分枝桿菌及檢驗(yàn)分枝桿菌（Mycobacterium）

一類細(xì)長彎曲的桿菌，因有分枝生長的趨勢而得名主要特點(diǎn)細(xì)長彎曲，細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)，分枝狀生長。常用抗酸染色鑒定（抗酸陽性呈紅色）。引起疾病多呈慢性，且伴肉芽腫。分枝桿菌的分類分類生長特性主要對人致病的分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌生長緩慢人型結(jié)核分枝桿菌、牛型分枝桿菌非典型分枝桿菌Ⅰ組生長緩慢、光產(chǎn)色堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌Ⅱ組生長緩慢、暗產(chǎn)色瘰癘分枝桿菌Ⅲ組生長緩慢、不產(chǎn)色鳥-胞內(nèi)分枝桿菌Ⅳ組生長快速、偶發(fā)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌人工培養(yǎng)基上不生長第一節(jié)結(jié)核分枝桿菌一、生物學(xué)性狀1.形態(tài)與染色細(xì)長略彎，分枝狀排列或聚集成團(tuán)。抗酸染色陽性，菌體染成紅色，非抗酸菌染成藍(lán)色。G+，不易著色染色方法：齊-尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法原理：細(xì)胞壁中含大量脂質(zhì)（尤其是分枝菌酸）影響染料的滲透，且一旦著色便可抵抗鹽酸酒精的脫色作用步驟：涂片、固定→石炭酸復(fù)紅弱火加溫3～5分鐘鹽酸酒精美蘭復(fù)染鏡檢

結(jié)核桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色2.培養(yǎng)特性專性需氧營養(yǎng)要求較高，在羅氏培養(yǎng)基上生長良好。生長緩慢，繁殖一代約18h，培養(yǎng)2～4w才可見菌落生長。典型菌落為粗糙型，表面干燥呈顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，如菜花樣。結(jié)核菌菌落３.生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類，熱觸酶（-），加熱68℃散失活性（區(qū)別非結(jié)核菌）煙酸合成（+）、硝酸鹽還原（+）、吡嗪酰胺（+），可與牛型結(jié)核分枝菌鑒別４.抵抗力強(qiáng)四怕：對乙醇、濕熱、紫外線、抗結(jié)核藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）敏感５.變異性形態(tài)結(jié)構(gòu)變異：顆粒狀（Much顆粒—病灶中革蘭陽性非抗酸性）、絲狀毒力變異：卡介苗(BCG)，將牛型分枝桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒活疫苗。耐藥性變異（二）微生物檢驗(yàn)1.標(biāo)本根據(jù)感染部位采集不同的標(biāo)本，最常用痰液標(biāo)本。2.標(biāo)本前處理酸處理（4%HCl）和堿處理（4%NaOH）兩種方法。標(biāo)本核酸檢測接種固體培養(yǎng)基可疑菌落涂片抗酸染色鏡檢抗體檢測慢性生長菌快速生長菌菌種鑒定

標(biāo)本前處理接種液體培養(yǎng)基接種小白鼠豚鼠臟器涂片鏡檢抗酸染色鑒定試驗(yàn)檢驗(yàn)程序3.形態(tài)學(xué)檢查（高壓滅菌后進(jìn)行）直接涂片染色鏡檢濃縮集菌涂片檢查法金胺O染色：呈橘黃色，可提高檢出率初步報告：檢出抗酸分枝桿菌（結(jié)核桿菌？）4.分離培養(yǎng)L-J培養(yǎng)基上生長緩慢，涂片抗酸染色5.核酸檢測

