1/24一、前言.............................................................................................................................................................3二、適用范圍...................................................................................................................................................3三、一般考慮...................................................................................................................................................3(一)生物學(xué)活性...........................................................................................................................................4(二)定向分化和非預(yù)期生物學(xué)效應(yīng)....................................................................................................4(三)成瘤性和致瘤性..................................................................................................................................5(四)多能干細(xì)胞殘留.................................................................................................................................5(五)遺傳和表觀遺傳學(xué)研究...................................................................................................................5(六)基因修飾細(xì)胞的研究........................................................................................................................5(七)其他應(yīng)關(guān)注的共性問(wèn)題...................................................................................................................6四、生產(chǎn)用物料..............................................................................................................................................7(一)原材料.....................................................................................................................................................7(二)輔料......................................................................................................................................................21(三)接觸性耗材、容器和藥械組合.................................................................................................12五、生產(chǎn)工藝.................................................................................................................................................12(一)工藝開(kāi)發(fā)..............................................................................................................................................12(二)工藝變更..............................................................................................................................................15(三)工藝驗(yàn)證..............................................................................................................................................16六、質(zhì)量研究與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).........................................................................................................................16(一)質(zhì)量研究..............................................................................................................................................17(二)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)..............................................................................................................................................20七、穩(wěn)定性研究............................................................................................................................................21八、包裝及密封容器系統(tǒng).........................................................................................................................22九、名詞解釋.................................................................................................................................................22十、參考文獻(xiàn).................................................................................................................................................232/242017年，原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》，對(duì)按照藥品管理相關(guān)法律法規(guī)進(jìn)行研發(fā)的細(xì)胞治療產(chǎn)品的技術(shù)要求進(jìn)行了總體闡述。隨著干細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展、認(rèn)知的深入和經(jīng)驗(yàn)的積累，相關(guān)產(chǎn)品的技術(shù)要求亦隨之逐步修訂和完善。為進(jìn)一步規(guī)范和指導(dǎo)干細(xì)胞產(chǎn)品的藥學(xué)研發(fā)和申報(bào)，促進(jìn)干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)發(fā)展，制定本技術(shù)指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是基于現(xiàn)有認(rèn)識(shí)，對(duì)按照藥品進(jìn)行研發(fā)的干細(xì)胞產(chǎn)品藥學(xué)研究的技術(shù)問(wèn)題提供建議。此外，申請(qǐng)人/持有人亦可根據(jù)干細(xì)胞產(chǎn)品研發(fā)的實(shí)際情況，在符合藥物研發(fā)的規(guī)律并提供科學(xué)合理的依據(jù)的前提下，采用其他有效的方法和手段。本指導(dǎo)原則主要為按照藥品管理相關(guān)法規(guī)進(jìn)行研發(fā)和注冊(cè)申報(bào)的人源干細(xì)胞產(chǎn)品的上市申請(qǐng)階段的藥學(xué)研究提供技術(shù)指導(dǎo)。