第九章維生素類藥物的分析第1頁，課件共66頁，創作于2023年2月概述一、定義

維生素是維持人體正常代謝功能所必需的微量生物活性物質，主要用于機體的能量轉移和代謝調節，體內不能自行合成，必須從食物中攝取。第2頁，課件共66頁，創作于2023年2月VitA、D2、D3、E、K1

等脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺VitMVitPP二、分類第3頁，課件共66頁，創作于2023年2月

三、分析方法本類藥物的分析方法很多，有生物法、微生物法、化學法和物理化學法，多依據其生物特性及理化性質進行，但目前常用的分析方法是化學法或物理化學法。第4頁，課件共66頁，創作于2023年2月第一節維生素A（VitaminA）

維生素A包括有維生素A1（視黃醇）、去氫維生素A（維生素A2）和去水維生素A（維生素A3）等，其中維生素A1活性最高，維生素A2的生物活性是維生素A1的30-40%，維生素A3的生物活性是維生素A1的0.4%，故通常所說的維生素A系指維生素A1。第5頁，課件共66頁，創作于2023年2月-H維生素A醇-COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯R:一、結構和性質第6頁，課件共66頁，創作于2023年2月1、為一個具有共軛多烯側鏈的環己烯

（1）具有UV吸收

（2）存在多種立體異構化合物

（3）易發生脫氫、脫水、聚合反應第7頁，課件共66頁，創作于2023年2月△或有金屬離子存在時更易氧化2、不穩定性第8頁，課件共66頁，創作于2023年2月3、與三氯化銻發生呈色反應CHCl34、溶解性不溶于水易溶于有機溶劑和植物油等第9頁，課件共66頁，創作于2023年2月1、三氯化銻反應CHCl3二、鑒別試驗

維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中呈現不穩定的藍色，再變為紫紅色。第10頁，課件共66頁，創作于2023年2月反應條件：①要求無水，如存在水可能產生氯化氧銻（SbOCl

）。②配制所用的氯仿不能含醇（應用無醇氯仿）和光氣（COCl2）。③三氯化銻有腐蝕性。第11頁，課件共66頁，創作于2023年2月2、紫外吸收光譜維生素A分子中含有5個共軛雙鍵，其無水乙醇液在326nm波長處有最大吸收。當在鹽酸催化下加熱，即發生脫水反應生成去水維生素A（A3）。去水維生素A比維生素A多一個共軛雙鍵，其最大吸收波長向紅移，在340～390nm波長間出現3個最大吸收峰。3、薄層色譜第12頁，課件共66頁，創作于2023年2月三、含量測定1、紫外分光光度法利用維生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共軛體系結構，在325～328nm處有選擇性吸收峰，故可進行含量測定。第13頁，課件共66頁，創作于2023年2月立體異構體氧化產物及光照產物合成中間體去氫維生素A（VitA2）去水維生素A（VitA3）均對測定有干擾，故采用三點校正法第14頁，課件共66頁，創作于2023年2月

三點校正法（1）條件：①雜質的吸收在310~340nm波長范圍內呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減小；②物質對光的吸收具有加和性。第15頁，課件共66頁，創作于2023年2月（2）波長的選擇：①1

VitA的max（328nm）②23

分別在1的兩側各選一點第16頁，課件共66頁，創作于2023年2月（3）測定方法：①第一法（直接測定法）測定對象VitA醋酸酯第17頁，課件共66頁，創作于2023年2月②第二法（皂化法）：用醇制氫氧化鉀加熱皂化（水解），用乙醚提取，揮干溶劑，殘渣用異丙醇溶解，測定含量。測定對象VitA醇第18頁，課件共66頁，創作于2023年2月

