經典word整理文檔，僅參考，轉Word此處可刪除頁眉頁腳。本資料屬于網絡整理，如有侵權，請聯(lián)系刪除，謝謝！一、五芝液體內抗腫瘤作用與免疫調節(jié)作用20世紀70年代，日本學者最先發(fā)現靈芝提取物和靈芝多糖體內給藥對動物移植性腫瘤有顯著的抑制作用，并提出靈芝的抗腫瘤作用是“宿主中介性的”，可能是通過增強機體的免疫功能而實現的。經一系列研究證明：靈芝提取物及其所含多糖肽灌胃可抑制小鼠移植性腫瘤S180、人肺癌（PG）、Lewis肺癌的生S180或人白血病細胞的培養(yǎng)液中，對腫瘤細胞生長無抑制作用。提示靈芝制劑增強機體的抗腫瘤免疫力可能是其中重要的一環(huán)。隨后的研究證明，靈芝多糖肽可直接作用于單核巨噬細胞、樹突狀細胞和細胞毒T-細胞，增強其功能。促進TNF-αmRNA和IFN-γmRNA表達，增加TNF-α和IFN-γ生成，也促進IL-1和IL-6等細胞因子生成，增強細胞因子的活性，從而抑制腫瘤細胞增殖，誘導腫瘤細胞凋亡，最終殺死腫瘤細胞。加入靈芝多糖或12.8μg/ml）可明顯促進DC表面DC11c及I-A/I-E增加IL-1240亞基mRNADC誘導的混合淋巴反應（MLC），表明靈芝多糖能促進DC的成P815腫瘤細胞裂解物沖擊致敏小鼠骨髓來源的DC誘導產生的特異性細胞毒T淋巴細CTL及細胞培養(yǎng)上清液，以釋放入CTL與P815腫瘤細胞共培養(yǎng)體系細胞培養(yǎng)上清CTL的特異性殺傷RT-PCR法檢測CTL中IFN-γ及顆粒酶B的mRNAELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中IFN-WesternBlot法檢測CTL表達的顆粒酶B的蛋白含量。結果顯示：當DC經P815腫瘤細胞凍融抗原沖擊致敏CTL對P815腫瘤細胞具有殺傷作用，靈芝多糖（Gl-PS）（0.8、3.2或12.8μg/ml）可增強此作用，使釋放入培養(yǎng)上清液中的LDH活性顯著增強。進一步研究發(fā)現，同上濃度的靈芝多糖可明顯增加DC誘導CTL的IFN-γ蛋白含量增加。上述濃度的靈芝多糖還可明顯增加DC誘導的CTL的顆粒酶BmRNADC成熟階段，增強DC對腫瘤抗原的捕獲、處理、遞呈能力，增強DC誘導的特異性CTL活化CTL的mRNAIFN-γ顆粒酶參與促進CTL及NK酶家族中，以顆粒酶B功能最強。靈芝多糖促進CTL的顆粒酶BmRNACTL的細胞毒活性有關。二、五芝液中靈芝多糖增強細胞因子誘導的殺傷細胞活性繼應用淋巴因子活化的殺傷細胞（LAK細胞）于腫瘤的過繼免疫治療之后，將人外周血淋巴細胞在體外與多種細胞因子共培養(yǎng)后，獲得一群異質細胞即細胞因且明顯優(yōu)于LAK細胞，比LAK細胞更適合于腫瘤的過繼免疫治療。是新一代抗腫瘤過繼細胞免疫治療的首CIK細胞[小鼠脾細胞培養(yǎng)中加入CD3單IL-1(100Ku/L)]，和400μg/ml）后，可明顯降低CIK細胞培養(yǎng)中的白介素-2（IL-2）和抗CD3單抗的用量（分別為未加靈芝多糖的對照組的75%和CIKCIK細胞在體外殺傷YAC-1和P815腫瘤細胞的殺傷率亦與常規(guī)對照組無明顯差異。同樣將此CIK細胞靜脈輸注給荷S180或荷H22肝肉瘤小鼠后，其體內抗腫瘤療效與常規(guī)CIK細胞治療組比較亦無差異。研究者還發(fā)現，靈芝多糖在降低抗CD3單抗和IL-2用量75%的條件下，能促進CIK細胞顆粒酶B以及穿孔素mRNA糖通過增加顆粒酶B和穿孔素的表達，從而增強CIK細胞殺傷腫瘤細胞的活性。