本指導(dǎo)原則中的“人源干細(xì)胞產(chǎn)品”是指起源于人的成體(干)細(xì)胞(adultstemcells，ASCsoradultcells)、人胚干細(xì)胞(embryonicstemcells,ESCs)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(inducedpluripotentstemcells，iPSCs)，經(jīng)過(guò)一系列涉及干細(xì)胞的體外操作，一般包括擴(kuò)增、基因修飾、誘導(dǎo)分化、轉(zhuǎn)(分)化等，獲得的干細(xì)胞及其衍生細(xì)胞，加入制劑輔料，分裝至特定容器，并符合特定藥品放行標(biāo)準(zhǔn)，可直接應(yīng)用,也可與組織工程材料組合應(yīng)用于臨床的治療產(chǎn)品。其中，由于涉及人類細(xì)胞，生產(chǎn)用細(xì)胞需符合國(guó)家倫理方面的相關(guān)規(guī)定。由于人源干細(xì)胞產(chǎn)品可能涉及多方面的技術(shù)要求，在參考本指導(dǎo)原則的同時(shí)，也可同時(shí)參考其他藥品、細(xì)胞治療、基因治療等方面的相關(guān)指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則不涉及生殖細(xì)胞、造血干細(xì)胞移植等產(chǎn)品。干細(xì)胞具備自我更新和多向分化潛能。干細(xì)胞產(chǎn)品的細(xì)胞類型多樣，產(chǎn)品細(xì)胞本身具備體內(nèi)生存、增殖和/或分化、細(xì)胞間相互作用等能力。干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)流程一般包括供者材料的獲取、運(yùn)輸、接收，細(xì)胞系/庫(kù)建立與檢定，生產(chǎn)、檢驗(yàn)、放行、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)。在干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝設(shè)計(jì)與驗(yàn)證、質(zhì)量研3/24究和控制、穩(wěn)定性研究等研發(fā)過(guò)程中，應(yīng)對(duì)以上各個(gè)環(huán)節(jié)的干細(xì)胞特性進(jìn)行充分考慮。干細(xì)胞產(chǎn)品應(yīng)遵循藥物研發(fā)的一般規(guī)律。臨床試驗(yàn)申請(qǐng)階段需滿足安全性的要求，樣品的制備應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范-臨床試驗(yàn)用藥品附錄》的要求；臨床試驗(yàn)期間繼續(xù)完善生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量等相關(guān)研究；申請(qǐng)上市時(shí)提供支持產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的完整的研究數(shù)據(jù)。干細(xì)胞產(chǎn)品的生物學(xué)活性是產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，涉及產(chǎn)品質(zhì)量、效能、批次間質(zhì)量一致性、可比性研究和穩(wěn)定性等方面的評(píng)價(jià)，對(duì)其研究需貫穿于臨床前、早期臨床、關(guān)鍵性臨床和上市及上市后研究的整個(gè)生命周期。對(duì)于不同來(lái)源的各類產(chǎn)品的生物學(xué)活性研究，應(yīng)根據(jù)各類干細(xì)胞產(chǎn)品的特點(diǎn),具體情況具體分析。比如，應(yīng)考慮：特異性標(biāo)志物在不斷發(fā)現(xiàn)和更新；工藝中適用于大規(guī)模生產(chǎn)的篩選和鑒定方法在不斷探索，變得日益高效和規(guī)范；產(chǎn)品批間的分化效率、均一性有待提高；功能性細(xì)胞的驗(yàn)證策略不盡相同，以致相應(yīng)的產(chǎn)品放行驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)缺乏可靠依據(jù)等。在設(shè)定產(chǎn)品生物學(xué)活性標(biāo)準(zhǔn)的過(guò)程中，應(yīng)對(duì)產(chǎn)品屬性進(jìn)行廣泛研究，收集足夠的產(chǎn)品表征數(shù)據(jù)(即分子、生化、免疫學(xué)、表型、物理和生物學(xué)特性等)，同時(shí)追蹤科研進(jìn)展和臨床發(fā)現(xiàn)，積極努力探索哪些產(chǎn)品屬性與效能最相關(guān)，確保符合確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或驗(yàn)收限度產(chǎn)品批次均可為患者接受，保證產(chǎn)品的安全有效性。在體外采用定向分化策略進(jìn)行干細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)時(shí)，誘導(dǎo)或抑制材料及其劑量、添加順序、維持時(shí)間及終點(diǎn)殘留量等都會(huì)顯著影響分化效率，并帶來(lái)質(zhì)量和安全性風(fēng)險(xiǎn)，尤其是誘導(dǎo)分化過(guò)程中非目的細(xì)胞等雜質(zhì)引起的風(fēng)險(xiǎn)，細(xì)胞在加工后發(fā)生非預(yù)期變化的風(fēng)險(xiǎn)，以及同時(shí)受遷移至體內(nèi)局部微環(huán)境影響導(dǎo)致的非預(yù)期生物學(xué)效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)等。因此，在干細(xì)胞產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)重視關(guān)注產(chǎn)品的分化階段的監(jiān)測(cè)，如胚層的基因標(biāo)志物，基因編輯造血干細(xì)胞中的干性維持的標(biāo)志物等，確定合理的標(biāo)志物檢測(cè)體系，保證終產(chǎn)品的定向分化，預(yù)防控制由于非定向分化而產(chǎn)生的非預(yù)期生物學(xué)效應(yīng)。4/24干細(xì)胞產(chǎn)品可能具有較高的成瘤性和致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素比如：(1)干細(xì)胞復(fù)雜的制備工藝、長(zhǎng)時(shí)間的細(xì)胞傳代和離體操作；(2)干細(xì)胞產(chǎn)品中可能殘留未分化細(xì)胞、非預(yù)期分化細(xì)胞、惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞、突變；細(xì)(3)胞培養(yǎng)過(guò)程中的遺傳和表觀遺傳變異/不穩(wěn)定性；基(4)因修飾可能引入的高風(fēng)險(xiǎn)基因元件以及基因/病毒載體插入所導(dǎo)致的致癌基因活化或抑癌基因失活等。為了控制上述風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)進(jìn)行評(píng)估和控制干細(xì)胞產(chǎn)品的成瘤性、致瘤性。ESCs/iPSCs衍生細(xì)胞治療產(chǎn)品可能因少量殘留的多能干細(xì)胞以及持續(xù)增殖的分化子代細(xì)胞，導(dǎo)致出現(xiàn)畸胎瘤、其他錯(cuò)誤模式腫瘤或癌前病變等風(fēng)險(xiǎn)。這些風(fēng)險(xiǎn)建議通過(guò)ESCs/iPSCs細(xì)胞系選擇、高效定向分化、嚴(yán)格純化等方式，并著力開(kāi)發(fā)檢測(cè)最終產(chǎn)品中未分化多能干細(xì)胞污染的敏感檢測(cè)方法(特別是在提供局部高密度大劑量細(xì)胞時(shí))，進(jìn)行有效控制。鼓勵(lì)通過(guò)核型分析、全基因組和表觀遺傳組水平的綜合分析及風(fēng)險(xiǎn)分析，評(píng)估腫瘤發(fā)生的潛在可能。對(duì)于經(jīng)過(guò)體外復(fù)雜操作的干細(xì)胞產(chǎn)品，以及多能干細(xì)胞衍生產(chǎn)品，建議結(jié)合細(xì)胞特性，在合適階段對(duì)過(guò)程樣品或終產(chǎn)品進(jìn)行遺傳和表觀遺傳的穩(wěn)定性評(píng)估(如基因突變分析、去乙酰化檢測(cè)等)。適用于干細(xì)胞產(chǎn)品的遺傳和表觀遺傳學(xué)評(píng)估的分析方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)正在發(fā)展，可對(duì)任何這類檢測(cè)的局限性進(jìn)行評(píng)估，并與任何特定病例的風(fēng)險(xiǎn)/利益和患者人數(shù)進(jìn)行權(quán)衡。某些情況下，干細(xì)胞產(chǎn)品的基因組突變以及遺傳病有關(guān)的基因突變等風(fēng)險(xiǎn)可通過(guò)測(cè)序方法輔助分析和控制。基因修飾工藝開(kāi)發(fā)應(yīng)明確基因修飾方法、元件設(shè)計(jì)和操作條件，充分研究后明確基因物質(zhì)的轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染方式和效率。對(duì)目的基因在基因組的整合情況/整合特征(插入位點(diǎn)、插入拷貝數(shù)、優(yōu)勢(shì)克隆異常生長(zhǎng)等)、目的基因表達(dá)產(chǎn)物的功能進(jìn)行評(píng)估。應(yīng)充分研究基因編輯的靶向性、基因物質(zhì)在目標(biāo)細(xì)胞群中的表達(dá)效率。應(yīng)對(duì)修飾細(xì)胞的染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性、基因組穩(wěn)定性、目的基因的遺傳和表達(dá)穩(wěn)定性、脫靶編輯、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染用載體的殘留量以及病毒復(fù)制能力回復(fù)突變等進(jìn)行深5/24入分析研究。還需考慮基因修飾的其他影響，如對(duì)細(xì)胞活性、干性、表型、功能、特性、工藝相關(guān)雜質(zhì)和非目的細(xì)胞群變化等。干細(xì)胞產(chǎn)品具備其他細(xì)胞治療產(chǎn)品相關(guān)的共性質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)因素，比如：不(1)同供者、同一供者不同組織來(lái)源的細(xì)胞具有較大的差異性，以及供者年齡、健康情況、組織來(lái)源與目標(biāo)治療組織的細(xì)胞譜系差異等，均有可能對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有較大影響。