第一法第二法測定對象維生素A醋酸酯維生素A醇方法直接取樣，測定皂化提取，測定溶劑環己烷異丙醇max

328nm325nm測定波長5個4個換算因數19001830第一法與第二法的區別第19頁，課件共66頁，創作于2023年2月（二）三氯化銻比色法維生素A可與三氯化銻的氯仿溶液作用，產生藍色，在618～620nm波長處有最大吸收。可用于維生素A的比色測定。要求在5～10秒內測定。本法缺點多，已被UV法取代。（三）高效液相色譜法第20頁，課件共66頁，創作于2023年2月氨基嘧啶環－CH2－噻唑環(季銨堿)HClCl-維生素B1（鹽酸硫胺）第二節維生素B1的分析第21頁，課件共66頁，創作于2023年2月（1）溶解性①易溶于水②水溶液呈酸性（2）UV共軛雙鍵λmax=246nm（一）結構與性質第22頁，課件共66頁，創作于2023年2月嘧啶環——

伯氨噻唑環——

季銨1、可與酸成鹽2、與生物堿↓→↓3、含量測定——

非水堿量法（3）硫色素反應（4）堿性第23頁，課件共66頁，創作于2023年2月（二）鑒別試驗1、硫色素反應（VitB1的專屬反應）

第24頁，課件共66頁，創作于2023年2月VitB1H+H+H+H+2、沉淀反應第25頁，課件共66頁，創作于2023年2月1、非水溶液滴定法（藥典用于測定原料藥）原理：利用噻唑環上季銨和嘧啶環上氨基的弱堿性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。（三）含量測定第26頁，課件共66頁，創作于2023年2月2、UV分光光度法（藥典用于測定片劑、注射劑）（1）原理：維生素B1分子中具有共軛雙鍵結構，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波長下測定吸收度，根據取樣量計算含量。（2）方法第27頁，課件共66頁，創作于2023年2月NaOH（三）硫色素熒光法原理（1）激發波長365nm發射波長435nm（2）方法與計算第28頁，課件共66頁，創作于2023年2月+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇SdAb對照液供試液第29頁，課件共66頁，創作于2023年2月（3）特點①靈敏度高，線性范圍寬②代謝產物不干擾，適用于體液分析第30頁，課件共66頁，創作于2023年2月L－抗壞血酸第三節維生素C的分析第31頁，課件共66頁，創作于2023年2月①易溶于水②水溶液呈酸性(一）結構與性質1、溶解性第32頁，課件共66頁，創作于2023年2月C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.572、酸性一元酸第33頁，課件共66頁，創作于2023年2月二烯醇結構二酮基結構二烯醇結構3、強還原性第34頁，課件共66頁，創作于2023年2月L(+)－抗壞血酸活性最強手性C（C4、C5）4、光學活性**第35頁，課件共66頁，創作于2023年2月△糖類的顯色反應50℃結構與糖類相似5、具糖的性質第36頁，課件共66頁，創作于2023年2月6、UV特征第37頁，課件共66頁，創作于2023年2月（二）鑒別試驗第38頁，課件共66頁，創作于2023年2月1、與AgNO3反應2、與2，6-二氯靛酚反應(ChP2000)氧化型玫瑰紅色還原型藍色OHˉ(ChP2000)第39頁，課件共66頁，創作于2023年2月3、與堿性酒石酸銅反應USP4、與KMnO4反應5、糖類的反應6、紫外分光光度法第40頁，課件共66頁，創作于2023年2月（三）雜質檢查（略）1、溶液的澄清度與顏色檢查2、鐵、銅離子的檢查：原子吸收分光光度第41頁，課件共66頁，創作于2023年2月指示劑淀粉指示液原理（1）1、碘量法（四）含量測定第42頁，課件共66頁，創作于2023年2月

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6（2）方法第43頁，課件共66頁，創作于2023年2月①酸性環境d.HCl

②新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度（3）討論③立即滴定減免水中O2的干擾減少O2的干擾第44頁，課件共66頁，創作于2023年2月（二）2，6-二氯靛酚鈉滴定法USPJP原理（1）第45頁，課件共66頁，創作于2023年2月自身指示終點法（2）方法第46頁，課件共66頁，創作于2023年2月②快速滴定2min內

①酸性環境HPO3-HAc

穩定VitC防止其他還原性物質干擾③剩余比色測定

（定量過量）（測剩余染料）（3）討論第47頁，課件共66頁，創作于2023年2月（4）缺點

需經常標定貯存≤一周不穩定干擾多氧化力較強（三）高效液相色譜法第48頁，課件共66頁，創作于2023年2月

維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱。目前已知的維生素D類物質至少有十種之多，它們都是甾醇的衍生物。中國藥典主要收載有維生素D2、D3原料藥；維生素D2膠丸和注射劑；維生素D，注射劑。USP(24)收載有片劑、膠囊、口服液等劑型。BP(2000)收載的劑型有片劑、口服液、注射液以及鈣與維生素D2、D3制成的復方片劑。

