臨床免疫定性檢測

的性能驗證1精選ppt高速列車性能驗證空氣動力學速度車體轉向架運行固定、懸掛的零部件強度穩(wěn)定性舒適感故障率……2精選ppt第3頁測定系統(tǒng)方法學操作程序校準品儀器試劑測定系統(tǒng)的關鍵要素3精選ppt醫(yī)學檢驗為什么需要“性能驗證”？評價檢測系統(tǒng)是否滿足臨床檢測和認可組織的要求（ISO15189）；驗證廠家提供的試劑參數(shù)能否在本實驗室得到重現(xiàn)。4精選ppt什么時候進行性能驗證使用新的檢測試劑或系統(tǒng)時；更換檢測試劑或系統(tǒng)時。更換新的試劑或系統(tǒng)意義：更易于操作更高的檢測性能更經(jīng)濟更能滿足實驗室測定要求5精選ppt

一.

定性臨床應用與分類1、定性測定的臨床應用免疫學測定：感染性疾病、腫瘤標志物核酸和基因檢測微生物檢驗細胞學檢驗寄生蟲檢驗6精選ppt2、定性實驗的臨床分類篩查實驗：如便潛血、TP診斷實驗：如微生物學培養(yǎng)與細菌鑒定確認實驗：對以上已做出的檢驗結果進行驗證和確認7精選ppt3.幾個重要概念

篩查試驗：臨床上篩查方法通常用于檢測整個人群（或者人群中的特定部分）中特定指標的情況。例如對需輸血患者樣本做HIV血清學試驗。

一般來說，這些用于篩查的定性試驗必須具有高敏感性以確保真陽性結果的檢出。如果篩查試驗的假陽性結果所造成的社會及經(jīng)濟后果不是非常嚴重，這種低特異性可通過特異性較好的確認試驗加以彌補。CLSI

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Guideline8精選ppt3.幾個重要概念診斷試驗：通常用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在的診斷性定性試驗。例如各種微生物培養(yǎng)就是用于檢查感染情況的診斷試驗。

臨床上對治療的要求，診斷試驗應具有很好的敏感性和特異性。如果診斷試驗后還進行確認試驗，那么診斷試驗的特異性要求可以稍微降低。CLSI

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Guideline9精選ppt3.幾個重要概念確認試驗：確認試驗用于驗證篩查試驗或者診斷試驗結果。如果確診試驗證實了之前的檢測結果，臨床醫(yī)生即可作出診斷。確認試驗通過設計使其具有較高的特異性（有時甚至以犧牲敏感性為代價）以及高陽性預測值。免疫印跡試驗就是一種用于HIV血清學試驗等篩查試驗之后的確認試驗。10精選ppt

3.幾個重要概念敏感性或陽性測定能力指數(shù)（DI（＋））：可定義為一實驗對陽性標本測定后給出陽性結果的能力。DI（＋）=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%特異性或陰性測定能力指數(shù)（DI（－））：則為對陰性樣本測定給出陰性結果的能力DI（－）=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%

11精選ppt3.幾個重要概念陽性預示值：即測定為陽性的標本實際上為陽性的可能性。

=[真陽性/（真陽性+假陽性）]×100%陰性預示值:則為一份給出陰性結果的樣本實際上為陰性的可靠性。

=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%12精選ppt臨床診斷（金標準）總計陽性陰性驗證方法陽性ABA+B陰性CDC+D總計A+CB+DN13精選ppt敏感度=100%×[A/（A+C）]特異性=100%×[D/（B+D）]相關樣本的患病率=100%×[（A+C）/N]陽性預測值（PVP）=100%×[A/（A+B）]陰性預測值（PVN）=100%×[D/（C+D）]方法效率（正確率）=100%×[（A+D）/N]14精選ppt“預示值”對臨床檢驗結果影響預示值對一個有95%敏感性和95%特異性的試劑檢測結果的影響（100,000人）

結果10%感染率1%感染率

檢出(+)未檢出(－)

檢出(+)未檢出(－)+9,50050095050

－4,50085,5004,95094,050敏感性(TP/[TP+FN])95%95%特異性(TN/[TN+FP])95%95%陽性預示值TP/[TP+FP]9500/[9500+4500]=67.9%950/[950+4950]=16%陰性預示值TN/[TN+FN]85500/[85500+500]=99.4%94050/[94050+50]=99.9%15精選ppt二.定性檢測系統(tǒng)的性能驗證

驗證的內容:1.正確度（準確度）2.精密度3.敏感性4.特異性5.CUTOFF值驗證6.其他（需要時）16精選pptEP15A2EP17AEP12ClinicalLaboratoryandStandardsInstitute(CLSI)

