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文檔簡介
運行程序:打開顯微鏡電源后,雙擊打開軟件設定菜單欄禁止設置(非專業人員勿動)采集圖片:采集基本設置下有有三個設置參數:(Mic即microscope)一)設定:可進行物鏡倍數切換,提議重低倍鏡到高倍鏡進行觀察BF:明場,PH:相差,DIC:,POL:,FLUO:熒光Ap:孔徑光闌Int.Fine:光強熒光激發光選擇:I3(GFP)設置目鏡與攝像頭分光情況可存放上面拍攝參數,提議連續拍攝多個樣品使用(如芯片)二):選擇調焦(F精細,C粗調)后,把鼠標放在右側,用鼠標滾動輪進行調焦(先粗調,后精細)載物臺移動調整快速/精準圖中+為現在拍攝位置,任意點擊框中地方,進行快速切換拍攝位置片子任意位置切換對比:在預設位置上,下拉窗口中選擇位置1,點擊保留更換位置后,下拉窗口中選擇位置2,點擊保留下拉窗口中選擇位置1,點擊,即可快速切換到位置1(如這類推)三)以下不提議使用:點擊后→自動曝光→(不能調整增益)提議:不要使用自動曝光。曝光時間是指從快門打開到關閉時間間隔,在這一段時間內,物體能夠在底片上留下影像,曝光時間是看需要而定,沒有長短好壞說法只有需要講法。曝光時間越大,攝像頭反應就越長。對于很弱信號,曝光也不能無限增加,因為伴隨曝光時間增加,噪音也會積累。增益:拍攝圖片時,增益不能調,需要放到最小。增益稍大一些,圖像噪聲就出來了。畫質反而不好。增益越大噪音越大,同等質量下圖片信噪比越低,圖像質量越差。在不過曝前提下,增加曝光時間能夠增加信噪比,使圖像清楚。(拍攝熒光時,用到該原理)飽和度是指色彩飽合度。適可而止。調小了沒色,調大了也會有噪聲。提議參數1.5伽瑪值意義是增強亮部反差(伽瑪值小于1)或者增強暗部反差(伽瑪值大于1)。是一個非線性亮度調整。即伽馬調整是部分增強圖片暗部分和亮部分對比所以拍攝熒光照片時,將伽瑪值調大會感覺能增加暗熒光亮度。提議參數0.6/1免疫組化拍攝方法:選擇BF,5X倍鏡下觀察,調焦調整曝光時間,至適中(經過觀察柱狀圖,為正態分布)。調整白平衡:用鼠標在片子空白地方,左擊拖拉→點擊白平衡(可能需數次調整)每次轉換陪數,都要重新調整曝光時間及白平衡注意:先調整曝光時間,再調整白平衡。勿調轉。免疫熒光拍攝方法:拍攝熒光照片,一個是要調得背景黑,沒有噪聲點。二是盡可能使微弱熒光拍得明亮一些。在BF/PH下,選所需陪數,觀察所需拍攝對象(操作同上)拍攝熒光選擇FLUO,選擇激發光I3/N21/A將光強及視場光闌調至最大將增益調大,至觀察到熒光;若無,稍調整曝光時間。當看到熒光后,調整焦距,尋找你想要目標熒光。再把增益調至1.0X,同時把曝光時間調大,提議參數3s。(調整增益目標:若當一開始就調整曝光時間,此時拍攝會很慢,因為時間由曝光時間決定,曝光時間越大,時間越長,反應越慢,所以提議找到目標熒光后,再調整,最終拍攝)此時,黑色背景可能有激發光顏色,將伽馬值調大,提議0.6。依照實際情況,進行曝光時間和伽馬調整。(拍攝熒光照片時,把柱狀圖下限稍微設置一點數值,比如5到10左右。能使背景潔凈一點。這也意味著比這個值小熒光會被徹底抹黑)冷CCD就是靠降溫降低噪音,從而能夠長時間曝光拍攝弱信號重設攝像頭:被人調得很亂時,使用(選擇默認或test)→點擊重置攝像機圖像格式:采集格式:即拍攝圖片。活圖格式:即屏幕上顯示圖片。圖像種類:彩色適適用于BF/PH;灰度適適用于熒光定量。柱狀圖:經過柱狀圖,可判斷曝光時間是否適宜。并可利用上、下限進行白水平及黑水平應用陰影化:當鏡頭臟時應用。操作:拿掉樣品→選擇陰影化20X,拍攝時即自動應用。勾選應用到活動圖中,即在拍攝過程中可應用陰影化。銳化:通常選擇無/低點曝光:拍攝熒光時,若想對某一部分進行局部強化,可用鼠標在該地方,左擊拖拉→點擊點曝光。圖像會對該地方進行自動曝光。可設置標尺長度及單位一下為默認設置,不要動可經過移動色彩輪,進行調色,提議不適用色彩校準(色溫):亞洲人默認5000k瀏覽設置進行瀏覽拍攝圖片,設置拍攝圖片存放位置。選擇拍攝圖片存放文件夾(強制放于E盤,拍完拷走,丟失由本人負擔)選擇E盤后,點擊創建新文件夾,命名。選擇自己文件夾后,點擊,此時,所選中拍攝文件夾前有一紅點。移至拍攝文件夾界面設置:設置標尺及基本注解提議勾選顯示百分比尺/標注,即拍攝過程及拍攝圖片均顯示設置注解:設置百分比尺:百分比尺尺寸依照放大倍數進行調整。瀏覽器調整圖片顯示大小,可經過滾
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