目錄1結核分枝桿菌感染現狀2結核分枝桿菌生物特性、致病性及臨床診斷3結核分枝桿菌檢測方法及其應用4本室目前結核分枝桿菌檢測試劑情況分析5病例分析1結核分枝桿菌感染現狀1我國擁有近5.5億的結核感染人群2我國每年新發生肺結核患者100萬例3結核病主要經呼吸道傳播4只要堅持正規治療，絕大多數肺結核患者是可以治愈的AIDS患者極易合并結核分枝桿菌感染2結核分枝桿菌生物特性與致病性2.1生物特性抵抗力強：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內可存活6～8個月，痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力。變異性：可發生形態、菌落、毒力、免疫原性易發生耐藥性：MDR和XDR，每年有大約44萬例多藥耐藥型肺結核新患者出現，約15萬患者死于多藥耐藥型肺結核2.2致病物質：莢膜—親和吞噬細胞，含有多種酶，能抑制溶酶體同吞噬體結合該菌細胞壁脂質含量較高，約占干重的60%索狀因子—主要損傷細胞線粒體和抑制氧化磷酸化過程，抑制粒細胞游走和引起肉芽腫磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫硫酸腦苷酯—能抑制溶酶體同吞噬體結合蠟質D—可激發機體產生遲發超敏反應蛋白質—可激發機體產生超敏反應2.3結核病的臨床診斷流行病學，臨床表現，體征，胸部影像學實驗室檢測：痰涂片細菌培養結核菌素實驗結核抗體檢查，可供參考組織病理檢查3結核分枝桿菌檢測方法及其應用3.1染色檢測結核分枝桿菌方法抗酸染色法：玻片法：濃集法：夾層杯法妻-尼染色法熒光染色法硫酸腦苷酯—能抑制溶酶體同吞噬體結合噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性實驗室檢查：WBC6.磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫易發生耐藥性：MDR和XDR，每年有大約44萬例多藥耐藥型肺結核新患者出現，約15萬患者死于多藥耐藥型肺結核SSCP：單鏈構象多態性分析，SSCP用于結核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測4本室目前結核分枝桿菌檢測試劑情況分析該菌細胞壁脂質含量較高，約占干重的60%結核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體，擁有數量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數量，放大了信號強度，提高了檢測的靈敏度硫酸腦苷酯—能抑制溶酶體同吞噬體結合液體變色培養基：德國MBRedox系統一、男性患者，31歲。液體變色培養基：德國MBRedox系統PPD抗原：敏感性83.PCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體胸片兩肺文理增多，左踝關節X線攝片骨質未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。應用過二種以上的金標試劑3.2微生物檢測結核分枝桿菌的方法細菌培養羅-琴氏培養基：2周-5周才能長出菌落BactecTB460、BactecMGIT960：20天液體變色培養基：德國MBRedox系統噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性結核桿菌L型：涂片其形態不易與其他細菌的L型相區別，蚌埠醫學院研制的結核桿菌L型液體培養基使結核桿菌L型生長迅速3.3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.5%結核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.9%純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.0%PPD抗原：敏感性83.6%結核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等新的免疫檢測技術TSPOTTB技術，QuantiFERON－TB

利用結核桿菌感染者外周血單核細胞中存在結核特異的活化T淋巴細胞,這些淋巴細胞在受到結核桿菌特異抗原刺激后分泌干擾素而設計的T細胞免疫斑點試驗。

液體變色培養基：德國MBRedox系統細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性4本室目前結核分枝桿菌檢測試劑情況分析細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。心界不大，心率86，心律規則，各瓣膜區無雜音，左肺可聞及干啰音。4結核分枝桿菌分子生物學診斷技術LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.AIDS患者極易合并結核分枝桿菌感染抵抗力強：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內可存活6～8個月，痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力。該菌細胞壁脂質含量較高，約占干重的60%原因分析：：①體檢不仔細或未拍攝X線胸片；LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性抵抗力強：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內可存活6～8個月，痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力。提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體，擁有數量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數量，放大了信號強度，提高了檢測的靈敏度抵抗力強：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內可存活6～8個月，痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力。心界不大，心率86，心律規則，各瓣膜區無雜音，左肺可聞及干啰音。結核抗體檢查，可供參考3結核病主要經呼吸道傳播3.4結核分枝桿菌分子生物學診斷技術巢式PCR：PCR-免疫層析法：多重PCR:定量PCR：新的PCR技術應用于檢測SSCP：單鏈構象多態性分析，SSCP用于結核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測PCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測GeneChips：檢測結核桿菌、菌種鑒定、研究耐藥基因以及基因組比較分析有靈敏快速、特異性高等特點。納米技術的應用HSAM：雜交信號放大方法利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNA

