獸醫微生物學重要知識點匯總緒言微生物學的定義：研究微生物形態、生理、遺傳變異、生態分布以及其與人類關系的科學，廣義的微生物學還包括免疫學，甚至還包括寄生蟲學，特別是原蟲學。微生物的特點：①個體微小，需借助顯微鏡觀察，其群體可見。②構造簡單，繁殖快，分布廣。③比擬面積大〔有利于物質交換，代繁殖〕。④易變異，適應性強。微生物的種類：三型八大類(三菌四體一病毒)真菌細胞型：細胞核有核膜、核仁，細胞器完整。Eg:真菌。原核細胞型：僅有原始核，無核仁、核膜，細胞器很不完善。DNA和RNA同時存在〔擬核/核體〕Eg：細菌、放線菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體。非細胞型微生物：最小的一類微生物，無典型細胞構造。只能在活細胞生長繁殖。核酸類型為DNA或RNA.Eg：病毒。微生物學的開展過程第一階段——形態學時期：1683年荷蘭呂文虎克首次觀察到微生物。1861年巴斯德否認“自然發生說〞；證明發酵由微生物引起的。第二階段——生理學及免疫學的奠基時期：Ⅰ巴斯德〔微生物學、生理學與免疫學的主要奠基人〕的歷史性奉獻：①酒是*種微生物的發酵產物②解決了酒的敗壞問題③研究炭疽病、人的狂犬病，確定這些疾病由相應的微生物引起、微生物可以至弱作作預防傳染病用，而且對至弱的途徑做了示性的試驗④創造免疫學的預防接種⑤創造巴氏消毒法Ⅱ科赫〔建立微生物研究的根本操作技術和對病院細菌的研究，有突出奉獻〕功績：①創造培養基并用于純化微生物②創造染色觀察、顯微攝影③科赫法則④證實炭疽病原因--炭疽桿菌發現結核病源菌--結核桿菌【科赫法則：①病原微生物應在同一疾病中查見，但在安康動物體不存在②該病原菌能被別離培養得純種③該純培養物接種至易感動物，能產生同樣的疾病④自人工感染的實驗動物體能再次別離培養得到一樣的病原】【免疫方法：注射、口服、點眼、滴鼻、氣霧】第三階段——近代及現代微生物理論上取得的成就極其應用價值：①進入真正意義上的基因工程時代②進展化學治療腰肌和抗生素的研究③組織移植、免疫耐受的研究，抗原抗體反響在診斷及防治疾病上的應用技術上的重大創新及其應用價值①電子顯微鏡的應用②標記抗原或標記抗體的應用③細胞培養、空斑技術、蛋白質及核酸的提純④核磁共振儀的使用⑤分子克隆、PCR〔聚合酶鏈式反響〕、DNA測試、基因組學及電子計算機等技術的應用微生物學領域的三大進展：微生物遺傳學、免疫學及病毒學第1篇總論細菌的形態構造【容提要】細菌個體微小，經染色后在光學顯微鏡下才能觀察。最常用的是革蘭染色法，可講細菌分為革蘭陰性和革蘭陽性兩大類。就*種細菌而言，菌體有一定的大小、形態及排列方式。細菌的根本構造包括細胞壁、細胞膜、細胞質及擬核等。革蘭陽性菌的細胞壁有較厚的肽聚糖及特有的磷壁酸。革蘭陰性菌有外膜，外膜由外膜蛋白、脂多糖等構成，外膜下有一薄層肽聚糖。細菌的特殊構造有莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢等，各有一定的構造及特殊的生理功能，與細菌的致病性及免疫原性有關。細菌是原核生物界中的一大類單細胞微生物，它們個體微小，形態構造簡單，廣義的細菌除一般細菌外，還包括立克次體、衣原體、支原體、螺旋體及放線菌。復習思考題1、細菌的大小、根本形態答：大小：細菌個體微小，需染色后在光學顯微鏡下才能觀察到。細菌大小的度量單位通常是微米。形態：形態比擬簡單，有球狀、桿狀和螺旋狀三種根本形態及*些其他形態。細菌的繁殖方式都是簡單的裂殖，不同細菌裂殖后其菌體排列方式不同。有特征性的、相對穩定的形態和排列方式的細菌有球菌、雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌〔四聯、八疊〕、桿菌、螺形菌適宜條件下培養的細菌在對數生長期形態典型。不亮環境或老齡期，會出現與正常形狀不一樣的個體，稱為衰老型或退化型。