血液標本采集與血涂片制備第1頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月

患者劉某，男，44歲，身高173cm，體重59kg，患糖尿病5年，入院前口服多種降糖藥，血糖控制很不理想，波動較大，電解質(zhì)常規(guī)檢查結(jié)果如下：

鈉135.9mmol/L（135~145）

鉀6.5mmol/L（3.5~5.2）

氯105.2mmol/L（96~108）

鈣2.31mmol/L（2.20~2.75）臨床基礎(chǔ)檢驗學(xué)作為檢驗人員，你準備如何處理這份檢驗結(jié)果？第2頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第一章血液標本采集與血涂片制備教學(xué)內(nèi)容血液標本的采集一血液抗凝劑及使用二血涂片的制備技術(shù)三血液細胞染色技術(shù)四第3頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月血液學(xué)檢查：反應(yīng)造血系統(tǒng)本身、機體全身或局部病變一、血液標本的采集第4頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月全血血漿血清wholeblood：靜脈全血、動脈全血、毛細血管全血?！局馇办o脈、腕靜脈，小兒頸靜脈、股靜脈】Plasma：抗凝后去除血細胞后的血液成分。血漿化學(xué)成分分析、凝血試驗等。serum：血液離體自然凝固后分離出來的液體成分。臨床化學(xué)和免疫學(xué)檢測。部分檢驗項目有時選擇特定的血細胞作為標本一、血液標本的采集第5頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月1.按采血部位分：皮膚采血、靜脈采血、動脈采血2.按采血方式分：普通采血法、真空采血法一、血液標本的采集第6頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第7頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第8頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第9頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第10頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第11頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第12頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第13頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第14頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月皮膚采血法skinpunctureforbloodcollection皮膚采血法主要用于微量用血的檢查；成人一般選擇中指或無名指指尖內(nèi)測采血；半歲以下嬰幼兒可選擇足跟進行采血。一、血液標本的采集第15頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第16頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月激光采血法：激光發(fā)射一束波長為2940nm的單脈沖的激光。細微的光束打在采血者手指的滑囊處，其瞬間溫度可達1000℃，作用時間不超過萬分之四秒，使得皮膚表皮組織溶解、揮發(fā)，出現(xiàn)一個0.4~0.8mm的小孔。

感染機會少、痛感輕、工作強度低皮膚采血法skinpunctureforbloodcollection一、血液標本的采集第17頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第18頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月靜脈采血法venipunctureforbloodcollection一、血液標本的采集第19頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月負壓采血法預(yù)先添加各種添加劑，滿足臨床多種實驗需要。無菌程度高，血液污染概率小，對檢驗結(jié)果的干擾小。帶有分離膠的真空采血管可直接快速分離血清。在實驗室間傳送方便，能避免對醫(yī)護人員的感染和患者血標本間的交叉污染。靜脈采血法venipunctureforbloodcollection一、血液標本的采集第20頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月真空采血負壓管頭蓋的顏色及適用范圍顏色添加成分用途藍、黑3.2%枸櫞酸鈉緩沖劑用于凝血四項及血沉檢查綠肝素鋰用于生物化學(xué)檢查紅無添加劑用于血清學(xué)檢驗紫乙二胺四乙酸用于白細胞、紅細胞、血小板等常規(guī)檢查黃無添加劑消毒容器用于血培養(yǎng)一、血液標本的采集第22頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月一、血液標本的采集第23頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月靜脈采血法venipunctureforbloodcollection一、血液標本的采集第24頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月兩種采血方法的優(yōu)缺點比較毛細血管采血靜脈采血缺點標本量少，不能進行重復(fù)實驗和補充實驗；組織液可混入，局部炎癥可得假性結(jié)果。不同抗凝劑的使用，可能改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)。優(yōu)點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性強，無組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實驗和追加其他實驗一、血液標本的采集第25頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月適用于動脈血血氣分析(氧含量，二氧化碳含量，動脈血酸堿平衡等)；穿刺部位：橈動脈、股動脈、肱動脈；注意事項：隔絕空氣、立即送檢。動脈采血法Arterialpunctureforbloodcollection一、血液標本的采集第26頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月血液標本的處理、運送與保存視每一份標本為無法重復(fù)獲得、唯一的標本；標本信息的完整性------唯一標識原則；視所有的標本都有傳染性------生物安全原則；對標本進行及時處理；不合格血液標本拒收------溶血、凝血標本；血液采集容器不當；采血量不足；標本污染、容器破損。一、血液標本的采集第27頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月患者情況采血時間采血部位溶血情況標本處理結(jié)果分析血液采集的質(zhì)量控制一、血液標本的采集第28頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月檢驗項目紅細胞內(nèi)濃度與血清的比值1%紅細胞溶血引起血清濃度的變化（%）LD160:1+272.5AST40:1+220.0鉀23:1+24.4ALT6.7:1+55.0溶血引起血液成分濃度或活性變化一、血液標本的采集第29頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月二、血液抗凝劑及使用血液凝固機制第30頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月抗凝原理：螯合鈣離子使用方法：EDTAK2·2H2O1.5~2.2mg/ml血液適用范圍：對血細胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響小---適合于多項血液學(xué)檢查；影響血小板聚集---不宜用做凝血象檢驗及血小板功能檢驗。乙二胺四乙酸（EDTA）鹽二、血液抗凝劑及使用第31頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月常用的有草酸鈉、草酸鉀和草酸銨。抗凝原理：螯合鈣離子，草酸鈣沉淀使用方法：0.1mol/L與血液1：9混合

