校園環(huán)境水質(zhì)與飲用水質(zhì)的微生物檢測分析報(bào)告目錄TOC\o"1-3"\h\u66791實(shí)驗(yàn)部分 實(shí)驗(yàn)部分1.1實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料為三種，分別為校園環(huán)境內(nèi)的湖水、校園內(nèi)溪水和校園內(nèi)自來水。除此之外選擇了農(nóng)夫山泉牌礦泉水和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)蒸餾水作為對(duì)照。1.2實(shí)驗(yàn)器材與試劑1.2.1主要實(shí)驗(yàn)器材電子天平、量筒、燒杯、玻璃棒、采樣瓶、試管及試管架、三角瓶、紗布、棉花、培養(yǎng)皿、吸管、酒精燈、恒溫水浴鍋、高壓蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)箱、電爐、天平、冰箱、放大鏡、pH試紙、微孔濾膜、過濾設(shè)備、小倒管。1.2.2主要實(shí)驗(yàn)試劑與藥品蛋白胨、酵母、牛肉膏、乳糖、瓊脂、氯化鈉、生理鹽水、胰蛋白胨、三號(hào)膽鹽、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、無水亞硫酸鈉、堿性品紅乙醇溶液（50g/L）、蒸餾水、伊紅水溶液（20g/L）、美藍(lán)水溶液（5g/L）、溴鉀酚紫乙醇溶液（16g/L）。1.3實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)采用微生物檢測過程中常用的平板計(jì)數(shù)法、濾膜法、多管發(fā)酵法等方法，分別對(duì)上述水樣進(jìn)行檢測，具體方法如下：1.3.1平板計(jì)數(shù)法營養(yǎng)培養(yǎng)基的制備:首先利用電子天平精確稱取蛋白胨10克、牛肉膏3克、氯化鈉5克以及瓊脂粉20克，然后用大燒杯盛取1000mL蒸餾水，將大燒杯放人恒溫水浴鍋中持續(xù)加熱，并將稱取好的藥品輕輕加入到燒杯中，一邊加入一邊用玻璃棒攪拌溶解，注意不要讓瓊脂糊底或溶液灑出，待全部藥品充分溶化并攪拌均勻，檢測并調(diào)整配制好的營養(yǎng)瓊脂PH值為7.4-7.6，PH調(diào)整完成后將燒杯從水浴鍋中快速取出，并迅速把培養(yǎng)基倒入到500mL三角瓶中分裝，裝好后用提前制作好的棉塞塞住并用報(bào)紙包扎好。最后將培養(yǎng)基放入滅菌鍋中滅菌20分鐘。用滅菌后的吸管吸取1mL校園內(nèi)湖水的水樣（注意無菌操作），慢慢滴加到裝有9mL經(jīng)過滅菌的生理鹽水試管中，輕輕搖勻后獲得1：10稀釋液，同樣再次以無菌操作吸取1：10的稀釋液1mL滴加到另一支含有9mL滅菌生理鹽水的試管中，搖勻成1：100稀釋液，并按此方法再依次稀釋獲得1：1000和1：10000的稀釋液作為備用。每次稀釋時(shí)，再吸取水樣的時(shí)候都必須更換一支1mL滅菌吸管防止吸管內(nèi)殘留造成誤差。以無菌操作吸取沒有經(jīng)過稀釋的水樣以及2-3個(gè)合理稀釋的水樣1mL，分別滴入不同的經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)并立即倒入約15mL重新融化并冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,倒好后立即輕輕搖勻水樣與培養(yǎng)基。同時(shí)另取一個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿只加入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，后面與加入水樣的培養(yǎng)基一同培養(yǎng)作為空白對(duì)照。待培養(yǎng)基充分冷卻且完全凝固后，同樣將培養(yǎng)皿翻過來，使底面向上，小心放置在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培育48小時(shí),培育結(jié)束取出進(jìn)行觀察與計(jì)數(shù)，根據(jù)觀察結(jié)果報(bào)告校園內(nèi)湖水1mL含有的菌落總數(shù)。在培養(yǎng)基上經(jīng)過適宜條件培養(yǎng)校園湖內(nèi)所取水樣，培養(yǎng)后觀察培養(yǎng)基上形成的菌落，根據(jù)結(jié)果可獲取1mL湖水菌落總數(shù)。在觀察培養(yǎng)的水樣菌落數(shù)的過程中，可以用肉眼直接觀察培養(yǎng)基計(jì)數(shù)，如果有必要可以使用通過放大鏡觀查，以防觀察不清或者有遺漏。