但有些細菌即使在適宜的環境中生長，其形狀也很不一致，有多形性。菌落的概念，菌落的實際意義菌落：*個細菌在適宜的條件下、在適合生長的固體培養基外表或部，培養后分裂繁殖出巨大的菌體，形成一個肉眼可見的、有一定形態的獨立群體。【單個細菌及其后代組成的“大家族〞】菌苔：生長的菌落連成一片。【多個“大家族〞】菌落的實際意義：菌落肉眼可見，各種細菌的菌落在大小、色澤、質地、外表形狀、邊緣構造等方面均有個各自的特征。觀察細菌的菌落特征，可推測該細菌的種類，工作常通過固體培養基上別離培養的菌落，進展細菌的別離、純化、傳代、計數和鑒定等。細菌的根本構造和特殊構造〔繪制細菌構造模式圖〕根本構造：細胞壁、細胞膜、細胞質、擬核等根本構造。特殊構造：莢膜、S層、鞭毛、菌毛、芽孢等。比擬革蘭氏陽性和陰性細菌細胞壁的異同陽性陰性厚度厚15~80nm薄10~15nm肽聚糖多40%~95%少10%~20%脂類少1%~4%多11%~22%磷壁酸√×外膜×√脂蛋白×√脂多糖×√脂多糖和外膜蛋白的組成及功能組成功能脂多糖〔LPS〕〔革蘭陰性菌所特有，位于外膜的最外表〕由類脂A、核心多糖和側鏈多糖三局部組成①能夠吸附鈣離子、鎂離子等陽離子②為噬菌體提供特異的吸附受體外膜蛋白(OMP)〔外膜中向前的多種蛋白質的統稱，按含量和功能分為主要次要兩類〕主要OMP:微孔蛋白、脂蛋白微孔蛋白：分子篩作用，與細胞粘附和特定物質攝取有關、受體作用脂蛋白：使外膜層與肽聚糖結實的連接，可作為噬菌體的受體，或參與鐵及其他營養物質的轉運細菌的遺傳物質擬核和質粒。遺傳物質DNA無核膜包圍，分布于菌體中央形成擬核〔核體〕。擬核含細菌的遺傳基因，其功能是控制細菌的遺傳和變異。質粒在擬核DNA之外，游離的小型雙股DNA分子，含細菌生命非必須基因，其功能是控制產生菌毛、毒素、耐藥性和細菌素等遺傳性狀。質粒能獨立復制傳給子代。細菌莢膜的概念及主要功能概念：*些細菌在其生活過程中，在細胞壁的外周產生一層包圍整個菌體、邊界清楚的粘液樣物質。主要功能：①抗吞噬②抗有害物質損傷③營養物質的儲存場所〔主要含多糖類〕與廢物排出之地。細菌芽孢的特點及意義〔*些革蘭陽性菌在一定的環境條件下，在菌體形成一個圓形或卵圓形的休眠體，稱為芽孢或芽孢。未形成芽孢的菌體稱為繁殖體或營養體，老齡芽孢將脫離原菌體獨立存在，稱為游離芽孢〕特點：①對高溫、枯燥、輻射、化學藥物等有強大的抵抗力。②含水量低，壁厚而致密，通透性差不易著色，折光性強。③芽孢新代幾乎停頓，處于休眠狀態，但能保持潛在萌發力。④不是繁殖器官，一個芽孢萌發只產生一個營養狀態的細胞。意義：①芽孢抵抗力強，可在自然界中存在多年，是重要的傳染源，但芽孢并不直接引起疾病，只有發芽成為繁殖體后，才能迅速大量繁殖而致病。②芽孢抵抗力強，故應以殺滅芽孢座位可靠的滅菌標準。③可根據其形態位置鑒別細菌細菌的生長繁殖與生態【容提要】細菌菌體的形成是一個復雜的過程，涉及物質攝取、生物合成、聚合作用〔DNA復制，轉錄、翻譯〕及組裝四個步驟。菌體以二等分分裂法無性繁殖。細菌群體的生長繁殖和培養時間呈特定規律，用生長曲線表示，并可分為緩慢期、對數期、穩定期及衰亡期四個階段。大多數細菌可在人工培養基上生長。根據細菌對氧氣和溫度的需求差異，可將細菌分為需氧菌、厭氧菌、兼性菌以及嗜溫菌、嗜冷菌、嗜熱菌等。生化試驗系根據細菌傳代特點設計，用于細菌鑒定。自然界中的細菌多以群落存在，生物被膜是一種重要的表現形式，其抵抗力較游離細菌強，其生長受控于密度感應系統。后者通過信號分子作用，在基因水平完成對細菌群落生長的調控。微生物種群之間在自然界存在著復雜的相互作用，正常菌群對維護動物安康至關重要。復習思考題形成細菌個體的代過程有何特點？①細菌生長和繁殖速度極快，超過動物細胞10~100倍②細菌利用各種化合物作為能源的能力遠遠強于動物細胞③細菌對營養的需求比動物細胞更為多種多樣，因為他們有多種代旁路④細菌可利用超長流水線式的生產方式生成大分子物質⑤細菌能生產諸如肽聚糖、脂多糖、磷壁酸等特殊物質物質攝取的方式有哪幾種？