PCR法報告方式抗酸染色鏡檢結(jié)果-仔細(xì)檢查300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌±300個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~2條抗酸菌＋100個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌2＋10個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌3＋每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌4＋每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上抗酸菌(三)臨床意義1.致病物質(zhì)：主要與菌體成份有關(guān)。（1）脂質(zhì)索狀因子:引起慢性肉芽腫分枝菌酸：與抗酸性有關(guān)蠟質(zhì)D:具有佐劑作用硫酸腦苷脂:阻礙吞噬磷脂:促類上皮細(xì)胞形成，與結(jié)核結(jié)節(jié)形成有關(guān)（2）蛋白質(zhì)：誘發(fā)超敏反應(yīng)（3）糖類：抵抗吞噬作用2.所致疾病感染途徑：經(jīng)多途徑感染，引起全身各組織結(jié)核病，以肺結(jié)核最多見感染類型：原發(fā)感染和繼發(fā)感染二、致病性消化道呼吸道破損皮膚粘膜通過多種途徑侵入機(jī)體，感染以肺結(jié)核最多見，可分為原發(fā)感染和原發(fā)后感染兩種類型。二、致病性1.原發(fā)感染：多發(fā)生于兒童，初次感染因缺乏特異性免疫，原發(fā)灶內(nèi)細(xì)菌可經(jīng)淋巴管擴(kuò)散至肺門淋巴結(jié)，引起肺門淋巴結(jié)腫大。原發(fā)灶、淋巴管炎和腫大的肺門淋巴結(jié)稱為原發(fā)綜合征。二、致病性2.原發(fā)后感染：由于機(jī)體已有特異性免疫，病灶常限于局部，被纖維囊包繞的干酪樣壞死灶可鈣化而痊愈，若干酪樣壞死被液化，排入鄰近支氣管，大量結(jié)核分枝桿菌隨痰排出體外，傳染性強(qiáng)，此為開放性肺結(jié)核。3.免疫性

以細(xì)胞免疫為主抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫或稱傳染性免疫抗結(jié)核免疫與Ⅳ型超敏反應(yīng)同時出現(xiàn)4.結(jié)核菌素試驗(yàn)（1）原理用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)，以檢測受試者對結(jié)核桿菌是否有細(xì)胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的試驗(yàn)。（2）結(jié)核菌素試劑舊結(jié)核菌素（OT)和純蛋白衍化物（PPD5單位）（3）結(jié)果48h-72h,根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果（3）結(jié)果＜5mm為陰性5～15mm為陽性＞15mm為強(qiáng)陽性（4）意義選擇卡介苗接種對象、測定接種后免疫效果了解人群結(jié)核菌的自然感染率作為嬰幼兒結(jié)核病的輔助診斷測定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)

D休眠菌A不斷繁殖異煙肼、利福平、鏈霉素B細(xì)胞內(nèi)菌（酸性抑制）吡嗪酰胺

C偶然繁殖利福平結(jié)核菌生長速度慢

快病灶中不同生長速度的菌群組成與殺菌藥物作用示意圖第二節(jié)麻風(fēng)分枝桿菌1.生物學(xué)特性細(xì)胞內(nèi)寄生，有麻風(fēng)桿菌寄生的細(xì)胞呈泡沫狀，稱為麻風(fēng)細(xì)胞。體外人工培養(yǎng)尚未成功犰（qiú）狳（yú）是動物感染模型。麻風(fēng)分枝菌犰狳2.臨床意義:1.傳播途徑：主要是密切接觸2.所致疾病：麻風(fēng)（侵害皮膚、粘膜和神經(jīng)系統(tǒng)）3.臨床分型：瘤型（占20%～30%，傳染性強(qiáng)）結(jié)核樣型（占60%～70%，傳染性弱）界線類（可轉(zhuǎn)化為以上兩型）麻風(fēng)“獅面”3.防治原則：早發(fā)現(xiàn)（檢驗(yàn)時，標(biāo)本通常采用刮片），早隔離、早治療治療藥物主要有砜類（氨苯砜、苯丙砜、醋氨苯砜）、利福平、氯苯吩嗪及丙硫異煙胺。第三節(jié)非典型分枝桿菌1.非典型分枝桿菌除人型結(jié)核分枝桿菌、牛型結(jié)核分枝桿菌與麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌菌群，稱為非結(jié)核分枝桿菌。2.致病性多