研究者的試驗還證明，淋巴細胞表面的補體3型（CR3）受體介導靈芝多糖對CIK細胞的作用。關于免疫細胞上靈芝多糖作用的受體還有一些研究。ChenTLRPTK/PLCγl/蛋白激酶C（PKC）/絲裂原激活的蛋白激酶1(MEK1)/胞外信號調節(jié)激酶(ERK)，PTK(Sac)/Racl/PAK/p38和PIK/Racl/PAK/JNKIL-1產生。表達蛋白及其mRNA，抑制DC的內吞活性；此外，經PS-G作用后的DC細胞刺激T細胞的活性增強，促進T細胞分泌IFN-γ、IL-10。抗TLR4TLR4抗體可抑制PS-G誘導的IL-12、IL-10的分泌，提示PS-G作用于DC的信號通路中，TLR4發(fā)揮了關鍵作用。一項研究表明，熒光胺標記的黃芪多糖（fl-APS）以TLR4檢測顯示分子量為5.849X105競爭性地抑制fl-APS示Gl-PS能夠結合巨噬細胞膜表面的TLR4步研究證明，GL-PS誘導Balb/c小鼠腹腔巨噬細胞產生C3H/HeJ小鼠腹腔巨噬細胞分泌IL-1β，而IFN-γ仍可刺激IL-1β的分泌；由于C3H/HeJ小鼠的TLR4基因有一個堿基突變導致TLR4受體胞漿區(qū)一個氨基酸由脯氨酸突變導致TLR4受體胞漿區(qū)一個氨基酸由脯氨酸突變成組氨酸，使TLR4喪失信號轉導功能。因此提示GL-PS可能通過TLR4激活巨噬細胞。另外，發(fā)現兔抗小鼠Ig抗體明顯抑制Gl-PS誘導的小鼠脾細胞增殖（Gl-PS可顯著促進純化的小鼠B細胞而非T細胞增殖），而對照正常兔IgG則無此作用。抗小鼠Ig抗體濃度即使達到30μg/ml，對ConA誘導的脾細胞增殖沒有顯著影響，結果說明小鼠B細胞膜表面Ig分子參與Gl-PS對BB細胞表面Gl-PS受體分子之一。比較Balb/c和C3H/HeJ小鼠脾細胞對Gl-PS的反應性，發(fā)現與LPS類似，Gl-PS可明顯刺激Balb/c小C3H/HeJ小鼠脾細胞無刺激作用，表明TLR4參與Gl-PS對小鼠BGl-PS促進BTLR4是B細胞和巨噬細胞表面重要的Gl-PS受體分子。三、五芝液中靈芝成分抑制體外培養(yǎng)的腫瘤細胞增殖及其機制近十余年發(fā)現靈芝及其有效成分對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞具有抑制作用。如發(fā)現靈芝（赤芝、紫芝、松杉靈芝）子實體提取物抑制體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞多糖）和GLE-2（主要含三萜類）抑制人結腸癌細胞SW480增殖，且后者的作用強于前者。從靈芝子實體中提取的三種羊毛甾烷型三萜lucialdehydeB和C對Lewis和Meth-A腫瘤細胞株具有細胞毒作用。lucialdehydeC對試驗細胞株的細胞和Meth-A這4種腫瘤細胞的ED為10.7、4.7、7.1和3.8μg/ml。50一項研究是觀察富含三萜組分的靈芝提取物對26種人癌細胞株的抗增殖活性，結果發(fā)現6種造血細胞株ED50（63）、K562（50）、Blin-1（38）、Nalm-6（30）和停止在G期或M期，以HL-60細胞最為明顯。其中42種造血細胞株（HL-60、Blin-1、U937和RPMI8226）可見21%-92%的細胞凋亡。在靈芝提取物作用下，HL-60細胞變成多核細胞，且其DNA含量增加。結果多發(fā)性骨髓瘤有明顯抑制作用。靈芝孢子粉的乙醇提取物Ⅰ和Ⅲ顯著抑制Hela細胞生長。提取物Ⅲ能阻斷細胞周期從G期S期的轉變，1并使細胞內鈣水平顯著降低。