各有何特點？單純擴散被動擴散，細胞外物質最簡單的一種交換方式。細胞膜兩側的物質靠濃度差〔濃度梯度〕進展分子擴散，不需要能量。無特異性和選擇性，速度較慢，細胞為溶質濃度一旦到達平衡，擴散便停頓。促進擴散*些物質與*些位于細胞膜的特異性載體蛋白相結合，然后將其轉運至細胞，這一過程具有特異性和選擇性，不需要能量。主動運輸細菌吸收營養物質的一種主要方式，需要特異性載體蛋白，能將特異性溶質逆濃度梯度泵入細胞，因此需要能量。基因位轉物質在運輸的同時受到化學修飾，從而能慍緣不斷輸入細胞，此種方式在缺氧環境中最常見，其過程涉及從可溶物向分子的化學變化，需要特異性載體蛋白的參與，需要能量。細菌菌體分裂為什么只需較短時間？細菌以二等分分裂法進展無性繁殖。大多數細菌菌體在適宜條件下分裂需要較短時間，是因為在上一輪的復制還未完成時，下一輪的細胞分裂已經啟動。此外染色體DNA存在多個復制叉，可使自帶的染色體DNA同時開場局部復制。何謂細菌的生長曲線？如何確定？有何意義？不同時期有何特點？細菌生長曲線：將細菌接種在液體培養基并置于適宜的溫度下，定時取樣檢查活菌數，可發現其生長過程具有規律性。以時間為橫坐標、以活菌數為縱坐標，可得出一條生長曲線。曲線顯示了細菌生長繁殖的四個期。細菌的生長曲線是在體外人工培養條件下觀察到的，在動物體因受諸多因素的制約，未必能出現此種典型的曲線，但對細菌生長規律的研究及實踐有重要的參考價值。以下為各個時期及其特點：緩慢期細菌來到新環境的一個適應過程。菌體增大，代活潑，合成并積累所需酶系統。RNA含量明顯增加，但DNA含量無變化。此時細菌數并不增加。對數期細菌此時生長迅速，以恒定的速度進展分裂繁殖，活菌數以幾何級數增長，到達頂峰。生長曲線接近一條斜的直線。該期的病原菌致病力最強，其形態、染色特性及生理活性較典型，對抗菌藥物的作用較為敏感。穩定期因營養的消耗、代產物的蓄積等，細菌繁殖速度下降，死亡數逐步上升，新繁殖的活菌數與死亡數大致平衡。該期細菌的形態及生理形狀常有改變。毒素等代產物大多在此時產生。衰亡期細菌開場大量死亡，死菌數超過活菌數。細菌菌體變形或自溶，染色不典型，難以進展鑒定。何謂培養基？種類有哪些？培養基還是人工配制的基質，含有細菌生長繁殖必需的營養物質。培養基制成后，通常都要進展滅菌處理。種類：按營養組成，狀態，功能差異區分根底培養基含多數細菌生長繁殖所需的根本營養成分，常用新鮮牛肉浸膏，參加適量的蛋白胨、NaCl、磷酸鹽，調節pH至7.2~7.6即成。營養培養基在根底培養基，添加葡萄糖、血液或血清等，即成營養培養基，最常用的是血瓊脂平板〔在營養瓊脂中參加5%的新鮮血液配制成〕液體培養基在液體培養基中參加1%~2%的瓊脂，加熱融化再冷卻凝固。用于細菌的別離純化、菌落觀察、生物活性檢測等，可制成試管斜面或傾倒平面。固體培養基在液體培養基中參加0.5%的瓊脂。可做穿刺試驗，觀察細菌的運動力。半固體培養基鑒別培養基針對特定菌種設計，根據其特定產物，在培養基中參加特定作用底物或顯色指示劑，憑肉眼識別顏色既能鑒別菌種。Eg三糖鐵培養基和麥康凱培養基。選擇培養基在培養基中參加*些化學物質，對不同細菌分別產生抑制或促進作用，從而可從混雜多種細菌的樣本別離出所需細菌。Eg麥康凱培養基、SS培養基、伊紅美藍培養基等。厭氧培養基為培養厭氧菌而設計。試述主要的細菌生化反響的原理及用途。P28P29各種細菌能夠分解利用的營養物質不同，對一樣營養物質的分解產物也不同，據此可以設計特定的生化反映，作為鑒定細菌只用。細菌的合成代產物如毒素、色素等也有一定的鑒別意義，但一般不用生化反響檢測。常用的生化反響有氧化酶實驗、觸酶試驗、氧化發酵(O/F)實驗、VP試驗及甲基紅實驗等。可采用微量法和常量法。目前一般多用商品化的微量生化試劑檢測劑盒。VP試驗由兩學者創立得名。大腸桿菌和產氣桿菌均能發酵葡萄糖，產酸，產氣，兩者不能區別。