(2)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可能不得不添加人源/動(dòng)物源材料，操作過(guò)程中可能引入的外源因子，均存在污染和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于異體產(chǎn)品，更需關(guān)注外源因子引入或傳播的風(fēng)險(xiǎn)。自(3)體產(chǎn)品批量有限，檢測(cè)材料不足。對(duì)(4)于非凍存的新鮮制劑，產(chǎn)品有效期短。產(chǎn)(5)品批次數(shù)據(jù)積累有限，關(guān)鍵工藝參數(shù)(CPP)和關(guān)鍵質(zhì)量屬性CQA()認(rèn)知有限。(6)產(chǎn)品可能發(fā)生多輪工藝變更，產(chǎn)品質(zhì)量無(wú)法完全精確表征等。針對(duì)上述的風(fēng)險(xiǎn)因素，控制策略應(yīng)該考慮以下方面：生產(chǎn)環(huán)境方面，建立清場(chǎng)和隔離操作規(guī)范，并盡量采用連續(xù)、密閉式設(shè)備、設(shè)施，減少生產(chǎn)過(guò)程中的環(huán)境暴露環(huán)節(jié)。原材料方面，持續(xù)進(jìn)行供者材料和細(xì)胞庫(kù)的資格鑒定及適用性評(píng)估，進(jìn)行科學(xué)合理的供者篩選，并關(guān)注替代細(xì)胞庫(kù)的再生產(chǎn)，做好細(xì)胞庫(kù)和工藝中間品的穩(wěn)定性研究。對(duì)其他原材料供應(yīng)商進(jìn)行評(píng)估、審核，對(duì)不得不用的人源/動(dòng)物源原材料嚴(yán)格質(zhì)控。生產(chǎn)工藝和過(guò)程控制方面，建立完善的可追溯系統(tǒng)，同時(shí)關(guān)注生產(chǎn)過(guò)程中的細(xì)胞鑒別檢測(cè)，做好上下游材料批號(hào)和標(biāo)識(shí)管理，防止混淆和差錯(cuò)。加強(qiáng)對(duì)細(xì)胞庫(kù)和未處理收獲液的分析檢測(cè)，在生產(chǎn)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，對(duì)樣品的有關(guān)檢項(xiàng)，如無(wú)菌、內(nèi)毒素、支原體、內(nèi)外源病毒等均應(yīng)符合要求。明確合理的過(guò)程控制指標(biāo)和廢棄指標(biāo)，對(duì)工藝中間品進(jìn)行檢定或質(zhì)量監(jiān)測(cè)。質(zhì)量研究和質(zhì)量控制方面，質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念quality(bydesign)同樣適用于干細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)盡早開(kāi)展產(chǎn)品和工藝的表征，以及分析檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行全面的質(zhì)量特性分析和數(shù)據(jù)收集，加強(qiáng)對(duì)產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性的合理判6/24斷，并結(jié)合適用可靠的分析方法制定全面有效的質(zhì)量控制策略，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定一致。由于這類產(chǎn)品往往難以精確表征，可通過(guò)加強(qiáng)原材料控制、過(guò)程控制和工藝中間品的檢測(cè)來(lái)補(bǔ)充放行檢測(cè)。在一些情況下，可以采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的快速、微量的新型放行檢測(cè)方法輔助傳統(tǒng)檢測(cè)方法。進(jìn)行規(guī)范的生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)、轉(zhuǎn)移與驗(yàn)證。在開(kāi)發(fā)過(guò)程中甚至上市后，常常發(fā)生原材料和工藝的變更，在前期有關(guān)工藝與質(zhì)量的關(guān)系的知識(shí)積累基礎(chǔ)上，了解原材料和工藝的變更可能對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，應(yīng)針對(duì)變更開(kāi)展系統(tǒng)的可比性研究，結(jié)合產(chǎn)品和工藝特點(diǎn)持續(xù)進(jìn)行質(zhì)量特性研究，充分表征細(xì)胞形態(tài)、活性、遺傳穩(wěn)定性、成瘤性/致瘤性、細(xì)胞表型特征(包括預(yù)期和非預(yù)期細(xì)胞群等)和生物學(xué)活性等，尤其關(guān)注影響產(chǎn)品質(zhì)量的干細(xì)胞特性檢測(cè)如(適用。)穩(wěn)定性方面，采用代表性批次和樣品開(kāi)展研究，穩(wěn)定性研究中設(shè)置敏感的指標(biāo)，如細(xì)胞活率和生物學(xué)活性。積累多批次數(shù)據(jù)，了解產(chǎn)品質(zhì)量的變化趨勢(shì)，為產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)和效期的制定，以及可比性評(píng)價(jià)等提供依據(jù)。生產(chǎn)用物料包括生產(chǎn)過(guò)程中使用的所有原材料、輔料、耗材等，其來(lái)源和質(zhì)量應(yīng)當(dāng)清晰可靠。來(lái)自生產(chǎn)用物料的外源因子引入或傳播的風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)該進(jìn)行最大限度地控制。應(yīng)對(duì)物料供應(yīng)商及合同生產(chǎn)商進(jìn)行評(píng)估、審核，分清責(zé)任主體，確保物料質(zhì)量。原材料包括起始原材料(生產(chǎn)用細(xì)胞、生產(chǎn)輔助細(xì)胞、體外基因修飾系統(tǒng)等)和其他原材料(如培養(yǎng)基和細(xì)胞因子)。原材料的質(zhì)量直接關(guān)系到終產(chǎn)品的質(zhì)量，在基于科學(xué)和基于風(fēng)險(xiǎn)的原則下進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和質(zhì)量控制，應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制”和“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”的要求。7/24生產(chǎn)用細(xì)胞可能直接來(lái)源于供者(自體或同種異體)，也可能來(lái)源于細(xì)胞庫(kù)，其來(lái)源應(yīng)當(dāng)穩(wěn)定，且質(zhì)量一致。生產(chǎn)用細(xì)胞的來(lái)源和相關(guān)操作應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)和倫理的要求，應(yīng)取得相關(guān)方的知情同意，建立“知情與保密”管理體系。供者篩查是干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)控制的重要手段。建立合理的供者篩查程序和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)防范病毒污染、組織排異、相關(guān)疾病等風(fēng)險(xiǎn)十分必要。篩查時(shí)應(yīng)盡量收集供者的相關(guān)特征，包括但不限于一般信息(如年齡、性別、血型、健康情況、生活習(xí)慣)、既往病史和家族史(尤其關(guān)注傳染病和遺傳病)、用藥史和輻射暴露等。供者篩查還需區(qū)別自體供者和同種異體供者的風(fēng)險(xiǎn)差異，進(jìn)行不同的考慮和要求。供者的病原微生物感染篩查方面，尤其對(duì)于同種異體供者，可參考采供血的相關(guān)要求，如篩查供者是否存在HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋體等感染。實(shí)際研發(fā)應(yīng)用中，還應(yīng)根據(jù)供者細(xì)胞類型、供者健康/疾病史或區(qū)域流行病區(qū)旅居、細(xì)胞/組織特異性的易感病原體等具體情況適當(dāng)增加相應(yīng)的篩查項(xiàng)目，并列入驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。比如，對(duì)于富含白細(xì)胞的活細(xì)胞和組織的供者，建議篩查HTLV-1和HTLV-2、CMV等。對(duì)于自體供者，可根據(jù)來(lái)源的組織或器官、干細(xì)胞產(chǎn)品的特性以及臨床適應(yīng)癥等，適當(dāng)調(diào)整篩查項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)確定生產(chǎn)過(guò)程等是否會(huì)增加供者成為傳染源的病原體傳播風(fēng)險(xiǎn)，并說(shuō)明采取的預(yù)防措施(為防止病毒或其他外源性因子傳播給自體受者以外的其他人)。為了保證病原體篩查結(jié)果的可靠性，供者篩查應(yīng)盡可能采用監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的血源篩查試劑盒檢測(cè)病原體；對(duì)于無(wú)血源篩查試劑情況下，可采用已批準(zhǔn)的體外診斷試劑，檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過(guò)適用性確認(rèn)，關(guān)注檢測(cè)方法靈敏度對(duì)病原微生物的檢出能力；如無(wú)批準(zhǔn)的檢測(cè)方法或產(chǎn)品，可以采用經(jīng)過(guò)全面方法學(xué)驗(yàn)證的自建方法。制備通用型干細(xì)胞產(chǎn)品時(shí)，必須考慮窗口期對(duì)供者病原微生物感染的篩查的影響。