適用范圍：止凝血檢驗,不適合作細胞形態(tài)分析的抗凝劑草酸鹽二、血液抗凝劑及使用第32頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g＋草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10混合（80℃以下烘干）。適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞比積、計數(shù)），不適于血小板計數(shù)和白細胞分類計數(shù)雙草酸鹽二、血液抗凝劑及使用第33頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月肝素為一種含硫酸基團的粘多糖；抗凝原理：抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用。使用方法：每毫升血液（15±2.5）U肝素二、血液抗凝劑及使用第34頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、紅細胞比積）和多種生化分析。肝素二、血液抗凝劑及使用第35頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月抗凝原理：螯合鈣離子使用方法：109mmol/L濃度與血液1：9混合適用范圍：止凝血檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性弱）枸櫞酸鈉二、血液抗凝劑及使用第36頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月常用抗凝劑的抗凝原理及優(yōu)缺點抗凝劑種類抗凝原理優(yōu)點缺點EDTA與鈣離子螯合對血細胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響很少。EDTAK2適合于全血細胞分析和血細胞比容測定不適合于做凝血象檢查和血小板功能實驗雙草酸鹽與鈣離子螯合草酸銨和草酸鉀(鈉)適當比例混合后，不影響紅細胞形態(tài)和大小干擾血漿中的離子和酶的測定肝素阻止凝血酶形成抗凝能力強，適用于紅細胞檢驗和多種生化分析引起白細胞聚集染色時產(chǎn)生藍色背景枸櫞酸鹽與鈣離子螯合用于紅細胞沉降率和凝血功能測定，也可以作為輸血保養(yǎng)液成分抗凝力較弱，溶解度較低二、血液抗凝劑及使用第37頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月脫纖維蛋白法：血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，從而阻止血凝塊形成。適用于免疫學(xué)檢驗和紅斑狼瘡細胞檢查。物理方法抗凝二、血液抗凝劑及使用第38頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月血涂片制備主要用于血液細胞學(xué)檢查、網(wǎng)織紅細胞檢查和寄生蟲學(xué)檢查。三、血涂片的制備技術(shù)第39頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月三、血涂片的制備三、血涂片的制備技術(shù)手工法制備第40頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月儀器法制備三、血涂片的制備技術(shù)第41頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月厚薄適宜頭體尾分明細胞完整邊緣整齊質(zhì)量標準三、血涂片的制備技術(shù)第42頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月血涂片質(zhì)量評價頭體尾

分明厚

薄

均

勻長

度

適

中三、血涂片的制備技術(shù)第43頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月血涂片觀察區(qū)域選擇三、血涂片的制備技術(shù)第44頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月四、血液細胞染色技術(shù)經(jīng)過染色后,血液細胞及其主要結(jié)構(gòu)染上不同的顏色，便于顯微鏡下觀察細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，正確識別各種細胞及其異常變化。第45頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月普通染色細胞化學(xué)染色免疫組化染色熒光染色四、血液細胞染色技術(shù)第46頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子,與細胞內(nèi)酸性成分結(jié)合,是染胞核的染料。如亞甲藍、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料。染料分類四、血液細胞染色技術(shù)第47頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月瑞氏染色瑞氏染液由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍溶解于甲醇而成。酸性染料伊紅與血細胞中的堿性物質(zhì)結(jié)合染成紅色，如紅細胞中的血紅蛋白及嗜酸性粒細胞的嗜酸性顆粒。堿性染料亞甲藍與血細胞中的酸性物質(zhì)結(jié)合染成藍色，如淋巴細胞及嗜堿性粒細胞的嗜堿性顆粒等。四、血液細胞染色技術(shù)第48頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月Wright染液：瑞氏染粉0.1g，甲醇60.0ml；甲醇有強大的脫水力，可將細胞形態(tài)固定，并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)等，增加細胞與染料接觸表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）：維持染色過程的pH值。瑞氏染色四、血液細胞染色技術(shù)第49頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10mins。用清水沖洗，待干后鏡檢。瑞氏染色四、血液細胞染色技術(shù)第50頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月影響瑞氏染色效果的一些因素:染料放置時間；溶液的酸堿度；染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關(guān)。

瑞氏染色四、血液細胞染色技術(shù)第51頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月四、血液細胞染色技術(shù)第52頁，課件共55頁，創(chuàng)作于2023年2月基本