涉及免疫定性檢測評價方法標準醫(yī)學實驗室精密度和準確度的確認檢出限與定量限的評價定性檢測評價臨床實驗室標準化協(xié)會17精選ppt性能驗證前的準備應熟悉待驗證的試劑或系統(tǒng)進行必要的培訓，包括樣本的處理和儲存、試劑的處理和儲存、合理的檢測方案、對結果合理的解釋以及系統(tǒng)的質量控制等。制定質量保證計劃確定患者樣本的數(shù)量及強弱（評價重復性）確定比較的方法CLSI

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Guideline18精選ppt性能驗證的合格標準從何而來？試劑盒說明書國際和／或國際標準19精選ppt性能驗證前樣本的準備質控品：使用商品化質控物進行，包括陰性和陽性。樣本的采集和保存：采集時間、保存方式等必須保證一致性。CLSI

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Guideline20精選ppt方法比較用樣本數(shù)量取決于評價者的目的。作為最低要求，檢測要持續(xù)到至少用比較方法獲得50個陽性樣本。并且至少用比較方法獲得50例陰性樣本以確定此種檢測方法的特異性。CLSI

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Guideline21精選ppt

1.準確度驗證1）檢測已知值的參考物質室間質評材料(衛(wèi)生部或者CAP)廠商提供的已賦值的參考材料分析用參考方法或決定方法定值的材料。2）方法比較試驗：樣本數(shù)為10-20個，兩種方法同時測定同樣的樣品，用KAPPA檢驗方法分析兩種方法檢測結果一致性.(比如HBV酶免法和發(fā)光法比對)22精選ppt選取40份（20份）樣本,最好陰陽性各半↓隨機盲法重新分號↓檢測樣本↓將所有檢測結果匯總填表↓計算評價性能指標23精選ppt2.精密度驗證1）批內精密度:同一份樣本在同一批次內平行重復檢測10次.然后計算均值,SD和CV.2）批間精密度:同一份樣本連續(xù)檢測10天,每天平行檢測雙孔.然后計算均值,SD和CV.

Note:用S/CO比值進行統(tǒng)計計算.

最好選擇臨界值,或弱陽性樣本.判斷標準:批內CV小于15%,批間CV小于25%.24精選ppt批內重復性的驗證高、中、低三個濃度的樣本，在一批檢測內，重復檢測20次（孔），計算所得S/CO值的均值和SD，計算批內CV%。判斷結論：應≤試劑說明書所標明的批內變異。ELISA的批內變異CV%應≤10%。25精選ppt批間重復性的驗證高、中、低三個濃度的樣本，在10天以上時間內單次（孔或管）重復進行20批檢測，計算所得S/CO值的均值和SD，計算批間CV%。判斷結論：應≤試劑說明書所標明的批間變異。ELISA的批間變異CV%應≤15%。26精選ppt

3.敏感性1）驗證方法:取10-20份已知真陽性的樣本，用常規(guī)檢測方法檢測，計算檢測陽性的樣本占樣本總數(shù)的比例。

2）樣本來源:臨床診斷的陽性病人血清；廠家提供的陽性對照；決定性參考方法檢測陽性的樣本；以上陽性樣本來源緊張時，可以進行稀釋（如2：3，3：4這樣稀釋）27精選ppt

4.特異性1）驗證方法：選取20份正常健康人血清（一般取自健康體檢者），計算其檢測陰性結果所占百分率。

2）樣本來源:體檢樣本,體檢者確認符合要求后即可.NOTE:部分項目在健康體檢人群中陽性率也很高,此類項目特異性驗證很難執(zhí)行,建議引用廠家說明書.

比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗體IgG.因為很難確認體檢者既往是否有過感染史,而IgG抗體在體內存留時間長.因此很難收集到真正意義上的陰性樣本.28精選ppt特異性驗證（干擾）特定病原體以外感染性疾病患者的樣本。含有干擾性物質的樣本：類風濕因子（RF）陽性、含異嗜性抗體、溶血、脂血、高膽紅素樣本。結果判斷：非特定病原體感染患者樣本均應為陰性。含一定濃度干擾物質的樣本檢測應為陰性。29精選ppt5.CUT-OFF重復性和測定下限驗證CUT-OFF重復性驗證：樣本濃度應接近臨界值。不宜用陰性或強陽性樣本。批內和批間變異驗證：高、中和低三個濃度（與試劑盒說明書中所述相適應）30精選ppt臨界點的定義同樣一份樣本，在多次重復實驗中各有50%的幾率獲得陽性或陰性的結果時該分析物的濃度。CLSI

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Guideline31精選ppt臨界點（CUT-OFF)與試劑盒判斷值（CUT-OFF值）的區(qū)別這里的臨界點指的是一個處于試劑檢測臨界點的樣本濃度，其一旦確定，是不變的。試劑盒CUT-OFF值指的是一個判斷某一次測定結果的由陰性和陽性對照信號值按一定公式計算出來的信號值，每次測定都會有所差異。32精選ppt(1)CUT-OFF重復性驗證CUT-OFF的重復性（同時包含測定下限的驗證）批內變異的驗證批間變異的驗證33精選ppt驗證步驟制備足夠40次重復檢測的3份樣本：分別為處于臨界濃度、高于臨界濃度20%和低于臨界濃度20%的樣本。重復檢測樣本40次，確定每一份樣本結果為陽性和陰性的百分比。評價臨界濃度是否準確？評價+20至-20%的濃度范圍是否包含于、位于或者超出這種方法的95%區(qū)間？CLSI