8/24組織排異方面的風(fēng)險(xiǎn)，可參考輸血和器官移植供者的相關(guān)要求，比如收集供者的ABO血型、Rh血型、HLA-I類和II類分型信息等。建議根據(jù)產(chǎn)品類型和臨床應(yīng)用要求等考慮供者與受者的組織配型問(wèn)題。存在組織排異風(fēng)險(xiǎn)、免疫原性高的情況下，應(yīng)臨床檢測(cè)組織配型相容性。對(duì)于非國(guó)標(biāo)方法，需應(yīng)提供檢測(cè)方法和依據(jù)。建議結(jié)合先進(jìn)的分析檢測(cè)技術(shù)充分評(píng)估受者被引入疾病的潛在風(fēng)險(xiǎn)，如對(duì)異體供者進(jìn)行致病基因方面的檢測(cè)。為了開(kāi)發(fā)細(xì)胞庫(kù)來(lái)源的干細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)延伸對(duì)該細(xì)胞庫(kù)的供者進(jìn)行篩查，比如臍帶干細(xì)胞供者的檢測(cè)對(duì)象建議擴(kuò)展到包括適當(dāng)時(shí)間間隔內(nèi)的母親外周血和組織采集當(dāng)天胎兒的臍帶血等。供者組織的獲取需遵循與人體組織獲取相關(guān)的規(guī)范指南，還要做好常規(guī)防護(hù)措施，以盡量防范和降低內(nèi)外源因子引入或傳播的風(fēng)險(xiǎn)。供者組織獲取、儲(chǔ)存、運(yùn)輸和入廠檢驗(yàn)等步驟應(yīng)經(jīng)過(guò)充分研究，制定完善的追溯系統(tǒng)，明確標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和關(guān)鍵質(zhì)量控制參數(shù)，并完成必要的驗(yàn)證。供者組織入廠時(shí)，根據(jù)工藝要求、產(chǎn)品特點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行組織類型、數(shù)量、微生物等方面的檢測(cè)或確認(rèn)。供者組織中細(xì)胞的分離工藝可能對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量有影響。研究分離工藝時(shí)，建議采用具有代表性的供者來(lái)源組織，處理過(guò)程中關(guān)注細(xì)胞鑒別、活率及生長(zhǎng)活性、外源致病微生物和干細(xì)胞特性檢測(cè)(如細(xì)胞表面標(biāo)志物群、表達(dá)產(chǎn)物和分化潛能等)等關(guān)鍵質(zhì)量特性。供者組織分離獲得的原代細(xì)胞和直接采集到的供者細(xì)胞入廠時(shí)，或經(jīng)過(guò)初步擴(kuò)增后，根據(jù)工藝要求、產(chǎn)品特點(diǎn)，應(yīng)對(duì)細(xì)胞類型、數(shù)量、表型、活力、微生物、誘導(dǎo)分化潛能等方面進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)，如細(xì)胞類型可通過(guò)相關(guān)的生物標(biāo)志物蛋(白、基因)進(jìn)行鑒定和確認(rèn)。標(biāo)志物陽(yáng)性或(陰性)的細(xì)胞比例可以作為預(yù)期細(xì)胞群或非目的細(xì)胞群指標(biāo)評(píng)估的依據(jù)。為了保證產(chǎn)品批間一致性和穩(wěn)定性，建議生產(chǎn)過(guò)程中盡量建庫(kù)生產(chǎn)。建議參考ICH《Q5D：用于生物技術(shù)產(chǎn)品及生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)的來(lái)源和鑒定》、9/24中國(guó)藥典《生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程》，并結(jié)合細(xì)胞特性和生產(chǎn)需求，對(duì)適合的生產(chǎn)用細(xì)胞和細(xì)胞種子Cell(Seed)進(jìn)行建系、建庫(kù)和檢定等。對(duì)于人胚干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，尤其是基因修飾多能干細(xì)胞應(yīng)篩選建立單克隆細(xì)胞株，并建立細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞建庫(kù)應(yīng)在符合現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的條件下制備。商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的建庫(kù)頻率依據(jù)產(chǎn)品自身特性和批產(chǎn)量等確定。對(duì)于需要從多個(gè)供者取材建庫(kù)的情形，如臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)品，為了保證細(xì)胞庫(kù)內(nèi)和細(xì)胞庫(kù)間的質(zhì)量均一性，應(yīng)特別關(guān)注供者材料的質(zhì)量一致性。對(duì)于需在多能干細(xì)胞階段建庫(kù)的情形，如異體ESCs/iPSCs來(lái)源干細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)對(duì)細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行全面的檢定。ESCs/iPSCs細(xì)胞庫(kù)檢定內(nèi)容一般包括細(xì)胞形態(tài)、鑒別、活性、標(biāo)志物，細(xì)胞干性/多能性如(多能性基因OCT4、SOX2、NANOG等檢測(cè)，三胚層方向的分化標(biāo)志物檢測(cè)、畸胎瘤試驗(yàn))、分化潛能，微生物學(xué)安全性、雜質(zhì)殘留、遺傳穩(wěn)定性(染色體穩(wěn)定性如核型或數(shù)字核型分析、全基因組測(cè)序、全外顯子測(cè)序)和表觀遺傳學(xué)研究等。對(duì)于基因修飾多能干細(xì)胞單克隆庫(kù)的情形，需結(jié)合全基因組測(cè)序等方法進(jìn)行細(xì)胞庫(kù)基因組穩(wěn)定性評(píng)估，并對(duì)細(xì)胞庫(kù)進(jìn)行修飾基因的功能的驗(yàn)證和安全性分析。除基因物質(zhì)的轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染方式和效率研究不適用外，其他相關(guān)要求可適當(dāng)參考“三、一般考慮”章節(jié)中“(六)基因修飾細(xì)胞的研究”部分。對(duì)于不適合建庫(kù)生產(chǎn)的情形，如自體基因修飾造血干細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)提供充分的依據(jù)，說(shuō)明確保產(chǎn)品批間一致性的質(zhì)量控制策略。干細(xì)胞在傳代過(guò)程中可能不穩(wěn)定，產(chǎn)生異質(zhì)性細(xì)胞，且高代次干細(xì)胞可能具有安全性風(fēng)險(xiǎn)，因此無(wú)論是建庫(kù)干細(xì)胞還是非建庫(kù)干細(xì)胞，均須對(duì)傳代穩(wěn)定性進(jìn)行充分、規(guī)范的研究。建議以群體倍增水平PDL()定義細(xì)胞代次，或明確細(xì)胞傳代過(guò)程中的群體倍增時(shí)間PDT()以開(kāi)展研究。傳代穩(wěn)定性研究的條件應(yīng)能代表實(shí)際臨床/商業(yè)化生產(chǎn)工藝，重點(diǎn)關(guān)注遺傳穩(wěn)定性、成瘤/致瘤性、細(xì)胞干性、多能性、目的細(xì)胞分化能力等，并根據(jù)研究制定并明確體外生產(chǎn)限傳代次和臨床使用代次。傳代穩(wěn)定性的研究項(xiàng)目一般包括細(xì)胞形態(tài)、STR鑒別、活率、活細(xì)胞數(shù)、群體倍增時(shí)間、表型等生長(zhǎng)特性穩(wěn)定性，10/24也包括染色體核型和組學(xué)測(cè)序等遺傳穩(wěn)定性，還包括多能性基因表達(dá)、畸胎瘤形成、定向誘導(dǎo)分化等干性的穩(wěn)定性。生產(chǎn)過(guò)程中若使用輔助細(xì)胞(如病毒包裝細(xì)胞、飼養(yǎng)層細(xì)胞)，應(yīng)充分說(shuō)明其使用的必要性與合理性。輔助細(xì)胞應(yīng)符合來(lái)源清晰可追溯、安全性風(fēng)險(xiǎn)可控、建立細(xì)胞庫(kù)分級(jí)管理的基本原則。需對(duì)輔助細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)和建系/庫(kù)過(guò)程清楚溯源，對(duì)引入外源因子或免疫原性等的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析評(píng)估和檢測(cè)控制。輔助細(xì)胞的添加量和殘留量，應(yīng)進(jìn)行研究與驗(yàn)證，對(duì)于其中可能涉及細(xì)胞失活處理的工藝，如輻照或添加藥物等，需證明不會(huì)對(duì)產(chǎn)品造成安全性和功能方面的影響。輔助細(xì)胞可進(jìn)行建庫(kù)管理，并按藥典細(xì)胞庫(kù)檢驗(yàn)要求進(jìn)行全面檢驗(yàn)，建議特別關(guān)注對(duì)人源/動(dòng)物源病毒的檢驗(yàn)。應(yīng)結(jié)合輔助細(xì)胞的特性和功能等，考察不同代次的輔助細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞的穩(wěn)定性。對(duì)于直接經(jīng)體外基因修飾獲得的干細(xì)胞產(chǎn)品，或者經(jīng)重編程技術(shù)獲得誘導(dǎo)多能干細(xì)胞利(用人成體細(xì)胞起始，通過(guò)外源基因表達(dá)、化合物誘導(dǎo)、表觀遺傳修飾等途徑來(lái)獲得人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞)后再衍生所得的干細(xì)胞產(chǎn)品，其上游生產(chǎn)多涉及體外基因修飾系統(tǒng)，基因修飾系統(tǒng)含(病毒包裝細(xì)胞)的設(shè)計(jì)、制備和質(zhì)量控制等藥學(xué)專業(yè)技術(shù)要求可參考《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》。