菊花的組織培養第1頁，課件共46頁，創作于2023年2月扦插嫁接壓條

第2頁，課件共46頁，創作于2023年2月營養繁殖扦插嫁接壓條

通過必修課的學習，我們已經了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？組織培養第3頁，課件共46頁，創作于2023年2月專題3植物組織培養技術第4頁，課件共46頁，創作于2023年2月課題一菊花的組織培養第5頁，課件共46頁，創作于2023年2月一、課題背景二、基礎知識（一）植物組織培養的基本過程

在植物的個體發育過程中，細胞在形態、結構和生理功能上都會出現穩定性的差異，形成這些差異的過程叫做細胞分化。

離體的植物組織或細胞，在培養了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成排列疏松而無規則的高度液泡化的呈無定形狀態的一群薄壁細胞。1.細胞分化：2.愈傷組織：3.脫分化：4.再分化：第6頁，課件共46頁，創作于2023年2月人參的愈傷組織第7頁，課件共46頁，創作于2023年2月菠蘿的愈傷組織第8頁，課件共46頁，創作于2023年2月一、課題背景二、基礎知識（一）植物組織培養的基本過程

在植物的個體發育過程中，細胞在形態、結構和生理功能上都會出現穩定性的差異，形成這些差異的過程叫做細胞分化。

離體的植物組織或細胞，在培養了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成排列疏松而無規則的高度液泡化的呈無定形狀態的一群薄壁細胞。

由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化。1.細胞分化：2.愈傷組織：3.脫分化：4.再分化：第9頁，課件共46頁，創作于2023年2月第10頁，課件共46頁，創作于2023年2月一、課題背景二、基礎知識（一）植物組織培養的基本過程

在植物的個體發育過程中，細胞在形態、結構和生理功能上都會出現穩定性的差異，形成這些差異的過程叫做細胞分化。

離體的植物組織或細胞，在培養了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成排列疏松而無規則的高度液泡化的呈無定形狀態的一群薄壁細胞。

由高度分化的植物組織或細胞產生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化。

由脫分化產生的愈傷組織繼續進行培養，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。1.細胞分化：2.愈傷組織：3.脫分化：4.再分化：第11頁，課件共46頁，創作于2023年2月第12頁，課件共46頁，創作于2023年2月5.植物組織培養過程：第13頁，課件共46頁，創作于2023年2月離體的植物器官、組織、細胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養的基本過程:脫分化和再分化過程是組織培養中的關鍵。第14頁，課件共46頁，創作于2023年2月

指植物的離體部分（包括任何器官、組織、細胞或原生質體），在人工控制的培養基及環境條件（溫度及光照）下，得以生長和分化成完整植株的一種無菌培養技術。又稱：植物離體培養6.植物組織培養：第15頁，課件共46頁，創作于2023年2月

細胞的全能性是指已分化的細胞具有發育成完整個體的潛能。是生物體的每一個細胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質。7.植物組織培養原理：植物細胞的全能性（1）概念：（2）原因：第16頁，課件共46頁，創作于2023年2月（二）影響植物組織培養的因素：1、外植體的選取

a不同植物的組織培養難度不同

b對于同一種植物材料，材料的年齡、保存時間的長短等也會影響實驗結果。2、培養基的配制(MS培養基)

大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S

微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co

有機物：甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等植物激素：生長素、細胞分裂素等未開花植株的莖上部新萌生的側枝第17頁，課件共46頁，創作于2023年2月MS固體培養基成分及比例第18頁，課件共46頁，創作于2023年2月微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養基則需提供大量無機營養，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。思考以下問題:1.同微生物培養基相比，MS培養基的配方有哪些明顯的不同？2、你認為組織培養過程中，成功的關鍵有哪些？這些步驟的適宜條件是什么？組織的脫分化及愈傷組織的再分化。植物組織培養過程中，影響植物細胞脫分化、再分化的最重要因素是植物激素，細胞分裂素與生長素之間的濃度比可以調控植株組培過程中芽和根的形成。第19頁，課件共46頁，創作于2023年2月3、不同植物激素使用順序使用順序實驗結果先生長素，后細胞分裂素先細胞分裂素，后生長素同時使用有利于細胞分裂但不分化細胞既分裂也分化分化頻率提高

第20頁，課件共46頁，創作于2023年2月4、不同植物激素使用量生長素/細胞分裂素比值結果比值高時比值低時比值適中促根分化，抑芽形成

促芽分化，抑根形成促進愈傷組織生長第21頁，課件共46頁，創作于2023年2月5、pH、溫度、光照（菊花組培）

pH=5.8

溫度控制在18—22℃

每日光照12h6、消毒在培養的整個過程中，都需要是一個無菌環境第22頁，課件共46頁，創作于2023年2月1、實驗操作流程制備MS固體培養基外植體消毒接種培養栽培移栽三、實驗操作第23頁，課件共46頁，創作于2023年2月2、實驗具體操作（1）制備MS固體培養基實驗室一般使用_____℃保存的配制好的培養基母液來制備①配制各種母液配制母液時，大量元素濃縮__________，微量元素濃縮__________。常溫保存。激素類、維生素類以及用量比較小的有機物可以按照__________的質量濃度單獨配制母液。用母液配制培養基時，需要根據各種母液的濃縮倍數，計算用量。1mg/ml410倍100倍三、實驗操作第24頁，課件共46頁，創作于2023年2月②配制培養基。按配方稱取瓊脂、蔗糖以及各種母液，配制MS培養基。2、實驗具體操作（1）制備MS固體培養基實驗室一般使用_____℃保存的配制好的培養基母液來制備4植物激素在菊花組織培養中，可以不添加_________________，原因是菊花莖段組織培養___________________。比較容易三、實驗操作第25頁，課件共46頁，創作于2023年2月③滅菌將分裝好的培養基連同其他器械一起進行_________________。2、實驗具體操作（1）.制備MS固體培養基實驗室一般使用_____℃保存的配制好的培養基母液來制備4高壓蒸汽滅菌三、實驗操作第26頁，課件共46頁，創作于2023年2月