第四節維生素D的分析第49頁，課件共66頁，創作于2023年2月(一)結構

維生素D2為9，10-開環麥角甾5，7，10(19)，22-四烯3β-醇，又名骨化醇或麥角骨化醇。維生素D3為9，10-開環膽甾-5，7，10(19)三烯-3β-醇，又名膽骨化醇。兩者的化學結構十分相似，其差別僅是維生素D2比維生素D3在側鏈上多一個雙鍵，C24上多一個甲基。

一、結構與性質第50頁，課件共66頁，創作于2023年2月VD2VD3第51頁，課件共66頁，創作于2023年2月(二)性質

1、性狀維生素D2、D3均為無色針狀結晶或白色結晶性粉末；無臭，無味；遇光或空氣均易變質。

2、溶解性維生素D2在氯仿中極易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶；維生素D3在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中極易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。

3、不穩定性維生素D2、D3因含有多個烯鍵，所以極不穩定，遇光或空氣及其他氧化劑均發生氧化而變質，使效價降低，毒性增強。本品對酸也不穩定。

4、旋光性維生素D2具有6個手性碳原子，而維生素D3有5個手性碳原子，所以二者均具有旋光性。

第52頁，課件共66頁，創作于2023年2月5、顯色反應

本品的氯仿溶液，加醋酐與硫酸，初顯黃色，漸變紅色，迅即變為紫色，最后變為綠色。本反應為甾類化合物的共有反應。6．紫外吸收特性取本品，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每10ml中約含10ug的溶液。照分光光度法，在265nm的波長處測定吸收度，維生素D2的吸收系數為460-490；維生素D3的吸收系數為465-495。第53頁，課件共66頁，創作于2023年2月(一)顯色反應

1、與醋酐－濃硫酸反應取維生素D2或D3約0.5mg，加氯仿5m1溶解后，加醋酐0.3ml與硫酸0.1ml，振搖，維生素D2初顯黃色，漸變紅色，迅即變為紫色，最后成綠色。維生素D3初顯黃色，漸變紅色，迅即變為紫色、藍綠色，最后變為綠色。

2、與三氯化銻反應取本品適量(約1000單位)，加1，2-二氯乙烷1m1溶解，加三氯化銻試液4ml，溶液即顯橙紅色，逐漸變為粉紅色。

3、其它顯色反應維生素D與三氯化鐵反應呈橙黃色，與二氯丙醇和乙酰氯試劑反應顯綠色，均可用于鑒別，但專屬性不強。二、鑒別試驗第54頁，課件共66頁，創作于2023年2月(二)比旋度鑒別

取維生素D2，精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1m1中含40mg的溶液，依法測定，比旋度為+102.5。至+107.5。；維生素D3加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中含5mg的溶液，依法測定，比旋度為十105。至+112。(二者均應于容器開啟后30min內取樣，并在溶液配制后30min內測定)。

(三)其他鑒別方法

維生素D2、D3可用薄層色譜法、HPLC法和制備衍生物測熔點進行鑒別。此外，亦可通過其紫外、紅外吸收光譜的特征加以鑒別。第55頁，課件共66頁，創作于2023年2月(四)維生素D2、D3的區別反應

取維生素D10mg，溶于96％乙醇10ml中。取此液0.1m1，加乙醇1ml和85％硫酸5ml。維生素D2顯紅色，在570nm波長處有最大吸收；維生素D3顯黃色，在495nm波長處有最大吸收。

此反應也用于D2和D3的含量測定。第56頁，課件共66頁，創作于2023年2月(一)麥角甾醇的檢查(二)前維生素D的光照產物三、雜質檢查（略）第57頁，課件共66頁，創作于2023年2月(一)維生素D測定法（二）討論四、含量測定（略）

維生素D的含量測定方法各國藥典各異。USP(24)關于維生素D