但產氣桿菌能使丙酮酸脫落，生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在堿性溶液中被空氣中的分子樣所氧化，生成的乙二酰與培養基中含胍基的化合物發生反映，生成紅色化合物，是為陽性。大腸桿菌不能生成乙酰甲基甲醇，故為陰性。甲基紅試驗在VP試驗中，產氣桿菌分解葡萄糖，產生的兩分子丙酮酸轉變為一分子中性的乙酰甲基甲醇，故最終的酸類較少，培養液pH＞5.4。以甲基紅(MR)做指示劑是，溶液呈橘黃色，是為陰性。大腸桿菌分解葡萄糖時，丙酮酸不轉變為乙酰甲基甲醇，故培養基酸性較強，pH≤4.5，甲基紅指示劑呈紅色，則為陽性。生物被膜有何特點。生物被膜中的細菌由于被多糖等物質包埋而受到保護，對外環境的抵抗力及對抗生素的抗性均較同種游離的單個菌體強，影響抗生素的療效和滅菌效果。電鏡下可觀察到細菌的生物被膜呈連片狀的菌體團塊。研究說明有的細菌如嗜水氣單胞菌，治病菌株可形成生物被膜，而非致病菌不形成。生物被膜的形成手細菌的密度感應系統調控。何謂密度感應系統調控？舉例說明其應用價值。P30試述益生菌和益生元的概念及應用價值。*些細菌或真菌有利于宿主胃腸道微生物區系的平衡，能抑制對宿主有害的微生物的生長，用這些微生物制成的制劑稱為益生菌或益生素。飼料或食品中的*些寡糖例如果寡糖〔FOS〕等成分，不被宿主消化吸收，但等選擇性的刺激宿主消化道有益微生物或飼喂的益生菌的生長，對宿主產生有益作用，此類成分叫益生元或益生素元。益生菌及一生緣亦可聯合使用。二者對動物有一定的保健作用。何謂菌群失調？保持動物正常菌群有何重要意義？因患病、外科手術、環境改變和濫用抗菌藥物等原因，宿主*個微生物正常菌群中的細菌種類和數量發生改變，對機體造成損失，出現一定病理效應的狀態，稱為菌群失調。例如長期連續或短期大量口服大腸桿菌敏感的抗菌藥物，殺死了腸道有益大腸桿菌，致使對抗菌藥物不敏感的致病性大腸桿菌或其他腸道致病菌借機大量增值，引起腸道疾病。正常菌群與其宿主之間形成一個共生關系，具體表現在營養免疫和生物拮抗三個方面。P32試述悉生生物學和悉生動物的概念、實驗動物分類〔包括定義〕以及培育實驗動物的意義。悉生動物學：是用無菌動物技術研究微生物與其宿主相互關系的生命科學，它是在科學研究與臨床醫學中應用悉生動物的科學。悉生動物：一切生命形態都知道的動物。根據概念可分為五類，其中無特定病原體動物應用正日趨廣泛。無菌動物不帶任何微生物的動物，即無外源菌動物。實際上*些源性病毒或正常病毒很難去除，因此無菌動物事實上是一個相對概念。無菌動物中還有一種無γ球蛋白動物。悉生動物俠義的悉生動物是指無菌動物，廣義也指有目的地帶有*種或*些微生物的動物。無菌動物帶有或接種了一種微生物的動物叫單聯悉生動物，帶兩種微生物者稱雙聯微生物，依次類推，稱為三聯或多聯微生物。無特定病原體動物〔SPF〕是指不存在*些特定的具有病原性或潛在病原性微生物的動物。例如為了排除*些細菌如假單胞菌屬、變形桿菌屬、克雷伯菌屬等的干擾，可通過無菌動物與這些細菌以外的正常菌群相聯系培育SPF動物。清潔動物是指動物來源于剖腹產，飼養與半屏蔽系統，其體外不能攜帶人畜共患病和動物主要傳染病的病原體。是無菌動物與安康動物純粹的正常微生物群相聯系的結果。普通動物是指在開放條件下飼養，其體外存在著多種微生物和寄生蟲，但不能攜帶人畜共患病病原微生物的動物。培育實驗動物的意義：由于無菌動物不受任何微生物的刺激和干擾，所以可以用于研究動物體外微生物區系對機體的影響及微生態學研究，可用來研究免疫、腫瘤、病理及傳染病的凈化等。由于無菌動物的培育和飼養技術很困難，所以通常用悉生動物代替。第三章消毒、滅菌及獸醫微生物實驗室的生物平安【容提要】消毒和滅菌是獸醫微生物學實踐中的最常用的措施。常用的火焰滅菌法、熱空氣滅菌法、高壓蒸汽滅菌法、巴氏消毒法及煮沸滅菌法各有特點和實用圍。可見光中的紫外線和紅外線有殺菌作用，光復活作用是一個值得注意的現象。