藥中敏敏感氯霉素3-17218紅霉素314-17四環(huán)素1415-18≥19卡那霉素≤1314-17≥18遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物與窗學(xué)1.打洞法在含菌瓊脂平板上打洞(一般打6個(gè)孔,4個(gè)小孔加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液,另外2個(gè)小孔加血清樣品,放在37°C18小時(shí),測定其抑菌圈直徑。所以說微量法適于藥物血濃度的監(jiān)測。優(yōu)點(diǎn)是微量(血清用量少)敏感,操作簡便除此之外還有管碟法、直接滴加法和挖溝法:適用于測試種藥物對幾種細(xì)菌的抗菌作用。方法是先制備普通瓊脂平板,并在平板上挖直溝,在溝內(nèi)滴加藥液,在溝側(cè)接種細(xì)菌。經(jīng)過培養(yǎng)以后觀察家細(xì)菌生長的情況。我們可以根據(jù)溝和細(xì)菌間的抑菌距離的長短,來判斷該藥物對這些細(xì)菌的抗菌能力遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物微物與窗學(xué)體外殺菌試驗(yàn)殺菌試驗(yàn)是用來評價(jià)藥物對微生物的致死浯活性的.1.最低殺菌濃度(MBC)(最小致死濃度MLC)的測定按液體培養(yǎng)基稀釋法的操作方法測了藥物的MC然后把未長出菌的各個(gè)試管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板上,培養(yǎng)后凡是平板上無菌生長的藥物低濃度就是最小致死濃度(MLC)。如果是細(xì)菌的話可以稱為最小殺菌濃度(MBC)。遼陽肌業(yè)技水學(xué)院制儆生物活菌計(jì)數(shù)法將定量的試驗(yàn)菌加入到一定濃度的定量藥物中,作用定時(shí)間后,取樣進(jìn)行活菌數(shù)計(jì)數(shù),從存活的微生物數(shù)量計(jì)算出藥物對試驗(yàn)菌的致死率,從而判斷藥物的殺菌能力。活菌計(jì)數(shù)一般是將定量的藥物與試驗(yàn)菌作用后混合液稀釋后,混入瓊脂培養(yǎng)基做成平板,培養(yǎng)后數(shù)平板上形成的菌落數(shù),