淺論單側睪丸扭轉對未扭轉側睪丸的影響及L【摘要】目的：探討大鼠單側睪丸扭轉對未扭轉側睪丸生精功能的影響及N-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)對未扭轉側睪丸早期損傷的保護作用。方法：21只健康雄性青春期前SD大鼠隨機均分為假手術對照組(A組，n=7)、睪丸扭轉復位組(B組，n=7)和睪丸扭轉復位+靜脈注射L-NMMA組(C組，n=7)。按Turner法建立睪丸扭轉模型，喂養至術后7d時處死，即刻采集各組大鼠未扭轉側睪丸標本，測定睪丸組織丙二醛(MDA)水平、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和白細胞介素-6(IL-6)含量，同時進行組織病理學觀察。結果：與B組相比，C組MDA值、NO、NOS、IL-6含量明顯下降，病理學上表現為平均曲細精管直徑明顯升高，而睪丸結構評分則明顯偏低，兩組間比較差異均有顯著性()。結論：L-NMMA通過抑制NO及NOS的產生，減輕大鼠單側睪丸扭轉復位后對側睪丸的早期損害。

【關鍵詞】N-甲基-L-精氨酸;睪丸扭轉;一氧化氮;睪丸損傷;大鼠

Abstract:Objective:ToinvestigatetheinfluenceofunilateraltesticulartorsiononthecontralateraltesticularspermatogeneticfunctionandtheprotectiveeffectsofL-NMMAinearlystageofcontralateraltestisinjury.Methods:Twenty-oneprepubertalSprague-DawleyratswereequallyrandomlydividedintoGroupA(sham-operationcontrol)，B(torsion/detorsion)andC(torsion/detorsionplusinjectionofL-NMMA)，7ratsineachgroup.Thetesticulartorsion/detorsionmodelwasestablishedwiththeTurnermethod.Alltheratswerefedunderthesameconditionfor7daysandsacrificed，andalltheright(untwisted)testiswereremovedfromrats.Thenthebiochemicalparameters，suchasmalondialdehyde(MDA)，nitricoxide(NO)，nitricoxidesynthase(NOS)activ-ityandinterleukin6(IL-6)wereevaluated;histologyandseminiferoustu-bulediameterswereassessed.Results:ComparedwithGroupB(torsion/detorsion)，thebiochemicalparameters，includ-ingthelevelofMDA，NO，NOSandIL-6inGroupC(torsion/detorsionplusinjectionofL-NMMA)decreasedsignificantlywhilethemeanseminiferoustubulardiameterofcontralateraltestisandhistologicalgradesmaintainedinabettercondition.Conclusion:ByinhibitionoftissueNO/NOSproduction，L-NMMAcanreducethedamagesoncontralateraltestisofprepubertalratswithunilateraltesticulartorsionduringtheearlyperiod.

Keywords:L-NMMA;testiculartorsion;NO;testisinjury;rats

睪丸扭轉又稱精索扭轉，指因睪丸引帶異常致睪丸在陰囊內以精索為軸出現異常旋轉，多見于25歲以下青少年，發病率約為1/4000[1]。長時間的單側睪丸扭轉，不僅可以引起同側睪丸生精功能損害，亦可對對側睪丸產生影響，最終可以引起患者生育能力下降。因此早期的干預措施顯得至關重要。藥物治療將成為今后睪丸扭轉復位后睪丸保護研究的重要方向之一。本研究通過建立大鼠單側睪丸扭轉模型，研究單側睪丸扭轉對未扭轉側睪丸生精功能的影響及N-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)在大鼠單側睪丸扭轉復位后對側睪丸早期損傷中的保護作用，以期為臨床治療提供一定的實驗依據。

1材料和方法

實驗材料

取質量為90～110g健康雄性(日齡約30d)的青春期前SD大鼠21只，購自中國科學院上海實驗動物中心，許可證號：SCXK(滬)2003-0003，在溫州醫學院實驗動物中心SPF條件下飼養。

動物分組及模型建立

將21只SD大鼠隨機分為A、B、C3組，假手術對照組(A組，n=7)、睪丸扭轉復位組(B組，n=7)和睪丸扭轉復位+靜脈注射L-NMMA組(C組，n=7)。睪丸扭轉模型按照Turner法制備。2%戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉后，左下腹小切口，游離左側睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍組織至附睪頭。A組7只大鼠，僅將單側睪丸游離后再縫于陰囊壁固定。B、C兩組則將左側睪丸沿精索方向順時針扭轉720°，固定扭轉側睪丸防止自然復位，維持4h后原切口打開復位扭轉睪丸，關閉切口。其中C組大鼠在睪丸扭轉復位前30min予尾靜脈緩慢注射L-NMMA30mg/kg。