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Guideline34精選pptC50是否準確？40次測試C501陽性結果=<13/40(32.5%)不正確>=27/40(67.5%)2陽性結果（14-26）/40（35%-65%）正確35精選ppt陽性結果重復性檢測總次數(shù)次數(shù)百分比真正百分比樣本的實際濃度201050%30%-70%C30-C70402050%35%-65%1005050%40%-60%不同C50重復檢測次數(shù)與檢出

陽性數(shù)的關系36精選ppt臨界點（CUT-OFF）的重復性指的是什么？是為正在評價的檢測試劑或系統(tǒng)建立分析物的臨界濃度(C50)，并且確保臨界濃度±20%的范圍處于95%區(qū)間內。CLSI

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Guideline37精選ppt如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點”檢測試劑或系統(tǒng)的說明書可能會注明分析物的臨界濃度。如果臨界濃度未知，則可以將陽性樣本進行一系列稀釋，然后將他們進行重復檢測以確定能夠獲得50%陽性和50%陰性結果的那個稀釋度。這一稀釋度的分析物濃度即為臨界點。CLSI

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Guideline38精選ppt(2)測定下限的驗證處于測定下限濃度（如臨界點濃度+20%）的樣本，重復檢測20次，應至少有18次以上(>90%)為陽性反應。39精選ppt重復性驗證的質量控制質控品：如方法學比較在10天內完成，則每一批次都要進行質控樣本檢測，如出現(xiàn)失控，則當次檢測結果無效。安排重新檢測以替換不合格的批次。實驗室要分析失控的原因。不合格批次在10天內不應超過1次或20天內不超過兩次。如若超出，所在實驗室應中止檢測工作并咨詢試劑制造商以確定原因并采取糾正措施。得出20次重復檢測結果。如果方法比較研究超過20天，則每一批次對每份對照樣本進行單次檢測，總計也提供20次結果。

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Guideline40精選ppt6.其他

（1）同一項目不同檢測方法或儀器的比對

適用范圍:一個項目有兩種以上的方法或者兩臺以上的儀器(包括同一型號的儀器)同時檢測,需要進行一致性比對。

（注：定量檢測中,報告單位不同的不需要比對）41精選ppt首次比對選取40份(20)樣本,最好陰陽性各半↓隨機每8份分成一組↓兩種方法(或兩臺儀器)每天平行檢測一組樣本↓將所有檢測結果匯總↓Kappa檢驗,評價一致性42精選ppt新鮮患者血清陰性2例，陽性3例，陽性包含有S/CO高、中、低值，用新舊批號試劑檢測。低值避開“灰區(qū)”夾心法：S/CO低值1.2－3競爭法：S/CO低值0.4－0.6判斷標準：符合率為100%為可接受。（2）更換批號的簡易比對：43精選ppt（3）編制性能驗證的SOP理想的操作方法：操作中影響測定結果的關鍵環(huán)節(jié)已知；具有可操作性的SOP。44精選ppt怎樣編寫

SOP？XXX單位XXX實驗室XXX標準操作程序編號：啟用日期：版本：第頁共頁一目的：適用范圍：職責或責任人：（方法原理）（檢測設備和試劑）（所需的環(huán)境條件）操作步驟：

1．

2．

3．。。。。。八、本操作程序變動程序：九、相關的文件十、相關的記錄表格和報告編寫人審核人批準人45精選ppt（4）試劑的性能驗證（定性）重復性和準確性測定下限(Detectionlimit)（定性）批內變異(<10%)和批間變異(<15-25%)

“鉤狀”效應(Hookeffect)變異體的檢測能力(如：HBsAg)臨床敏感性和特異性抗干擾能力46精選ppt47精選ppt48精選ppt49精選ppt50精選ppt51精選ppt52精選ppt三.性能驗證的注意事項1.方法比較持續(xù)時間10~20天。CLSI

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Guideline53精選ppt2.數(shù)據(jù)收集的檢查

每次實驗，應立即記錄所有原始檢測數(shù)據(jù)并復核，以早期發(fā)現(xiàn)分析系統(tǒng)及人為誤差的來源。一旦發(fā)現(xiàn)某些結果是由可解釋的誤差引起的，則應將其記錄下來，同時，這些結果不能用于數(shù)據(jù)分析。如不能確定誤差產(chǎn)生的原因，則保留原始結果。54精選ppt3.不一致結果的處理如果比較方法不是100%準確，可以用“金標準”“參考方法”來檢測在檢測和比較方法間產(chǎn)生差異的樣本。CLSI

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