Γ射線和微波等也常用于滅菌。濾過除菌應用廣泛，制造生物制品等藥品的車間的空氣需要濾過并要求到達一定的干凈程度。化學消毒劑的成效易受環境因素的影響，抗生素等用于細菌感染的治療。細菌素對同種或類似細菌有一定的抑殺作用。根據從事的病原微生物的危害性的差異，獸醫微生物實驗室通常通常分為生物平安等級1~4級〔BSL1~4)4種規格，BSL~4是最高平安級別。我國農業部將動物病原微生物分為一至四類，一類危害性最大。復習思考題1、滅菌、消毒、防腐、無菌的概念？答：〔1〕滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法，包括殺滅細菌芽胞霉菌孢子在的全部病原微生物和非病原微生物。〔2〕消毒：殺滅物體上病原微生物的方法，僅要求到達消除傳染性的目的，而對非病原微生物及其芽胞、孢子并不嚴格要求全部殺死。〔3〕防腐：阻止或抑制物品上微生物生長繁殖的方法，微生物不一定死亡。〔4〕無菌：無菌為不存在活細菌的意思。防止或杜絕細菌進入動物、人或其他物品的方法稱為無菌操作。2、物理消毒滅菌方法主要有哪些？如何合理選用？答：〔1〕熱力滅菌法：高溫滅菌法是最古老、作用最大、應用最廣、使用最簡便以及效果最可靠的滅菌方法。熱力使蛋白質中的氫鍵破壞使之變性或凝固，使雙股DNA分開為單股，活化核酸酶使單股DNA斷裂。細菌繁殖體對其最為敏感，其次的真菌和病毒，細菌芽胞對熱有很強的抵抗力作用。熱力滅菌法分為干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類，在同一溫度下后者的效力比前者大，這是因為濕熱中菌體蛋白較易凝固、濕熱穿透力比干熱強、蒸汽變為液態時可釋放大量潛熱迅速提高被滅菌物體的溫度。輻射滅菌法輻射包括電磁波輻射和粒子輻射。輻射除可被一些產色素細菌利用作為能量源外，對多數細菌有損害作用。超聲波殺菌法超聲波裂解細胞的主要機制：它通過水發生空〔腔〕化作用，在液體中造成壓力改變，應力薄弱區形成許多小空腔，逐漸增大，最后崩裂。有殘存，費用頗大，故未應用于消毒滅菌。目前主要用于裂解細胞，提取細胞組分進展研究。濾過除菌法概念：是通過機械、物理阻流作用將液體或空氣中的細菌等微生物除去的方法。適用條件：通常不能除去病毒、支原體、細菌L型等微生物。糖培養液、各種特殊的培養基、血清、毒素、抗毒素、抗生素、維生素、氨基酸等不能加熱滅菌的液體常用濾器過濾除菌。此外，還可以進展病毒的別離。利用空氣過濾器可以進展超凈工作臺、無菌隔離器、無菌操作室、實驗動物室以及疫苗、藥品、食品等生產廠房的空氣濾過除菌。枯燥及低溫抑菌法枯燥→失水→新代障礙→菌體蛋白質變性或鹽類濃度增高→死亡利用高濃度的鹽溶液或糖溶液保存食品，是由于高濃度的溶液吸取菌體的水分，造成微生物的生理性枯燥而到達抑菌的目的。類型概念方法、滅菌機制條件干熱滅菌法火焰滅菌法以火焰直接灼燒殺死物品中病原微生物的方法灼燒〔直接用火焰滅菌〕適用于耐燒的接種針〔環〕、金屬器具、試管口等的滅菌燃燒〔直接點燃或者燃燒爐燃燒〕常用于燒毀的物品，如患病動物尸體、病畜禽的墊料及其他污染廢棄物等熱空氣滅菌法利用干熱滅菌器，以干熱空氣進展滅菌的方法在干熱情況下，由于熱空氣的穿透力較低，需在160℃維持2h才能到達殺死所有微生物及其芽胞、孢子的目的。適用于高溫下不損壞、不變質、不蒸發的物品，如各種玻璃器皿、瓷器、金屬器械等濕熱滅菌法煮沸消毒法常壓下煮沸10~20min可殺死所有細菌的繁殖體，芽胞長需煮沸1~2h才能被殺死。假設在水中參加2％碳酸鈉或2％~5％石炭酸，可以提高沸點，增強殺菌力外科手術器械、注射器、針頭以及食具等多用此法消毒巴氏消毒法以較低溫度殺滅液態食品中的病原微生物或特定微生物，而又不嚴重損害其營養成分和風味的消毒方法①.低溫維持巴氏消毒法：在63~65℃維持30min；目前主要應用于葡萄酒、啤酒、果酒、牛乳等食品的消毒。