提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體，擁有數量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數量，放大了信號強度，提高了檢測的靈敏度

3.5上述方法應用比較染色檢測：是臨床診斷快速廉價易行的方法，但是陽性率太低。細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。免疫學方法：一種快速、簡單、有較好敏感性和特異性的結核病輔助診斷，但檢測敏感性和特異性有待提高，但新的免疫方法的應用帶來希望，但還需要大量的樣本認證。分子生物學方法:快速、有效、特異性和敏感性均較高。4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告1.檢測結核抗體2.采用是金標法3.應用過二種以上的金標試劑4.采用的原理相同，但針對的特異性抗體不相同5.試劑的準確度、敏感性及特異性還有較大的提升空間5病例分析一、男性患者，31歲。因反復咳嗽、咳痰、發熱、盜汗伴游走性關節疼痛及結節性紅斑1年，患者1年前因受涼后發熱、咳嗽、咯痰，在某院診為“上感”，經抗生素及對癥治療病情無緩解，咳嗽日漸加重，伴盜汗、乏力，踝、膝關節游走性紅、腫、熱痛及雙下肢結節性紅斑。曾就診于數家醫院均診斷為風濕性關節炎并發慢性支氣管炎。查體：T37.5℃，P86/分，BP14.7/9.3kPa。發育正常，貧血貌。心界不大，心率86，心律規則，各瓣膜區無雜音，左肺可聞及干啰音。雙膝、踝關節紅腫，以左踝為著，雙下肢可觸及數個蠶豆大小結節性紅斑。實驗室檢查：WBC6.4×109/L，N0.65，L0.33/L，Hb95g/L，ESR85mm/h。抗“O”450U，RF陰性，ECG正常，，彩色多譜勒超聲心動圖檢查未見異常。胸片兩肺文理增多，左踝關節X線攝片骨質未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。纖維支氣管鏡檢查左上葉支氣管粘膜充血水腫，有粗糙不平小顆粒，刷檢涂片見大量抗酸桿菌，活檢病理診斷為支氣管內膜結核。診斷：支氣管內膜結核，結核變態反應性關節炎。原因分析：：①體檢不仔細或未拍攝X線胸片；②只注意排除肺部結核而忽略了潛在的某些肺外結核或深部淋巴結結核；③將頸淋巴結結核誤診為口、咽部一般細菌感染所致的非特異性淋巴結炎；④未做結核菌素試驗。謝謝大家3結核分枝桿菌檢測方法及其應用3.1染色檢測結核分枝桿菌方法抗酸染色法：玻片法：濃集法：夾層杯法3.3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.5%結核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.9%純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.0%PPD抗原：敏感性83.6%結核蛋白芯片：ESAT-6、CFP10、LAM、38KD和16KD等②只注意排除肺部結核而忽略了潛在的某些肺外結核或深部淋巴結結核；3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體硫酸腦苷酯—能抑制溶酶體同吞噬體結合LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.結核菌分泌性蛋白抗原：敏感性70.PCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測TSPOTTB技術，QuantiFERON－TB3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體4本室目前結核分枝桿菌檢測試劑情況分析3結核分枝桿菌檢測方法及其應用1結核分枝桿菌感染現狀細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。BactecTB460、BactecMGIT960：20天免疫學方法：一種快速、簡單、有較好敏感性和特異性的結核病輔助診斷，但檢測敏感性和特異性有待提高，但新的免疫方法的應用帶來希望，但還需要大量的樣本認證。利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNAGeneChips：檢測結核桿菌、菌種鑒定、研究耐藥基因以及基因組比較分析有靈敏快速、特異性高等特點。噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體2結核分枝桿菌生物特性與致病性試劑的準確度、敏感性及特異性還有較大的提升空間3結核分枝桿菌檢測方法及其應用LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.羅-琴氏培養基：2周-5周才能長出菌落PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體4本室目前結核分枝桿菌檢測試劑情況分析4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告流行病學，臨床表現，體征，胸部影像學抗“O”450U，RF陰性，ECG正常，，彩色多譜勒超聲心動圖檢查未見異常。LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體2結核分枝桿菌生物特性與致病性噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性雙膝、踝關節紅腫，以左踝為著，雙下肢可觸及數個蠶豆大小結節性紅斑。