課題微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第1頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月放線菌第2頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月真菌青霉菌第3頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月黑曲霉酵母菌第4頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月想一想這些肉眼看不到的微生物是怎樣獲得呢？第5頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第6頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月一、培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基的定義：培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)物質(zhì)。第7頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月2、培養(yǎng)基分類：（1）液體培養(yǎng)基：配置成的液體狀態(tài)的基質(zhì)。第8頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。2、培養(yǎng)基的分類：第9頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月你知道固體培養(yǎng)基的來歷嗎？為了能直接觀察培養(yǎng)物的形態(tài)及生長情況，科學(xué)家希望能將微生物培養(yǎng)在固體表面上，就像微生物生長在橘子皮或土豆上一樣。最初，德國醫(yī)生羅伯特·科赫此試著用明膠作培養(yǎng)基的凝固劑。但是，人們很快發(fā)現(xiàn)，明膠在20℃以上就變軟了，很難進(jìn)行分離微生物的劃線操作。而大多數(shù)細(xì)菌的培養(yǎng)溫度都不低于25℃。科赫的同事WalterHesse發(fā)現(xiàn)瓊脂比明膠更適合做培養(yǎng)基的凝固劑。這個(gè)改進(jìn)的方法很快就被大家采納。第10頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落：單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。第11頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基一般都含有碳源、氮源、無機(jī)鹽(包括微量元素)、水。注意碳源—有機(jī)碳源（葡萄糖、果糖、蔗糖等）、無機(jī)碳源有機(jī)氮源—花生餅粉、黃豆餅粉、酵母粉、蛋白胨等無機(jī)氮源—氨水、銨鹽和硝酸鹽。歸納第12頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有____、____、和____、______等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對____、___________以及對__________,例如:培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加________，培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至______，培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至__________，培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)則需要提供______的條件。水碳源氮源無機(jī)鹽pH特殊營養(yǎng)物質(zhì)氧氣的要求維生素酸性中性或微堿性無氧第13頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月二、無菌技術(shù)1、什么是無菌技術(shù)無菌技術(shù)泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。第14頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。第15頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。第16頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月2、消毒與滅菌

滅菌是指使用強(qiáng)烈的物理或化學(xué)因素殺死體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死或除去部分微生物，對于芽孢或孢子則不起作用。第17頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌孢子細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞。能直接發(fā)育成新個(gè)體。第18頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌較為溫和強(qiáng)烈部分生活狀態(tài)的微生物不能全部微生物能第20頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線消毒……(1)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法第21頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月(1)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法（1）日常生活經(jīng)常用到的是

煮沸消毒法；（2）對一些不耐高溫的液體，則使用

巴氏

消毒法（3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強(qiáng)消毒效果，然后使用

紫外線進(jìn)行物理消毒。（4）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手使用酒精進(jìn)行消毒；（5）飲水水源用氯氣進(jìn)行消毒。第22頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的方法：第23頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）接種環(huán)、接種針、試管口等使用

灼燒

滅菌法；（2）玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是

干熱滅菌箱；（3）培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽

滅菌法，所用器械是

高壓蒸汽滅菌鍋。第24頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月思考題請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第25頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月三、實(shí)驗(yàn)安排本實(shí)驗(yàn)采用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)過程分為兩個(gè)階段：1、制備培養(yǎng)基2、純化大腸桿菌大腸桿菌第26頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月1、制備培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000mL（1）計(jì)算根據(jù)下列培養(yǎng)基配方比例，計(jì)算配置100mL培養(yǎng)基時(shí)，各成分的用量。第27頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）稱量注意

牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，稱取時(shí)動作要迅速，稱后要及時(shí)蓋上瓶蓋。蛋白胨牛肉膏用玻璃棒挑取牛肉膏第28頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）溶化①加水加熱熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化鈉繼續(xù)加熱；③加入瓊脂；④用蒸餾水定容到100mL。整個(gè)過程不斷用玻棒攪拌，目的是防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。第29頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月（4）滅菌在壓力為100kPa，溫度為121℃條件下，滅菌15-30min。（5）倒平板第30頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月倒平板技術(shù)第31頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？第32頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第33頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。第34頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月2、純化大腸桿菌（1）平板劃線法平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到有一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。第35頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月微生物的接種技術(shù)平板劃線法第36頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基表面的單菌落第37頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？議一議第38頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第39頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。議一議第40頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）稀釋涂布法稀釋涂布法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。第41頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月微生物的接種技術(shù)稀釋涂布平板法第42頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等.第43頁，課件共45頁，創(chuàng)作于2023年2月四、結(jié)果分析與評價(jià)

培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。