超高溫巴氏消毒法的鮮乳在常溫下保質期可長達半年。②高溫瞬時巴氏消毒法：在71~72℃保持15s；③超高溫巴氏消毒法：在132℃保持1~2s。加熱消毒后迅速冷卻至10℃以下〔冷擊法〕流通蒸汽消毒法是利用一個標準大氣壓下100℃的流通蒸汽進展物品消毒，又稱常壓蒸汽消毒法100℃的蒸汽維持30min足以殺死細菌的繁殖體，但細菌的芽胞和真菌孢子不能被全部殺滅。該法常用阿諾德流通蒸汽滅菌器或蒸籠。流通蒸汽滅菌法利用反復屢次的流通蒸汽間歇加熱以到達殺滅所有微生物的方法，又稱間歇滅菌法或丁達爾滅菌法在流通蒸汽滅菌器進展第一次流通蒸汽滅菌后，將物品移植37℃保溫箱中保溫過夜，待芽胞萌發出芽，次日以同樣的方式再進展一次滅菌和保溫過夜，如此連續3次以上，可到達完全滅菌的效果。此法常用于一些不耐高溫的培養基，如雞蛋培養基、血清培養基、糖培養基的滅菌。如將物品在70~80℃加熱1h。連續6次，也可到達滅菌目的，且可不破壞血清等物質。根據滅菌對象不同，溫度、加熱時間、次數，均可適當增減。高壓蒸汽滅菌法用高壓蒸汽滅菌器進展滅菌的方法。在103.4kPa蒸汽壓下，于121.3℃維持15~20min，可殺死包括細菌芽胞在的所有微生物。是應用最廣、最有效的滅菌方法。凡耐高溫、不怕潮濕的物品，如各種培養基、溶液、玻璃器皿、金屬器械、敷料、橡皮手套、工作服和實驗小動物尸體等均可。類別概念方法、滅菌機制條件非電離輻射可見光是指紅外線和紫外線之間的肉眼可見的光線，波長400~800nm可見光具有微弱的殺菌作用，假設將*些染料如結晶紫、美藍、汞溴紅、伊紅、沙黃等加到培養基或涂在外傷外表，能增強可見光的殺菌作用，這一現象稱為光感作用。一般在有氧的情況才出現光感作用。〔染料激活氧或染料氧化起殺菌作用〕光感作用對原生動物、細菌、毒素、病毒和噬菌體等均有滅火作用。革蘭陽性菌對光感作用比陰性敏感，美藍、汞溴紅、伊紅僅作用于革蘭陽性菌，而沙黃則作用于革蘭陰性菌。日光直射日光有強烈的殺菌作用多數微生物在直射日光的照射下半小時到數小時即可死亡。芽胞往往須經20h才可死亡。效果影響因素眾多。實際生活中，日光對被污染的土壤、牧場、畜舍、用具等的消毒以及江河的自凈作用均有重要意義紫外線紫外線波長200~300nm局部具有殺菌作用，其中265~266nm殺菌力最強。紫外線損害DNA構型，干擾DNA的復制和轉錄；使空氣中的分子氧變為臭氧，釋放出氧化能力強的氧原子。實驗室通常使用的紫外線殺菌燈，殺菌力強而穩定紫外線的穿透力弱，故只能用于微生物實驗室、無菌室、手術室、傳染病房、種蛋室等的空氣消毒，或用于不能用高溫或化學藥品消毒的外表消毒；光復活作用。紅外線紅外線是波長為0.77~1000微米的電磁波，尤以1~10微米的熱效應最強利用紅外線烤箱滅菌。無需空氣傳導，可是照射物體外表迅速升溫。滅菌作用與干熱相似，滅菌時間、所需溫度亦同于熱空氣滅菌法。此法多用于醫療器械的滅菌。微波微波主要是一種波長1mm到1m的超高頻電磁波消毒中常用的微波頻率為915~2450MHz。主要是利用微波的加熱作用。可透過玻璃、塑料薄膜、瓷等物質，但不能透過金屬外表。目前主要用于食品工業，醫藥方面用于維生素和中藥藥丸等的滅菌。時間短，加熱均勻是其顯著特點。電離輻射放射性同位素的射線〔即α射線、β射線、γ射線〕和*射線以及高能質子、中子等可將被照射物質原子核周圍的電子擊出，引起電離，故稱為電離輻射。射線使水電離出游離基〔強烈的復原劑和氧化劑〕直接作用于細菌；射線使酶失活；導致包括DNA在的細胞物質分解；在足夠計量時，對各種細菌均有致死作用。在實際工作中，其他等缺乏穿透力不實用，主要應用*射線、γ射線、β射線。電離輻射多用于大量一次性塑料制品的消毒，亦可用于食品、飼料的消毒，且不破壞其營養成分。3、影響消毒劑作用的因素消毒劑的性質和作用時間：絕大多數消毒劑在高濃度時殺菌作用大，濃度低至一定程度只有抑菌作用。過濃不一定能提高消毒效力。一定濃度下，對細菌作用的時間越長，效果越好。