提示提取物可能通過影響細胞周期和細胞內鈣信號轉導而抑制腫瘤細胞生長。從靈芝菌絲中制備的富含三萜組分WEES-G6在體外可抑制人肉瘤Huh-7細胞生長。用WEES-G6處理細胞可是細胞生長調節(jié)蛋白PKCp38MAP激酶的活化，并因此延長細胞周期的G期，抑制肝肉2瘤細胞生長。靈芝乙醇提取物可劑量和時間依賴性地抑制MCF-7腫p21/Waf1和下調cyclinD有關。此外，它還可通過上調前凋亡蛋白Bax誘導1MCF-7細胞凋亡。從鹿角靈芝提取的一種四環(huán)三萜Ganoderiol可誘導高度增殖的腫瘤細胞株老化，使HepG2、Huh7和K562Hep3B和正常成纖維細胞MRC5Hep3BGolF處理體外培養(yǎng)的癌細胞，導致DNA合成迅速抑制，細胞周期停止進行，24HepG2細胞生長仍可恢復。用30μmol/LGolF連續(xù)處理HepG2細胞18天之后，可見超過50%的細胞變大、變平，老化細胞呈現β-半乳糖苷酶陽性。GolF在體外可抑制拓撲異構酶，這可能與其抑制細胞DNA合成GolF酶EKR活化以及上調周期素（cyclin）依賴的蛋白激酶抑制因子p16，推測這與引起細胞周期停滯以及觸發(fā)HepG2引起腫瘤細胞生長停滯和老化提示它有潛在的抗腫瘤作用。鹿角靈芝的甲醇提取物抑制人肝肉瘤HuH-7細胞、結腸肉瘤HCT-116細胞、Burkitt’s淋巴瘤Raji細胞（IC）為82.2-135.3μg/ml。一些成分在體外還能50抑制拓撲異構酶Ⅰ和Ⅱα的活性。其中最強的是羊毛甾烷三萜類的靈芝酸X（GAX；3α-hydroxy-15α-acetoxy-lanosta-7，9（11），24-trien-26-oicacid），GAX對HuH-7、HCT-116、Raji、HL-60細胞的IC分別為50和GAX處理人肝肉瘤HuH-7細胞立即引起DNAERK和JNK絲裂原-活化蛋GAX誘導腫瘤細胞凋亡的分子機制與其促使染色體DNA斷裂、降低Bcl-xL水平、使線粒體膜破裂、促使細胞質中細胞色素C釋放和caspase-3活化有關。該認為，GAX抑制拓撲異構酶及使敏感細胞凋亡與其抗腫瘤作用有關。結腸癌細胞HT-29增殖，并抑制裸鼠移植性結腸腫瘤的這些作用與細胞周期的G/G期相阻滯01有關。研究者發(fā)現，GLT誘導結腸癌細胞中出現自吞噬空泡，并上調Beclin-1表達（增加1.3倍）以及LC-3蛋白表達（增加7.3倍），移植性結腸腫瘤模型裸鼠Beclin-1增加3.9倍，LC-3增加1.9倍。自吞噬是由p38抑制劑SB202190可引起癌細胞自吞噬，并使Beclin-1和LC-3表達分別增加1.2倍和7.4倍。GLT抑制結腸癌細胞P38MAPK磷酸化可達60%。通過用流式細胞儀測量細胞活力、細胞周期。用DNAWestern-blot法檢測細胞內凋亡蛋白和激酶的變化，研究靈芝子實體提取物和甲醇提取物經柱層析半純化的組分誘導NB4人白血病細胞的毒性及凋亡作用。結果可見，靈芝子實體提取物稍微降低NB4細胞活力的誘導NB4細胞的DNA斷裂。甲醇提取物半純化組分在稀釋到15%或著降低NB4白血病細胞的活力并伴隨誘導DNA斷裂和細胞凋亡。其E3組分稀釋到15%的初始濃度引起與Bcl-2/Bax相關的p53基因水平降低，以及非磷酸化蛋白激酶ERK(ERK1、2)兩者水平降低。表明靈芝的活性組分可引起人白血病細胞凋亡并使信號轉導激酶（Akt和癌細胞AGS可見AGSEGL引起AGS細胞凋亡。EGL處理可引起死亡受體相關蛋5以及TNF相關凋亡誘導配體的表達，它們再進一步激活caspase-8活化