結核抗體檢查，可供參考胸片兩肺文理增多，左踝關節X線攝片骨質未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫新的PCR技術應用于檢測提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體，擁有數量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數量，放大了信號強度，提高了檢測的靈敏度細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫2結核分枝桿菌生物特性、致病性及臨床診斷LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.硫酸腦苷酯—能抑制溶酶體同吞噬體結合羅-琴氏培養基：2周-5周才能長出菌落蛋白質—可激發機體產生超敏反應LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.純化BCG(卡介苗)蛋白：敏感性80.采用的原理相同，但針對的特異性抗體不相同胸片兩肺文理增多，左踝關節X線攝片骨質未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.TSPOTTB技術，QuantiFERON－TB1結核分枝桿菌感染現狀采用的原理相同，但針對的特異性抗體不相同AIDS患者極易合并結核分枝桿菌感染結核抗體檢查，可供參考曾就診于數家醫院均診斷為風濕性關節炎并發慢性支氣管炎。抵抗力強：塵埃上保持傳染性8～10d，在干燥痰內可存活6～8個月，痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力。噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性1結核分枝桿菌感染現狀實驗室檢查：WBC6.4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告應用過二種以上的金標試劑因反復咳嗽、咳痰、發熱、盜汗伴游走性關節疼痛及結節性紅斑1年，患者1年前因受涼后發熱、咳嗽、咯痰，在某院診為“上感”，經抗生素及對癥治療病情無緩解，咳嗽日漸加重，伴盜汗、乏力，踝、膝關節游走性紅、腫、熱痛及雙下肢結節性紅斑。3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體胸片兩肺文理增多，左踝關節X線攝片骨質未見異常痰涂片查抗酸桿菌3次陰性。結核抗體檢查，可供參考1結核分枝桿菌感染現狀1染色檢測結核分枝桿菌方法1結核分枝桿菌感染現狀4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告PCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測曾就診于數家醫院均診斷為風濕性關節炎并發慢性支氣管炎。結核抗體檢查，可供參考提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體，擁有數量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數量，放大了信號強度，提高了檢測的靈敏度1染色檢測結核分枝桿菌方法PPD抗原：敏感性83.4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。抗“O”450U，RF陰性，ECG正常，，彩色多譜勒超聲心動圖檢查未見異常。試劑的準確度、敏感性及特異性還有較大的提升空間GeneChips：檢測結核桿菌、菌種鑒定、研究耐藥基因以及基因組比較分析有靈敏快速、特異性高等特點。3結核分枝桿菌檢測方法及其應用PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體羅-琴氏培養基：2周-5周才能長出菌落該菌細胞壁脂質含量較高，約占干重的60%4免疫室目前結核分枝桿菌檢測試劑應用情況報告曾就診于數家醫院均診斷為風濕性關節炎并發慢性支氣管炎。原因分析：：①體檢不仔細或未拍攝X線胸片；3免疫學方法檢測結核分枝桿菌抗體磷脂—能促進單核細胞增生，并使巨噬細胞轉變為類上皮細胞，從而形成肉芽腫因反復咳嗽、咳痰、發熱、盜汗伴游走性關節疼痛及結節性紅斑1年，患者1年前因受涼后發熱、咳嗽、咯痰，在某院診為“上感”，經抗生素及對癥治療病情無緩解，咳嗽日漸加重，伴盜汗、乏力，踝、膝關節游走性紅、腫、熱痛及雙下肢結節性紅斑。TSPOTTB技術，QuantiFERON－TBPCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測利用Dynal磁珠雜交分離靶基因省去了DNASSCP：單鏈構象多態性分析，SSCP用于結核桿菌基因的突變和耐藥性的快速檢測PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.2結核分枝桿菌生物特性、致病性及臨床診斷一、男性患者，31歲。利用結核桿菌感染者外周血單核細胞中存在結核特異的活化T淋巴細胞,這些淋巴細胞在受到結核桿菌特異抗原刺激后分泌干擾素而設計的T細胞免疫斑點試驗。PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗利用結核桿菌感染者外周血單核細胞中存在結核特異的活化T淋巴細胞,這些淋巴細胞在受到結核桿菌特異抗原刺激后分泌干擾素而設計的T細胞免疫斑點試驗。蠟質D—可激發機體產生遲發超敏反應提取步驟，組裝的納米顆粒作為報告信號的結合載體，擁有數量巨大的親和素位點，增加了報告信號(Biotin-FITC)數量，放大了信號強度，提高了檢測的靈敏度3結核分枝桿菌檢測方法及其應用3結核分枝桿菌檢測方法及其應用一、男性患者，31歲。心界不大，心率86，心律規則，各瓣膜區無雜音，左肺可聞及干啰音。1結核分枝桿菌感染現狀噬菌體裂解試驗：噬菌體D29對緩慢生長的結核分枝桿菌有親噬性應用過二種以上的金標試劑PCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測PCR-RFLP技術：PCR和限制性內切酶相結合的技術，于鑒定分枝桿菌菌種，基因突變和耐藥性檢測細菌培養：結核菌感染的診斷金標準，速度太慢，陽性率仍然較低。PPD抗原：敏感性83.變異性：可發生形態、菌落、毒力、免疫原性4結核分枝桿菌分子生物學診斷技術PPD試驗：結核菌素蛋白衍生物皮膚試驗LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)抗原：敏感74.結核抗體