微生物的種類和數量：同一消毒劑對不同種類處于不同事情的微生物效果不同。微生物數數量越大，所需消毒時間就越長。溫度：一般溫度升高可增強殺菌效果。④酸堿度：消毒劑的殺菌效果受PH的影響。PH也影響消毒劑的電離度，一般未電離的因子易通過細胞壁殺菌效果好。⑤有機物：環境中有有機物，特別是蛋白質能和許多消毒劑結合，嚴重影響效果。⑥藥物的相互拮抗：消毒劑理化性質不同，兩種藥品合用時可能產生相互拮抗，使藥效降低影響消毒效果的還有濕度、穿透力、外表力及拮抗物質等。試述我國"獸藥GMP"對獸藥生產干凈室〔區〕空氣干凈度的劃分。答：100級、10000級、100000級、300000級5.比擬消毒劑、防腐劑，化學治療劑的殺菌機制。答：消毒劑和防腐劑之間沒有嚴格界限。消毒劑與化學治療劑不同，它在殺滅病原微生物的同時，對動物體的組織細胞也有損害作用，所以只能外用或用于環境的消毒，其中少數不被吸收的化學消毒劑亦可用于消化道的消毒。而化學治療劑對于宿主和病原微生物的作用具有選擇性，她能使微生物受抑制或死亡，而對宿主細胞毒副作用甚小。消毒劑：用來殺滅病原微生物的化學藥劑。防腐劑：用于抑制微生物生長繁殖的化學藥劑。化學治療劑：用于消除宿主體病原微生物或其他寄生蟲的化學藥品稱為化學治療劑。抗生素和細胞素二者的作用原理如何？〔1〕抗生素：*些微生物在代中產生的一類能抑制或殺死另一些病原微生物的物質。作用原理：①干擾細菌細胞壁的合成；②損傷細胞膜而影響其通透性；③影響菌體蛋白質的合成；④影響核酸的合成；〔2〕細菌素：是*種細菌產生的一種具有殺菌作用的蛋白質。只能作用于與它同種不同株的細菌以及與它親緣關系相近的細菌第四章細菌的感染與致病機理【容提要】細菌是否有致病性，經典的依據是柯赫法則，近年來提出的基因水平的柯赫法則對此標準做了補充和完善。就*種病原菌而言，其致病性一般通過測定LD50來定量。細菌的致病性在很大程度上取決于其毒力因子，包括侵襲力與毒素，以及毒力因子的分泌系統。侵襲力導致病原菌在機體定殖、突破機體的防御屏障、化作用、繁殖與擴散。毒素有外毒素和毒素之分，外毒素是具有特異性毒性作用的蛋白質，典型構造為A-B亞單位的聚體。毒素為LPS的類脂A，耐熱，具有致熱作用等。有關病毒致病性的現代觀點不僅要考慮病原菌，還要考慮宿主及二者的相互作用，時機致病菌因此得以重視。細菌的毒力可用人工的方法增強或減弱，并受到溫度、離子濃度等多種環境因子、非編碼小RNA及二元信號轉導系統等的調節。復習思考題〔1~6重點〕致病性與毒力的概念。〔1〕一定種類的病原菌在一定的條件下，能在宿主體引起感染的能力稱為致病性。病原菌致病力的強弱程度稱為毒力。經典的柯赫法則。由德國細菌學家羅伯特·柯赫890年提出，是確定*種細菌是否具有致病性的主要依據：特殊的病原菌應在同一疾病中查見，在安康者不存在：此病原菌能被別離培養而得到純種；此純培養物接種易感動物，能導致同樣病癥。LD50的概念。答：半數致死量〔LD50〕是指能使接種的實驗動物在感染后一定時限死亡一半所需的微生物量或毒素量。外毒素與毒素的區別。概念特性組成化學性質產生耐熱性毒性作用毒性程度致熱性免疫原性能否產生類毒素外毒素是*些病原菌在生長繁殖過程中所產生的對宿主細胞有毒性的可溶性蛋白質蛋白質由*些革蘭陽性菌或陰性菌分泌通常不耐熱特異性，為細胞毒素、腸毒素或神經毒素，對特點的細胞或組織發揮特點作用高，往往致死對宿主不致熱強，刺激機體產生中和抗體〔抗毒素〕能，用甲醛處理大多數外毒素由A、B兩種亞單位組成。A亞單位為毒素的活性中心，B亞單位為結合部位毒素特指革蘭陰性菌中的脂多糖〔LPS〕成分，細菌在死亡后破裂或用人工方法裂解菌體后才釋放脂多糖由革蘭陰性菌裂解產生極為耐熱全身性，致發熱、腹瀉、嘔吐弱，很少致死常致宿主發熱較弱，免疫應答缺乏以中和毒性不能LPS由O特意多糖側鏈、非特異核心多糖和類脂A組成。感染的類型。