需充分考慮原材料使用的科學(xué)性和安全性，以及大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)的持續(xù)可及性。生產(chǎn)中使用的原材料應(yīng)有明確的來(lái)源、組成、用途、用量和質(zhì)量控制等，具備原材料來(lái)源證明、檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)、包裝說(shuō)明書(shū)、TSE/BSE風(fēng)險(xiǎn)分析等文件。建議優(yōu)先選擇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別高、風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)低的原材料，若生產(chǎn)中使用研究級(jí)試劑(如培養(yǎng)基、細(xì)胞因子、化學(xué)小分子等)，為了確保產(chǎn)品一致性和純度，應(yīng)盡可能按照GMP要求生產(chǎn)。如果對(duì)未按照GMP生產(chǎn)的試劑是否具備足夠高的質(zhì)量應(yīng)用于人體存在疑問(wèn)，應(yīng)有足夠的研究資料去除這種疑問(wèn)。細(xì)胞制備過(guò)程中不得使用青霉素等β-內(nèi)酰胺類抗生素。對(duì)于可能影響產(chǎn)品安全性的原材料，若經(jīng)評(píng)估對(duì)產(chǎn)品安全性11/24無(wú)影響，需在最終產(chǎn)品或生產(chǎn)的合適階段對(duì)殘留進(jìn)行評(píng)估和控制，并結(jié)合臨床使用劑量確定需要控制的殘留限度。有些高風(fēng)險(xiǎn)原材料可能需要單獨(dú)開(kāi)展動(dòng)物體內(nèi)的安全性評(píng)估。輔料相關(guān)要求請(qǐng)見(jiàn)“五、生產(chǎn)工藝”章節(jié)中“一()工藝開(kāi)發(fā)2.2輔料”部分。接觸性耗材、容器是指生產(chǎn)過(guò)程中與工藝中間品直接接觸的耗材和容器(一次性管路、細(xì)胞工廠、生物反應(yīng)袋、濾器等)。需結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)開(kāi)展適用性和生物安全性評(píng)估，并進(jìn)行相關(guān)研究。藥械組合產(chǎn)品需關(guān)注各組件與樣品的相互作用和風(fēng)險(xiǎn)，以及組件對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品功能的影響。干細(xì)胞產(chǎn)品類型多樣，不同細(xì)胞類型，其制備工藝的內(nèi)容和流程也有所不同。應(yīng)盡量遵循藥品生產(chǎn)工藝的一般規(guī)律，應(yīng)用質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念，關(guān)注對(duì)生產(chǎn)工藝與產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)系的研究，加強(qiáng)對(duì)雜質(zhì)去除的研究與驗(yàn)證，建立穩(wěn)健可靠的生產(chǎn)工藝。干細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)工藝一般包括上游的原液工藝和下游的制劑工藝。工藝流程一般包括細(xì)胞的獲取、復(fù)蘇、傳代或擴(kuò)增、激活或預(yù)處理、基因修飾、誘導(dǎo)分化、純化、收獲、灌裝、凍存、運(yùn)輸?shù)榷鄠€(gè)工藝步驟。原液和制劑的界限有的時(shí)候可能并不清晰，需要根據(jù)產(chǎn)品情況適當(dāng)劃分。通過(guò)工藝開(kāi)發(fā)和工藝表征，逐步明確生產(chǎn)工藝步驟、工藝參數(shù)及其限定范圍尤(其是關(guān)鍵工藝參數(shù)CPP和主要工藝參數(shù)KPP)、生產(chǎn)過(guò)程控制、可接受標(biāo)準(zhǔn)和廢棄標(biāo)準(zhǔn)等，明確生產(chǎn)規(guī)模和批次、批量的定義，關(guān)注上下游工藝規(guī)模的匹配性，保證工藝相對(duì)穩(wěn)定可靠。原則上按藥品開(kāi)發(fā)的人源干細(xì)胞產(chǎn)品不建議進(jìn)行合批。若采用縮小模型用于工藝研究，應(yīng)對(duì)縮小模型的代表性進(jìn)行確認(rèn)。12/24原液工藝開(kāi)發(fā)的重點(diǎn)可能在于細(xì)胞培養(yǎng)工藝、誘導(dǎo)分化工藝、基因修飾和其他工藝，以及純化工藝。生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)應(yīng)能避免細(xì)胞發(fā)生非預(yù)期或異常的變化，并能滿足去除相關(guān)雜質(zhì)和具備相應(yīng)功能的要求。干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量特性一般在細(xì)胞培養(yǎng)階段形成，長(zhǎng)期培養(yǎng)會(huì)面臨一定的風(fēng)險(xiǎn)，比如：(1)體外培養(yǎng)細(xì)胞存在被病原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。(2)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間傳代可能會(huì)導(dǎo)致突變累積、基因組和表觀遺傳不穩(wěn)定，從而改變細(xì)胞分化能力或功能，特別是因?yàn)樽儺惖募?xì)胞可能會(huì)在培養(yǎng)中存在生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)。因此,工藝開(kāi)發(fā)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格選擇合適的培養(yǎng)體系(培養(yǎng)基和添加因子)、培養(yǎng)方式，準(zhǔn)確控制培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)代次。比如，開(kāi)發(fā)非飼養(yǎng)層細(xì)胞擴(kuò)增工藝,采用懸浮培養(yǎng)、基于微載體的三維培養(yǎng)法用于大規(guī)模擴(kuò)增，以及采用有傳代穩(wěn)定性研究支持的傳代代次內(nèi)的干細(xì)胞制備終產(chǎn)品。通過(guò)誘導(dǎo)分化，細(xì)胞應(yīng)具備相應(yīng)的細(xì)胞生物學(xué)特征，以支持臨床擬應(yīng)用的功能。在定向誘導(dǎo)分化過(guò)程中，需結(jié)合干細(xì)胞的發(fā)育或分化進(jìn)程，引導(dǎo)或調(diào)控干細(xì)胞變?yōu)楣δ芗?xì)胞。為有效控制干細(xì)胞發(fā)生非目標(biāo)分化，需采用合理的分化誘導(dǎo)劑或適當(dāng)?shù)姆只种苿┨岣叨ㄏ蚍只省Ｉa(chǎn)工藝應(yīng)能對(duì)不同分化階段的細(xì)胞命運(yùn)進(jìn)行有效調(diào)控，控制終末細(xì)胞不再發(fā)生非預(yù)期的分化或轉(zhuǎn)分化。對(duì)各階段細(xì)胞群的組成、純度、干性、多能性、分化潛能、標(biāo)志物表達(dá)、生物學(xué)功能分(化能力和細(xì)胞因子分泌譜)等可選擇在合理的分化節(jié)點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。一些工藝策略，如基因修飾、細(xì)胞激活或預(yù)處理，可能有助于增強(qiáng)干細(xì)胞終產(chǎn)品的期望的生物學(xué)活性。其中，通過(guò)基因修飾啟動(dòng)或過(guò)表達(dá)特定治療活性蛋白，可增強(qiáng)特殊治療功能。細(xì)胞因子刺激、化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)、物理方式干預(yù)(如低氧處理)等，可提高免疫調(diào)控功能。采取這些工藝策略時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的細(xì)胞功能驗(yàn)證，并充分評(píng)估引入的安全性風(fēng)險(xiǎn)。13/24純化工藝的目的在于最大限度地提高純度，即提高具有特定表型的細(xì)胞與總細(xì)胞的比值，減少最終細(xì)胞產(chǎn)品中的非目的細(xì)胞和其他雜質(zhì)。應(yīng)對(duì)純化工藝進(jìn)行開(kāi)發(fā)研究和工藝表征，對(duì)各純化步驟和純化工藝參數(shù)的純化效率和收率進(jìn)行評(píng)估。由于非目的細(xì)胞成分復(fù)雜，其可能是來(lái)自不同或同一譜系的細(xì)胞，分化不完全的細(xì)胞，或不需要的細(xì)胞，如未分化的干細(xì)胞，純度分析時(shí)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)工藝中間品各組分的分析鑒定，盡可能完整地明確各成分的性質(zhì)，分析非目的細(xì)胞的特性。劑型的選擇需考慮產(chǎn)品的臨床應(yīng)用、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)姆€(wěn)定性和安全性等因素。處方的設(shè)計(jì)和篩選需與劑型相適應(yīng)，并能有效維持產(chǎn)品的活性和穩(wěn)定性。根據(jù)研究，確定最終制劑和使用方式，如確定是新鮮細(xì)胞還是凍存細(xì)胞，是游離細(xì)胞形式還是與基質(zhì)結(jié)合，是凍存細(xì)胞復(fù)蘇后直接給藥還是經(jīng)洗滌等工藝處理后再給予患者等。同時(shí)，還需明確處方組成，制劑規(guī)格、細(xì)胞濃度等。通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并經(jīng)充分的處方篩選研究和驗(yàn)證，證明選用輔料的科學(xué)性和安全性，并明確輔料的來(lái)源、質(zhì)量和用量。輔料的使用應(yīng)符合藥典要求。建議盡量選擇低風(fēng)險(xiǎn)的輔料，盡量選用藥用級(jí)輔料。