細(xì)胞生物學(xué)第十章細(xì)胞增殖與調(diào)控演示文稿_第1頁(yè)
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細(xì)胞生物學(xué)第十章細(xì)胞增殖與調(diào)控演示文稿本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第1頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分(優(yōu)選)細(xì)胞生物學(xué)第十章細(xì)胞增殖與調(diào)控本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第2頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分

第一節(jié)細(xì)胞周期與細(xì)胞分裂一、細(xì)胞周期概述:細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過(guò)程(也稱細(xì)胞生活周期,或細(xì)胞繁殖周期),可分為四個(gè)階段:①G1期(gap1),指從有絲分裂完成到DNA復(fù)制之前的間隙時(shí)間;②S期(synthesisphase),指DNA復(fù)制的時(shí)期,只有在這一時(shí)期H3-TDR才能摻入新合成的DNA中;本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第3頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分③G2期(gap2),指DNA復(fù)制完成到有絲分裂開(kāi)始之前的一段時(shí)間;④M期又稱D期(mitosisordivision),細(xì)胞分裂開(kāi)始到結(jié)束。

G0期:細(xì)胞暫時(shí)離開(kāi)細(xì)胞周期,停止分裂,去執(zhí)行一定的功能,稱靜止期細(xì)胞,G0期多發(fā)生在G1期。G0期一旦得到信號(hào),會(huì)迅速返回細(xì)胞周期(如結(jié)締組織中的成纖維細(xì)胞等)。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第4頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞周期本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第5頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞周期分為4個(gè)階段本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第6頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分

從增殖的角度來(lái)看,可將高等動(dòng)物的細(xì)胞分為三類:①連續(xù)分裂細(xì)胞,連續(xù)進(jìn)行細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)因而又稱為周期細(xì)胞,如表皮生發(fā)層細(xì)胞、部分骨髓細(xì)胞。②休眠細(xì)胞,暫不分裂,但在適當(dāng)?shù)拇碳は驴芍匦逻M(jìn)入細(xì)胞周期,稱G0期細(xì)胞,如淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞等。③不分裂細(xì)胞,指不可逆地脫離細(xì)胞周期,不再分裂的細(xì)胞,又稱終端細(xì)胞,如神經(jīng)、肌肉、多形核細(xì)胞等等。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第7頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分

周期中的主要事件G1期:合成蛋白、糖類、脂類等,但不合成DNA,是細(xì)胞的最初生長(zhǎng)期。決定G1期向S期轉(zhuǎn)換的特定時(shí)期稱起始點(diǎn)(或限制點(diǎn),或檢驗(yàn)點(diǎn)),受內(nèi)外多種因素的控制。S期:DNA和組蛋白合成,兩者立即結(jié)合形成核小體。G2期:合成大量蛋白質(zhì),能否進(jìn)入M期,受G2期檢驗(yàn)點(diǎn)的控制。M期:細(xì)胞分裂本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第8頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分ExperimentaldemonstrationofthecoordinatedSynthesisofDNAandhitones.本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第9頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞周期長(zhǎng)短測(cè)定:

細(xì)胞周期的時(shí)間長(zhǎng)短與細(xì)胞類型有關(guān),如:小鼠十二指腸上皮細(xì)胞的周期為10小時(shí),人類胃上皮細(xì)胞24小時(shí),骨髓細(xì)胞18小時(shí),培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞18小時(shí),CHO細(xì)胞14小時(shí),HeLa細(xì)胞21小時(shí)。不同類型細(xì)胞的G1長(zhǎng)短不同,是造成細(xì)胞周期差異的主要原因。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第10頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞周期各階段的時(shí)間(細(xì)胞周期測(cè)定)TG2-G2期時(shí)間,TS-S期時(shí)間,TC-細(xì)胞,TM-M期時(shí)間:(M/總)X周期時(shí)間,TG1=TC-(TG2+TM+

TS)脈沖標(biāo)記DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂指數(shù)觀察測(cè)定法H3-TdR標(biāo)記,洗滌,培養(yǎng),定時(shí)取樣,放射自顯影分析BrdU標(biāo)記,抗體染色觀察本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第11頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期流式細(xì)胞分選儀檢測(cè)法根據(jù)DNA含量分類細(xì)胞,根據(jù)類群細(xì)胞的數(shù)量推斷時(shí)間。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第12頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞周期的時(shí)間本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第13頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞同步化:

細(xì)胞同步化(synchronization)是指在自然過(guò)程中發(fā)生或經(jīng)人為處理造成的細(xì)胞周期同步化,前者稱自然同步化,后者稱為人工同步化。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第14頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分1、自然同步化

多核體:如粘菌只進(jìn)行核分裂,而不發(fā)生胞質(zhì)分裂,形成多核體。數(shù)量眾多的核處于同一細(xì)胞質(zhì)中,進(jìn)行同步化分裂,使細(xì)胞核達(dá)108,體積達(dá)6~9cm。

某些水生動(dòng)物的受精卵:如海膽卵可以同時(shí)授精,最初的3次細(xì)胞分裂是同步的,再如大量海參卵受精后,前9次細(xì)胞分裂都是同步化進(jìn)行的。

增殖抑制解除后的同步分裂:如真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后,它們一起發(fā)芽,同步分裂。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第15頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分2、人工同步化選擇同步化:有絲分裂選擇法:使單層培養(yǎng)的細(xì)胞處于對(duì)數(shù)增殖期,此時(shí)分裂活躍。有絲分裂細(xì)胞變圓隆起,與培養(yǎng)皿的附著性低,此時(shí)輕輕振蕩,M期細(xì)胞脫離器壁,懸浮于培養(yǎng)液中,收集培養(yǎng)液,再加入新鮮培養(yǎng)液,依法繼續(xù)收集,則可獲得一定數(shù)量的中期細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,同步化程度高,細(xì)胞不受藥物傷害,缺點(diǎn)是獲得的細(xì)胞數(shù)量較少。(分裂細(xì)胞約占1%~2%)本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第16頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分細(xì)胞沉降分離法:不同時(shí)期的細(xì)胞體積不同,而細(xì)胞在給定離心場(chǎng)中沉降的速度與其半徑的平方成正比,因此可用離心的方法分離。其優(yōu)點(diǎn)是可用于任何懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,缺點(diǎn)是同步化程度較低。本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第17頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分本文檔共20頁(yè);當(dāng)前第18頁(yè);編輯于星期二\5點(diǎn)29分誘導(dǎo)同步化DNA合成阻斷法:選用DNA合成的抑制劑,可逆地抑制DNA合成,而不影響其他時(shí)期細(xì)胞的運(yùn)轉(zhuǎn),最終可將細(xì)胞群阻斷在S期或G/S交界處。5-氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度AdR、GdR和TdR,均可抑制DNA合成使細(xì)胞同步化。其中高濃度TdR對(duì)S期細(xì)胞的毒性較小,因此常用TdR雙阻斷法誘導(dǎo)細(xì)胞同步化。優(yōu)點(diǎn)是同步化程度高,適用于任何培養(yǎng)體系。可將幾乎所有的細(xì)胞同步化。缺點(diǎn)是產(chǎn)生非均衡生長(zhǎng),個(gè)別細(xì)胞體積增大。

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