標本制備

各組大鼠均在同等條件下喂養至術后7d，用快速脫頸法處死，采集未扭轉側睪丸標本，將所有大鼠睪丸標本沿中軸切開分為兩部分，一部分睪丸配置成組織勻漿行相關生化測試，另一部分睪丸迅速置于10%的中性福爾馬林中待制作石蠟包塊。

檢測方法

生化檢測指標：按試劑盒要求制備組織勻漿，采用化學比色法測定丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性，硝酸還原酶法測定一氧化氮(NO)含量，ELISA法測定白細胞介素-6(IL-6)，操作步驟嚴格按試劑盒說明書要求進行。

睪丸組織病理學檢查

石蠟切片常規HE染色，置于光鏡下鏡檢，觀察睪丸曲細精管結構、計數生精上皮層數、測量平均曲細精管直徑(MSTD)、睪丸組織結構評分。等級1：正常睪丸，結構層次分明，生殖細胞排列整齊有序。等級2：受損睪丸，生殖細胞排列較等級1不規則，結構松散(彼此細胞間無黏附)，但緊貼精細小管排列。等級3：較重受損睪丸，生殖細胞排列更加不規則，且有脫落、缺失，可見核固縮現象，精細小管邊界模糊不清。等級4：嚴重受損睪丸，緊貼精細小管的生殖細胞出現明顯的凝固性壞死。

統計學處理方法

多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較方差齊性用LSD檢驗，方差不齊性用Dunnett’sT3檢驗。

2結果

MDA含量變化

與A組比，B、C組MDA含量明顯升高()，與B組比，C組低，差異有顯著性()(見表1)。

NO及NOS含量變化

與A組比，B、C組NO及NOS含量明顯升高();C組的NO及NOS含量與B組比差異有顯著性()(見表1)。

IL-6含量變化

與A組比，其余二組IL-6含量明顯升高();C組的IL-6含量與B組比差異有顯著性()(見表1)。

睪丸組織病理學比較

與A組比，B組和C組生精上皮層數、MSTD、睪丸組織結構評分差異均有顯著性()。與B組比，C組在MSTD和組織結構評分上差異均有顯著性()(見表2)。A組生精上皮均緊貼精細小管生長，排列緊密、有序。B組精細小管結構不連續，損傷明顯，管腔內有大量滲出。生精上皮層排列紊亂，僅基底層較明顯，其余生精上皮層或缺失，或脫落，且見毛玻璃樣改變。C組精細小管結構完整，生精上皮層尚緊貼精細小管排列，雖然排列略顯紊亂，但層數仍可辨認(見圖1)。

3討論

單側睪丸扭轉復位后對側睪丸生精功能是否會受到損害，目前尚未有公認一致的結果。有學者認為早期對側睪丸無損害;多數學者則認為對側睪丸早期即可出現病理性改變[5-]。MDA作為細胞膜脂質受氧自由基攻擊后的產物，可以間接反映體內自由基的生成量。在本實驗中，睪丸扭轉/復位組MDA含量明顯增多，提示睪丸組織內自由基過量，表明睪丸組織存在脂質過氧化損傷。IL-6作為細胞因子之一，參與炎癥機制，是炎癥反應和免疫反應的產物。睪丸扭轉/復位組IL-6含量明顯增加，表明睪丸組織存在明顯的炎癥反應。同時病理形態學發現局部睪丸組織出血水腫、炎癥細胞浸潤、上皮細胞排列紊亂，睪丸組織結構評分明顯高于A組，而生精上皮層計數與精細小管直徑都明顯低于A組，進一步提示對側睪丸存在組織損傷且預后不良。

單側睪丸扭轉后對側睪丸生精功能損傷機制較為復雜，爭議較多。近年來不少學者認為對側睪丸早期損傷是由于扭轉側睪丸復位后再灌注引起的[9-10]，再灌注時NO、氧自由基等的增多均可直接或間接引起對側睪丸組織損傷。其中，過量NO的損傷作用占了主導地位[11]。當單側睪丸扭轉復位后，一方面扭轉側生成過量的NO與氧自由基結合形成更具毒性的ONOO-，導致對側睪丸組織的損傷;另一方面通過NO的促炎癥遞質聚集、過度擴張血管、誘導細胞凋亡等作用于對側睪丸組織;同時，上述損傷由于超過了機體自身的抵抗能力，會激活

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