當(dāng)使用新型輔料時(shí)應(yīng)參考相關(guān)指南開(kāi)展適當(dāng)?shù)姆桥R床安全性研究。制劑生產(chǎn)工藝需結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)、處方、劑型等研究確定，工藝開(kāi)發(fā)過(guò)程中，可應(yīng)用質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念，關(guān)注處方的配制方式、工藝操作時(shí)間、灌裝準(zhǔn)確度、無(wú)菌條件控制等。如制劑需要凍存，應(yīng)開(kāi)展制劑的凍存和復(fù)蘇工藝研究，鼓勵(lì)采14/24用帶有在線監(jiān)測(cè)的程序降溫先進(jìn)設(shè)備開(kāi)展不同降溫程序研究。對(duì)于冷凍保存或以其他方式儲(chǔ)存的產(chǎn)品，應(yīng)確定短期或者長(zhǎng)期儲(chǔ)存對(duì)產(chǎn)品活性和穩(wěn)定性的影響。干細(xì)胞產(chǎn)品復(fù)雜，產(chǎn)品質(zhì)量難以完全精確表征，可應(yīng)用質(zhì)量源于設(shè)計(jì)的理念，加強(qiáng)工藝過(guò)程控制。為了控制產(chǎn)品的批間質(zhì)量一致，可對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)的全過(guò)程進(jìn)行合理的過(guò)程控制，包括明確的工藝參數(shù)和中控標(biāo)準(zhǔn)，以確保其質(zhì)量(一致性、純度和效力)和安全性。這些工藝參數(shù)包括特定步驟的培養(yǎng)條件溫(度、溶氧、pH、CO)、工藝添加劑的用量、生產(chǎn)中每個(gè)環(huán)節(jié)的時(shí)間控制范圍，等等。2同時(shí)，可在合理的工藝節(jié)點(diǎn)進(jìn)行工藝中間品檢測(cè)，檢測(cè)與產(chǎn)品質(zhì)量相關(guān)的工藝性能指標(biāo)，如細(xì)胞形態(tài)、活力、表型特征(包括預(yù)期和非預(yù)期細(xì)胞群)、生物負(fù)荷、回收率等，并設(shè)置可接受標(biāo)準(zhǔn)，為糾偏限度提供依據(jù)。由于干細(xì)胞產(chǎn)品一般無(wú)法進(jìn)行終端除菌和除病毒工藝，外源因子污染風(fēng)險(xiǎn)高，生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)在適當(dāng)環(huán)節(jié)檢測(cè)微生物安全性指標(biāo)(包括無(wú)菌、支原體、內(nèi)毒素等)。干細(xì)胞產(chǎn)品的變更，可參考一般生物制品的可比性研究的基本原則，但由于干細(xì)胞產(chǎn)品的復(fù)雜性和異質(zhì)性，現(xiàn)有的藥學(xué)表征方法很難全面反映變更前后產(chǎn)品質(zhì)量(安全性、有效性)的差異。在干細(xì)胞產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)和上市后變更中，可能需要更多借助非臨床和臨床研究手段。對(duì)于干細(xì)胞產(chǎn)品，不能僅靠終產(chǎn)品的檢測(cè)來(lái)說(shuō)明變更前后產(chǎn)品質(zhì)量的可比性，變更研究的內(nèi)容應(yīng)該覆蓋變更前后的原材料比對(duì)、工藝過(guò)程比對(duì)、工藝中間品與終產(chǎn)品的質(zhì)量屬性比對(duì)，以及穩(wěn)定性比對(duì)等，其中質(zhì)量屬性比對(duì)應(yīng)該著重關(guān)注鑒別、生物學(xué)活性以及純度和雜質(zhì)等。全面識(shí)別各類變更對(duì)產(chǎn)品安全性、有效性、質(zhì)量可控性的潛在影響，科學(xué)合理地制定變更策略和研究方案。可以參考ICHQ5E的基本原則，設(shè)置合理的可比性研究取樣點(diǎn)、檢測(cè)指標(biāo)及可接受標(biāo)準(zhǔn)，選用變更前后工藝生產(chǎn)的代表性批次進(jìn)行可比性研究，關(guān)注檢測(cè)項(xiàng)目的全面性、預(yù)設(shè)對(duì)比研究標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置的合理性、檢測(cè)方法的有效性和檢測(cè)結(jié)果分析的客觀性等。15/24隨著研發(fā)的進(jìn)展，研發(fā)過(guò)程中可能存在多個(gè)階段不同的生產(chǎn)工藝，如非注冊(cè)臨床工藝、非臨床工藝、臨床工藝、商業(yè)化生產(chǎn)工藝、上市后變更的新工藝等，應(yīng)具體分析各階段工藝之間的差異，研究各工藝版本下的產(chǎn)品質(zhì)量是否可橋接，如有必要，應(yīng)進(jìn)一步提供非臨床或人體比對(duì)研究數(shù)據(jù)。一般情況下，在確證性臨床試驗(yàn)開(kāi)展前，建議完成所有預(yù)期變更。為了持續(xù)生產(chǎn)出質(zhì)量一致的干細(xì)胞產(chǎn)品，進(jìn)行切實(shí)可行的工藝驗(yàn)證十分關(guān)鍵。經(jīng)過(guò)工藝驗(yàn)證后，生產(chǎn)中所有原材料和工藝嚴(yán)格遵循質(zhì)量控制體系和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。工藝驗(yàn)證時(shí)，需采用商業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)能下的生產(chǎn)工藝，進(jìn)行連續(xù)多個(gè)批次干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)，關(guān)注起始原材料等對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。商業(yè)化工藝驗(yàn)證自體產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)關(guān)注同時(shí)同階段最大產(chǎn)能的挑戰(zhàn)研究，考慮人員、設(shè)備、物料、環(huán)境、檢測(cè)等整體運(yùn)行能力對(duì)生產(chǎn)產(chǎn)能的支持能力，還應(yīng)著重考慮干細(xì)胞的體外擴(kuò)增能力、代次和分化效率、產(chǎn)品純度對(duì)商業(yè)化生產(chǎn)產(chǎn)能的支持能力。應(yīng)詳細(xì)記錄工藝驗(yàn)證中，不同批次工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量的變化情況，全面確認(rèn)生產(chǎn)工藝的穩(wěn)健性和產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，驗(yàn)證關(guān)鍵生產(chǎn)階段樣品的鑒別、微生物安全性、純度和生物學(xué)活性，評(píng)估基因組穩(wěn)定性等，確保產(chǎn)品的安全性。考慮到生產(chǎn)工藝對(duì)生產(chǎn)終末細(xì)胞的影響，需對(duì)可傳代的終產(chǎn)品進(jìn)行傳代穩(wěn)定性研究和驗(yàn)證，建議重點(diǎn)關(guān)注限傳代次下的生長(zhǎng)特性穩(wěn)定性、遺傳穩(wěn)定性、成瘤/致瘤性考察以及終末細(xì)胞分化和去分化情況分析等。在輸入人體前，干細(xì)胞產(chǎn)品到達(dá)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的運(yùn)輸方式、在醫(yī)院的使用方法(如復(fù)蘇、洗滌等)、處理時(shí)間和儲(chǔ)存條件、期限等也應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。在臨床回輸操作中，重點(diǎn)關(guān)注防范不同類型細(xì)胞自身特點(diǎn)所引起的風(fēng)險(xiǎn)(如細(xì)胞失活、聚團(tuán)、喪失干性等)，以及臨床使用過(guò)程中微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于新型給藥裝置和給藥方式，需驗(yàn)證給藥準(zhǔn)確度。16/24由于干細(xì)胞產(chǎn)品具有多樣性、異質(zhì)性、復(fù)雜性、特殊性、進(jìn)展性等特性，因此對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量研究應(yīng)全面且持續(xù)，建議選擇代表性的生產(chǎn)批次如(非臨床研究批次、臨床試驗(yàn)批次、商業(yè)化生產(chǎn)批次)和合適的生產(chǎn)階段樣品(例如原代細(xì)胞或細(xì)胞種子、細(xì)胞庫(kù)、工藝中間品、原液和制劑成品等)進(jìn)行研究。質(zhì)量研究?jī)?nèi)容可結(jié)合細(xì)胞特性進(jìn)行選擇，盡量覆蓋細(xì)胞特性分析、理化特性分析、純度和雜質(zhì)分析、安全性分析和生物學(xué)活性分析等方面，盡可能采用一系列先進(jìn)、正交的分析技術(shù)，且分析方法應(yīng)經(jīng)過(guò)研究確認(rèn)，確保方法適用可靠。形態(tài)學(xué)分析可能對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)分化狀態(tài)具有一定的指示作用，可結(jié)合各種成像技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察，幫助確定細(xì)胞的狀態(tài)。建議從細(xì)胞的表型或遺傳型等多種維度，采用種屬鑒別和細(xì)胞譜系等多種方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒別，鼓勵(lì)開(kāi)發(fā)能鑒別潛在污染細(xì)胞的方法，控制生產(chǎn)過(guò)程中細(xì)胞交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。干細(xì)胞產(chǎn)品通常是活的細(xì)胞治療產(chǎn)品，可通過(guò)細(xì)胞活率、活細(xì)胞數(shù)、群體倍增時(shí)間PDT()、細(xì)胞周期等對(duì)細(xì)胞活性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。