此時的組織或細胞為離體的，即細胞所生活的環境為液體有機物營養環境，而不是能體現其整個植物體的光能自養。

高等植物是光能自養型生物，為什么在植物組織培養過程中還需要提供有機物培養基？思考？第27頁，課件共46頁，創作于2023年2月2、實驗具體操作（2）外植體消毒

①選取菊花莖段時，要取________________。流水沖洗酒精無菌水氯化汞無菌水②消毒流程：濃度______搖動_____次時間_____s濃度______時間_____min至少清洗___次漂凈_______生長旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒水三、實驗操作第28頁，課件共46頁，創作于2023年2月

不是。對外植體進行表面消毒時，既要考慮到消毒效果，又要考慮到植物的耐受能力。

在外植體消毒過程中，是不是強度越大越好，為什么？

思考？第29頁，課件共46頁，創作于2023年2月旁欄思考：你打算做幾組重復？你打算設置對照實驗嗎？答：每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設置對照實驗可以取用一個經過滅菌的裝有培養基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養，用以說明培養基制作合格，沒有被雜菌污染。第30頁，課件共46頁，創作于2023年2月2、實驗具體操作（3）接種

①前期準備：用_________________消毒工作臺，點燃酒精燈。所有工作都必須在酒精燈旁進行，器械使用前后都要用_________________滅菌。②接種操作：插入外植體時_________________端朝上，每個錐形瓶接種_________________個外植體。70％的酒精火焰灼燒形態學上6～8三、實驗操作第31頁，課件共46頁，創作于2023年2月2、實驗具體操作（4）培養

接種后的錐形瓶最好放在__________中培養。培養期間定期進行_________，溫度控制在_________℃，并且每天用日光燈光照_________h。無菌箱18～2212消毒三、實驗操作第32頁，課件共46頁，創作于2023年2月在培養過程中，是脫分化、再分化的過程，隨著芽和根的形成，就具有了自養的能力，是由細胞到一個個體的演變過程培養過程中為什么需要進行光照？思考？第33頁，課件共46頁，創作于2023年2月2、實驗具體操作（5）移栽

移栽生根的試管苗之前，應先打開封口膜，在培養間生長幾日；然后用流水清洗___________，將幼苗移植到____________________等環境中生活一段時間，進行壯苗。最后進行露天栽培。根部培養基消過毒的蛭石或珍珠巖三、實驗操作第34頁，課件共46頁，創作于2023年2月固體基質型，含水量高、蓄水性強、透性好，適合栽培珍珠巖

,珍珠巖是一種火山噴發的酸性熔巖，經急劇冷卻而成的玻璃質巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結構，所以被命名為珍珠巖。蛭石是一種天然、無毒的礦物質，在高溫作用下會膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。第35頁，課件共46頁，創作于2023年2月（六）栽培

幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花第36頁，課件共46頁，創作于2023年2月制備MS固體培養基外植體消毒

接種

培養栽培

移栽沖洗—酒精—無菌水沖洗—氯化汞—無菌水沖洗至少三次之上配制各種母液配制培養基滅菌實驗操作流程第37頁，課件共46頁，創作于2023年2月1、培養基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養；5、移栽到消過毒的環境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實現無菌環境的？思考？第38頁，課件共46頁，創作于2023年2月2.是否完成了對植物組織的脫分化和再分化3.是否進行了統計、對照與記錄4.生根苗的移栽是否合格1.外植體在培養過程中可能會被污染，你認為造成污染的原因有哪些？培養基滅菌不徹底；外植體消毒不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。四、結果分析與評價第39頁，課件共46頁，創作于2023年2月一般說來，容易進行_________繁殖的植物，也容易進行組織培養。如蘆薈、豆瓣綠、秋海棠、月季等。無性五、課題延伸第40頁，課件共46頁，創作于2023年2月一.課題背景（一）植物組織培養的基本過程二.基礎知識（二）影響植物組織培養的因素三.實驗操作四.結果分析與評價五.課題延伸制備MS固體培養基外植體消毒接種培養移栽栽培課堂小結第41頁，課件共46頁，創作于2023年2月菊花的組織培養再分化材料性質、營養物質、調節物質、環境條件外植體的消毒接種基本原理:細胞的全能性基本過程:脫分化愈傷組織影響因素：操作流程：配制MS固體培養基培養移栽栽培第42頁，課件共46頁，創作于2023年2月課后練習：1.答：植物組織培養所利用的植物材料體積小、抗性差，對培養條件的要求較高。用于植物組織培養的培養基同樣適合于某些微生物的生長，如一些細菌、真菌等的生長。而培養物一旦受到微生物的污染，就會導致實驗前功盡棄，因此要進行嚴格的無菌操作。2.答：外植體的生理狀態是成功進行組織培養的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好，容易誘導脫分化和再分化。第43頁，課件共46頁，創作于2023年2月1.下列那組符合菊花組織培養的基本步驟（）A．制備MS培養基→外植體消毒→接種→培養→移栽→栽培B．制備MS培養基→外植體消毒→接種→培養→栽培→移栽C．制備MS培養基→外植體消毒→接種→栽培→培養→移栽D．制備MS培養基→外植體消毒→接種→移栽→培養→栽培練習2.在外植體脫分化形成愈傷組織的過程中，下列哪個條件是不需要的（）

A．消毒滅菌B．適宜的