答：隱形感染和顯性感染細菌毒力減弱的方法答：〔1〕長時間在體外連續培養傳代；〔2〕在高于最適生長溫度條件下培養；〔3〕在含有特殊化學物質的培養基中培養；〔4〕通過非易感動物；〔5〕通過基因工程的方法；7.試述致病菌侵入宿主細胞的主要過程。答：定殖〔細菌感染的第一步就是在體定殖〕→干擾或逃避宿主的防御機制〔抗吞噬作用、抗體液免疫機制〕→化作用〔指*些細菌在粘附在細胞組織后能進入吞噬細胞或非吞噬細胞部的過程〕→在體增殖〔核心問題，增殖速度對致病性極其重要〕→在體擴散8.什么樣的細菌能進展化作用，意義何在？答：〔1〕結合桿菌、氏桿菌、衣原體等嚴格的胞寄生菌及大腸桿菌、沙門菌、耶爾森菌等胞外寄生菌；意義：細菌通過這種位移作用進入深層組織，或進入血液循環，借以從感染的病發原灶擴散至全身或較遠的靶器官。宿主細胞為進入其中的細菌提供了一個增殖的小環境和庇護所，使細菌逃避宿主免疫機制的殺滅。胞外蛋白酶有何致病作用，舉例說明。細菌分泌的蛋白酶稱為胞外蛋白酶。它們具有多種致病作用，例如激活外毒素、滅活細菌中的補體等，有的蛋白酶本身就是外毒素。此外，最主要的作用是造成組織基質或細胞膜的損傷，增加其通透性，有利于細菌在體擴散。此毒素常見的有：透明質酸酶，分解基地組織，葡萄球菌、鏈球菌可產生；膠原酶，分解ECM中的膠原蛋白，見之于梭菌、氣單胞菌等；神經氨酸酶，分解細胞膜的磷脂，產氣莢膜梭菌等可產生。10.什么是類毒素，有何用途？答：外毒素在0.4％的甲醛溶液作用下，經過一段時間可脫毒，但仍保存原有抗原性，稱為類毒素。注入機體后可刺激機體產生抗毒素，可作為疫苗進展免疫接種。舉例說明細菌毒力因子重要的分泌系統的主要特點。答：具有接觸介導的特征：以腸致病性大腸桿菌〔EPEC〕為例，置37℃的處于對數生長期的EPEC與宿主細胞接觸后，T3SS大量分泌蛋白質并進入宿主細胞。EPEC的4型菌毛〔BFP〕對激活此分泌系統起關鍵作用。T3SS的這種接觸激活作用可被氯霉素抑制。什么是時機致病菌？為什么應予以重視？是指*些細菌通常不主動入侵宿主，但當宿主的免疫屏障被翻開或免疫功能異常時，這類細菌就會進入機體的血液或組織，造成感染并致病。細菌致病性與毒力的傳統概念的缺陷是僅考慮病原菌本身，即著重研究那些專性致病菌，無視了宿主因素以及宿主和病原菌的相互作用。環境因子如何影響細菌毒力因子的調節，舉例。〔1〕溫度：嗜水汽單胞菌的毒素、菌毛在25℃左右表達量最正確；鐵：它不僅可以誘導鐵載體、鐵載體受體及其它鐵結合蛋白受體等與鐵代有關的成分表達，而且還對*些細菌毒素有調節作用，如類志賀毒素；鈣：鈣對耶爾森菌Yops的表達有調節作用。Yops是耶爾森菌的一系列外膜蛋白，是重要的毒力因子；滲透壓：滲透壓對霍亂弧菌的毒力及菌毛的表達有調節作用，在宿主組織相近的生理圍表達量最高。14.什么是非編碼小RNA答：是一大類不編碼蛋白質的RNA分子，存在于所以生物體中。sRNA作為一種新的調控因子，可與mRNA結合，導致后者降解；或與蛋白質結合，影響蛋白質的生物學功能。什么是二元信號轉導系統？其在病原信號傳遞上有何作用。答：最簡單的二元信號轉導系統〔TCSTS)由組氨酸激酶〔HK〕和反響調節因子〔RR〕組成。感受到外界環境信號后將RR磷酸化，將外界信號傳遞到胞。整個雙組分信號通路由信號輸入，HK自身磷酸化、RR磷酸化及信號輸入等環節構成。TCSTS在病原菌的信號傳導中起著極為重要的作用，包括病原菌對宿主的識別和侵襲，對環境的代性適應。對滲透壓改變的勝利應答、趨化性等等。細菌的遺傳變異【容提要】細菌遺傳變異的物質根底組合要是基因組。質粒作為細菌基因組外自我復制的遺傳物質，控制細菌的*些次要形狀，如抗性等，并可以轉移或喪失。轉位因子包括插入序列、轉座子、Mu噬菌體及基因盒-整合子系統，具有可移動性和不穩定性。毒力島是具有潛在可移動性的毒力基因群。轉化、傳導和接合是細菌個體間交換遺傳物質的天然方，采用原生質體融合等人工方法也可到達相似的目的。掌握細菌遺傳變異的規律，不僅有利于