多種表面標(biāo)志物可對(duì)細(xì)胞類型、多能性、譜系、終末分化和/或功能進(jìn)行表征，常采用相關(guān)分析檢測(cè)方法如蛋白免疫印跡(WesternBlot,WB)、流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光等，進(jìn)行細(xì)胞特性分析。mRNA標(biāo)記物與蛋白質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)的有效相關(guān)性如果經(jīng)驗(yàn)證，可使用基于mRNA的標(biāo)記物輔助進(jìn)行細(xì)胞表征。一般理化特性分析需結(jié)合產(chǎn)品類型和制劑特征開(kāi)展研究，常包括外觀、顏色、pH值、明顯可見(jiàn)異物、滲透壓摩爾濃度、裝量等項(xiàng)目。干細(xì)胞產(chǎn)品在生產(chǎn)過(guò)程中，可能會(huì)引入或產(chǎn)生非細(xì)胞雜質(zhì)如(理化雜質(zhì))、細(xì)胞碎片或非目的細(xì)胞，影響產(chǎn)品純度，并可能帶來(lái)安全性風(fēng)險(xiǎn)，因此需要根據(jù)產(chǎn)品類型和工藝特點(diǎn)，進(jìn)行全面規(guī)范的純度和雜質(zhì)研究。17/24通常純度分析的研究項(xiàng)目可能包括：活細(xì)胞比例、細(xì)胞群或亞群比例、目的細(xì)胞比例和非目的細(xì)胞比例等。經(jīng)研究，當(dāng)非目的細(xì)胞對(duì)產(chǎn)品安全性和有效性無(wú)不良影響時(shí)，需研究其組成和比例，盡量控制批間一致性。雜質(zhì)分析的研究項(xiàng)目包括工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。工藝相關(guān)雜質(zhì)是指生產(chǎn)過(guò)程中引入的雜質(zhì)，如殘留的外源蛋白、抗生素、誘導(dǎo)試劑、微載體、病毒載體、DNA等。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)如非目的細(xì)胞、細(xì)胞非預(yù)期表達(dá)的產(chǎn)物、死細(xì)胞殘留、細(xì)胞碎片和其他可能的降解產(chǎn)物等。對(duì)于這些影響產(chǎn)品安全性的雜質(zhì)成分，應(yīng)在工藝中予以去除，在質(zhì)量研究中予以檢測(cè)，并進(jìn)行定性/定量控制。需要特別關(guān)注的是，產(chǎn)品中可能存在高風(fēng)險(xiǎn)雜質(zhì)成分的情況下如(ESC或iPSC殘留)，應(yīng)當(dāng)建立和明確雜質(zhì)去除方法及雜質(zhì)殘留的定量檢測(cè)方法。如果雜質(zhì)成分不能有效去除，則應(yīng)當(dāng)在動(dòng)物模型或其他系統(tǒng)中進(jìn)行安全性和毒性評(píng)估，并根據(jù)人體暴露最大劑量或體內(nèi)安全性研究結(jié)果，設(shè)定安全合理的殘留限度。包括由干細(xì)胞產(chǎn)品自身生物學(xué)特性所決定的和誘發(fā)受者體內(nèi)其他細(xì)胞生物學(xué)特性發(fā)生改變相關(guān)的安全性問(wèn)題。在對(duì)干細(xì)胞生物學(xué)安全性進(jìn)行評(píng)估時(shí)，應(yīng)考慮相關(guān)細(xì)胞的臨床適應(yīng)癥、給藥途徑、劑量等與臨床治療直接相關(guān)的因素，并利用合適的體內(nèi)、體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)相關(guān)的生物學(xué)安全性進(jìn)行有效評(píng)估。干細(xì)胞生物學(xué)安全性包括成瘤性和致瘤性、非預(yù)期分化、脫靶編輯等。TumorigenicityOncogenicity藥學(xué)方面應(yīng)考慮干細(xì)胞產(chǎn)品的成瘤和致瘤風(fēng)險(xiǎn)，特別是高代次的，或經(jīng)過(guò)體外復(fù)雜處理和基因修飾的干細(xì)胞產(chǎn)品。基于多能干細(xì)胞所具有的三胚層分化潛能及其潛在的致畸胎瘤特性，對(duì)于ESCs和iPSCs來(lái)源的干細(xì)胞衍生產(chǎn)品，應(yīng)特別關(guān)注終產(chǎn)品成瘤性和致瘤性檢測(cè)。軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)、端粒酶活性檢測(cè)可一定程度上體外表征產(chǎn)品的成瘤性。干細(xì)胞在體外操作過(guò)程中可能分化為非目的細(xì)胞。建議開(kāi)發(fā)特定的檢測(cè)技術(shù)(比如高通量測(cè)序)，研究、評(píng)估和監(jiān)控干細(xì)胞產(chǎn)品非預(yù)期分化的可能性和影響，可結(jié)合目的細(xì)胞分化效率進(jìn)行具體分析。18/24應(yīng)用基因組編輯技術(shù)可能會(huì)帶來(lái)不同程度的非目的基因組編輯風(fēng)險(xiǎn)，出現(xiàn)染色體不穩(wěn)定和脫靶編輯(如DNA插入或刪除)等情況。對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行基因組編輯的產(chǎn)品，應(yīng)分析和研究基因修飾細(xì)胞中的脫靶編輯情況，建議使用包括無(wú)偏全基因組分析在內(nèi)的多重正交方法例(如，計(jì)算機(jī)、生化、細(xì)胞分析方法)識(shí)別潛在的脫靶位點(diǎn)。由于干細(xì)胞產(chǎn)品缺少滅菌工藝和去病毒步驟，應(yīng)在原材料和生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)中對(duì)微生物安全性風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行控制，具體可參考藥典要求和其他有關(guān)藥品的控制策略。微生物學(xué)安全性具體是指：干細(xì)胞產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)不存在各種微生物細(xì)(菌、真菌、支原體和病毒等)、微生物代謝產(chǎn)物/衍生物如(細(xì)菌內(nèi)毒素)等的污染。病毒污染包括種屬特異性病毒(如人源/動(dòng)物源病毒)、內(nèi)外源逆轉(zhuǎn)錄病毒以及其他非特定病毒，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性于工藝的適當(dāng)階段進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，綜合生產(chǎn)全過(guò)程評(píng)估產(chǎn)品的病毒污染風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于逆轉(zhuǎn)錄病毒和非特定病毒因子檢測(cè)，可參考《中國(guó)藥典》三部通則“生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制”的相關(guān)要求進(jìn)行。對(duì)于使用復(fù)制缺陷型等病毒載體獲得的干細(xì)胞產(chǎn)品，應(yīng)在產(chǎn)品設(shè)計(jì)和質(zhì)量研究時(shí)充分考慮控制病毒載體回復(fù)突變的風(fēng)險(xiǎn)，復(fù)制型病毒(replicationcompetentvirus,RCV)的檢測(cè)要求參考相關(guān)指導(dǎo)原則。干細(xì)胞產(chǎn)品是活細(xì)胞藥物，其生物學(xué)作用可能是多靶點(diǎn)、多通路的，且不同類型的干細(xì)胞產(chǎn)品具有不同的生物學(xué)功能。因此，需要基于產(chǎn)品與臨床相關(guān)的治療活性或預(yù)期的生物學(xué)效應(yīng)，開(kāi)發(fā)能夠代表產(chǎn)品作用機(jī)制的定量生物學(xué)活性/功能測(cè)定方法，多活性組分產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)分別進(jìn)行鑒定和活性測(cè)定。有時(shí)還需開(kāi)發(fā)干細(xì)胞生物學(xué)活性的替代指標(biāo)，如在活體系統(tǒng)之外進(jìn)行的理化分析測(cè)定法physicochemical(analyticalassay)，通過(guò)評(píng)估產(chǎn)品的免疫化學(xué)、生物化學(xué)和/或分子屬性來(lái)提供廣泛的產(chǎn)品表征數(shù)據(jù)。采用的分析測(cè)定法應(yīng)開(kāi)展替代方法與活性相關(guān)性研究，還應(yīng)證明該測(cè)定法可以區(qū)分活性產(chǎn)品與非活性或降解形式的產(chǎn)品，并進(jìn)行充分的對(duì)照研究和方法學(xué)驗(yàn)證。有些干細(xì)胞產(chǎn)品具有復(fù)雜的和/或不完全清晰的作用機(jī)理或具有多種生物學(xué)活性，細(xì)胞生物學(xué)功能表征須結(jié)合體外生物學(xué)效應(yīng)和體內(nèi)動(dòng)物模型綜合評(píng)價(jià)。19/24干細(xì)胞產(chǎn)品技術(shù)進(jìn)展和認(rèn)知更新較快，生物學(xué)活性分析需結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)與時(shí)俱進(jìn)。比如目前來(lái)看，間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的生物學(xué)活性主要包括誘導(dǎo)分化功能、免疫調(diào)控功能和組織再生功能，其中誘導(dǎo)分化功能包括成骨、成脂、成軟骨細(xì)胞的分化功能檢測(cè)，而免疫調(diào)控功能可通過(guò)檢測(cè)免疫調(diào)控因子等來(lái)表征。再如，ESCs/iPSCs衍生細(xì)胞的生物學(xué)活性是基于分化細(xì)胞特殊的生物學(xué)功能的檢測(cè)，或與分化細(xì)胞功能相關(guān)的特定基因和蛋白質(zhì)的檢測(cè)。另外，干細(xì)胞生物學(xué)活性檢測(cè)可能還涉及到細(xì)胞定向分化效率檢測(cè)、細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)/結(jié)構(gòu)的形成、細(xì)胞相互作用(如免疫激活或抑制)、細(xì)胞的遷移分化或自我更新潛能評(píng)估等等。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立主要包括以下過(guò)程：確定質(zhì)量研究的內(nèi)容、進(jìn)行方法學(xué)研究、確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目及限度、制訂及修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)采用經(jīng)驗(yàn)證的分析方法，評(píng)估產(chǎn)品的鑒別、純度、無(wú)菌性和活性，應(yīng)體現(xiàn)干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量特點(diǎn)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目及限度結(jié)合質(zhì)量研究和產(chǎn)品特點(diǎn)確定，限度的設(shè)定應(yīng)能確保產(chǎn)品的安全性、有效性和批間一致性。干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目一般包括：細(xì)胞鑒別、細(xì)胞活性細(xì)(胞活率、活細(xì)胞數(shù)、功能細(xì)胞數(shù)、群體倍增時(shí)間)、純度(如目的細(xì)胞比例)、生物學(xué)活性(如分化效率、定量/半定量功能測(cè)定、標(biāo)志物)、產(chǎn)品和工藝相關(guān)雜質(zhì)、成瘤性/致瘤性(如適用)、非預(yù)期分化、微生物安全性無(wú)(菌、內(nèi)毒素、支原體、內(nèi)外源病毒)、一般檢測(cè)外(觀、pH值、明顯可見(jiàn)異物、滲透壓摩爾濃度、裝量)等。如細(xì)胞產(chǎn)品曾接受基因修飾，應(yīng)對(duì)每批終產(chǎn)品基因修飾目的細(xì)胞的百分比、單個(gè)細(xì)胞的平均載體或質(zhì)粒拷貝數(shù)、目的基因及其表達(dá)產(chǎn)物的功能、脫靶編輯、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染用載體的殘留量等進(jìn)行控制。對(duì)于使用復(fù)制缺陷型病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞，應(yīng)證明不存在復(fù)制型載體(RCV)。對(duì)于運(yùn)輸?shù)结t(yī)院后需要進(jìn)行給藥前再操作比(如容器的轉(zhuǎn)換、物理狀態(tài)的轉(zhuǎn)變、與其他結(jié)構(gòu)材料的聯(lián)合、過(guò)濾與清洗等)的干細(xì)胞產(chǎn)品，需模擬實(shí)際操作開(kāi)展臨床使用相關(guān)研究，根據(jù)研究結(jié)果明確給藥前的操作步驟和注意事項(xiàng)，并向醫(yī)院提供完善的產(chǎn)品信息和操作培訓(xùn)資料，包括針對(duì)操作步驟的復(fù)核和標(biāo)簽核對(duì)等。使用前檢查必須至少包含外觀、顏色、鑒別和包裝完整性等檢測(cè)。20/24方法學(xué)研究包括方法的選擇和方法的驗(yàn)證。干細(xì)胞產(chǎn)品方法學(xué)研究中需關(guān)注的特殊要求，比如：(1)在細(xì)胞基質(zhì)鑒定和檢測(cè)中使用更先進(jìn)方法和技術(shù)改進(jìn)時(shí)，應(yīng)開(kāi)展新舊方法的全面對(duì)比驗(yàn)證和檢測(cè)橋接研究，證明新方法的專屬性、靈敏度和精密度至少與現(xiàn)有方法相當(dāng)。(2)有關(guān)生物標(biāo)志物的分析方法驗(yàn)證應(yīng)規(guī)范開(kāi)展，特別關(guān)注陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)計(jì)與驗(yàn)證。需(3)盡可能采取多種正交的分析檢測(cè)方法進(jìn)行生物學(xué)活性測(cè)定研究，并完成方法學(xué)驗(yàn)證。方法研究中還應(yīng)考慮活性組分之間潛在的非累加效應(yīng)，例如干擾效應(yīng)或協(xié)同效應(yīng)。(4)干細(xì)胞產(chǎn)品可能包含異質(zhì)性的細(xì)胞群，需采用盡可能敏感的方法定量檢測(cè)與生物學(xué)活性相關(guān)的目的細(xì)胞和非目的細(xì)胞群，方法研究時(shí)應(yīng)特別關(guān)注對(duì)照的設(shè)置與驗(yàn)證。(5)原則上應(yīng)依據(jù)現(xiàn)行版藥典中的生物制品無(wú)菌和支原體檢查法進(jìn)行干細(xì)胞終產(chǎn)品的放行檢測(cè)，必要時(shí)采用快速方法放行應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。快速方法驗(yàn)證時(shí)需參考相關(guān)指導(dǎo)原則,充分考慮選用代表性污染陽(yáng)性對(duì)照品。在未能充分驗(yàn)證新型方法可以完全替代藥典傳統(tǒng)方法時(shí)，建議在使用新型檢測(cè)方法進(jìn)行放行檢測(cè)的同時(shí)，開(kāi)展藥典傳統(tǒng)方法的平行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果后置可能出現(xiàn)的非預(yù)期結(jié)果制定處置方案。快速方法應(yīng)逐步完成與藥典方法的比對(duì)，以證明檢測(cè)能力不低于藥典法。(6)對(duì)于經(jīng)基因修飾的干細(xì)胞產(chǎn)品，如果從最終產(chǎn)品中去除了外源遺傳物質(zhì)，需開(kāi)發(fā)相關(guān)的高靈敏檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)。分析檢測(cè)方法中可能使用參比品/對(duì)照品，鼓勵(lì)開(kāi)發(fā)建立細(xì)胞參比品用于干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量控制。用于分析的參比品/對(duì)照品需具備代表性和可溯源性，應(yīng)采用經(jīng)驗(yàn)證的分析檢測(cè)方法對(duì)其進(jìn)行充分的特性分析，并鑒定合格。需完成參比品/對(duì)照品標(biāo)定含(量標(biāo)定和活性標(biāo)定)，并對(duì)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)各個(gè)階段使用的參考品開(kāi)展穩(wěn)定性研究，確定復(fù)驗(yàn)期和有效期。在開(kāi)展干細(xì)胞產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究時(shí)，可參考生物制品的穩(wěn)定性研究的技術(shù)要求，如ICHQ5C和生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則。穩(wěn)定性研究的目的是為干細(xì)胞產(chǎn)品的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用提供支持。研究?jī)?nèi)容一般包括影響因素試驗(yàn)溫(度、光照、機(jī)械力等)、加速試驗(yàn)、長(zhǎng)期試驗(yàn)、運(yùn)輸試驗(yàn)和臨床使用中穩(wěn)定性試驗(yàn)。試驗(yàn)樣品一般包括代表性原液如(有)、成品和21/24需要臨時(shí)或階段性凍存的工藝中間品，研究用樣品的生產(chǎn)、使用和質(zhì)量(如總細(xì)胞密度和體積范圍等)應(yīng)可代表實(shí)際情況。試驗(yàn)條件應(yīng)充分考慮新鮮細(xì)胞和凍存細(xì)胞的區(qū)別，考慮干細(xì)胞產(chǎn)品保存、包裝、運(yùn)輸、臨床配伍和實(shí)際給藥的特殊要求，考慮各個(gè)環(huán)節(jié)樣品累積的儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)最終產(chǎn)品穩(wěn)定性的影響等。試驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)能充分反映考察條件對(duì)質(zhì)量的影響，如細(xì)胞活率和活細(xì)胞數(shù)等細(xì)胞特性、生物學(xué)活性、細(xì)胞純度、理化特性、微生物安全性指標(biāo)以及關(guān)鍵輔料含量等。申報(bào)臨床階段的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)應(yīng)能夠支持臨床試驗(yàn)開(kāi)展，即穩(wěn)定性研究的期限應(yīng)至少能夠涵蓋所開(kāi)展的臨床試驗(yàn)的要求，證明產(chǎn)品從放行至患者給藥的有效期是合理的。申報(bào)上市時(shí)需提供多個(gè)代表性批次的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)以支持和確定貯藏條件、使用條件和有效期，同時(shí)應(yīng)明確產(chǎn)品的敏感條件、細(xì)胞狀態(tài)或質(zhì)量隨時(shí)間的變化情況等。包裝及密封容器系統(tǒng)的適用性評(píng)估對(duì)象是指直接接觸產(chǎn)品的包裝容器和密封系統(tǒng)。應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品給藥途徑(靜脈給藥、局部給藥、眼用制劑等)、制劑性質(zhì)(新鮮細(xì)胞、凍存制劑等)等，選擇合適的內(nèi)包材凍(存管、西林瓶、軟袋等)。應(yīng)對(duì)直接接觸的包裝材料和密封容器的功能性和相容性進(jìn)行研究，功能性研究比如密封性、耐低溫性，相容性研究可參考相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則開(kāi)展。AdultstemcellsASCs源自已經(jīng)發(fā)育的胚胎組織、成人組織如(牙齒來(lái)源、脂肪來(lái)源等)或出生伴隨的附件組織(如臍帶、胎盤)的未分化細(xì)胞，可自我更新，