觀察并記錄每個(gè)培養(yǎng)皿上的菌群之后，還需要計(jì)算出同稀釋度情況下的平均菌落數(shù)，該數(shù)據(jù)將對(duì)照表格求出水樣的總菌落數(shù)。在獲取計(jì)算同稀釋度的平均數(shù)的數(shù)據(jù)時(shí)，若發(fā)現(xiàn)觀察的培養(yǎng)皿里有明顯的較大片狀菌落存在，那么這個(gè)培養(yǎng)皿的結(jié)果必須廢棄，計(jì)算時(shí)應(yīng)用的觀察數(shù)據(jù)應(yīng)來自沒有大片狀菌落存在的培養(yǎng)皿，這樣才能減少計(jì)算時(shí)候的誤差。若片狀菌落只在培養(yǎng)基的一半，但是培養(yǎng)基另一半生長的菌落分布均勻，是可以把分布均勻的菌落所在半個(gè)培養(yǎng)基觀察計(jì)數(shù)后乘2的數(shù)據(jù)用于計(jì)算該稀釋度的平均菌落數(shù)。1.3.2濾膜法這個(gè)檢驗(yàn)是通過微孔濾膜分離的方式檢驗(yàn)大腸菌群。首先用孔徑為0.45μm的微孔濾膜抽濾校園內(nèi)采集到的水樣，過濾后直接將濾膜放置在選擇培養(yǎng)基上在含有乳糖的適宜條件下培育，如果形成了需氧并帶有特征的菌落以及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，就可以認(rèn)為水中確實(shí)存在總大腸桿菌群。配制培養(yǎng)基：先取一大燒杯裝入500ml蒸餾水并加入瓊脂，放入水浴鍋內(nèi)用玻璃棒攪動(dòng)至瓊脂融解并煮沸后,另取一個(gè)大燒杯盛取500mL蒸餾水并添加磷酸氫二鉀、蛋白胨、酵母和牛肉膏，同樣水浴加熱，倒入剛剛準(zhǔn)備的瓊脂，待攪拌均勻后添加蒸餾水至1000mL,調(diào)整pH在7.2-7.4左右，最后再加入乳糖,同樣攪拌均勻，從水浴鍋取出后快速分裝并用棉塞與報(bào)紙包裝好，放入高壓滅菌鍋滅菌20分鐘。制備出的培養(yǎng)基并不需要全部滅菌，而是留出一部分用于制作另一種培養(yǎng)基。先以無菌操作吸取適量的50g/L的堿性品紅乙醇溶液注入經(jīng)過嚴(yán)格滅菌的試管中，再取適量無水亞硫酸鈉放入同樣嚴(yán)格滅菌的空試管中，滴加少量滅菌過的蒸餾水,待無水亞硫酸鈉完全溶解后,將溶液放入水浴鍋中沸水浴煮沸10分鐘以達(dá)到滅菌目的。當(dāng)滅菌結(jié)束后依然嚴(yán)格按照無菌操作吸取亞硫酸鈉溶液，輕輕滴加進(jìn)剛剛吸取的堿性品紅乙醇溶液中，滴加的同時(shí)可觀察到溶液顏色的深紅色逐漸變淺，當(dāng)溶液顏色完全轉(zhuǎn)變?yōu)榈凵珪r(shí)停止滴加，把淡粉色的混合液全部加入到預(yù)留出的培養(yǎng)基內(nèi),不斷搖晃錐形瓶使混合液與培養(yǎng)基融合均勻，然后快速將此培養(yǎng)基以每個(gè)培養(yǎng)皿15mL分裝。待冷卻凝固后放入冰箱（0℃-4℃）內(nèi)備用。但是注意此方法制作的品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基在使用前的保存時(shí)間最好不多于兩周。如果使用前發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基已經(jīng)從淡粉色變成深紅色，那么該培養(yǎng)基立即放棄使用。過濾前要先將濾膜與濾器滅菌保證實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)。首先把濾膜放入燒杯中，倒入適量蒸餾水沒過但不宜太多，將燒杯放入水浴鍋中持續(xù)煮沸，濾膜滅菌要連續(xù)煮沸3次.每次持續(xù)15分鐘,需要注意煮沸后必須更替燒杯內(nèi)蒸餾水并洗滌濾膜2-3次，目的是除去殘留在濾膜上的溶劑。其次是濾器滅菌，使用點(diǎn)燃的酒精棉球的火焰反復(fù)灼燒濾器，也可以使用蒸汽滅菌鍋高壓滅菌20分鐘,以此達(dá)到滅菌目的。滅菌后才可以進(jìn)行抽濾，使用滅菌后的鑷子輕輕夾起滅菌濾膜邊緣部分避免濾膜破損，使微孔濾膜粗糙面朝上，緊密貼合在滅菌后的濾床上防止漏氣，將過濾器固定好，把100mL水樣加入到濾器中，打開閥門開始抽濾，使水樣在負(fù)0.5大氣壓條件下抽濾。假如在總菌落數(shù)測定的結(jié)果中發(fā)現(xiàn)水樣中菌落數(shù)很多，可以適當(dāng)減少需要過濾的水樣，也可以將水樣進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶荻认♂專褂孟♂屢哼M(jìn)行抽濾。待水樣徹底抽濾，再持續(xù)抽氣約5秒，先關(guān)閉閥門，將濾器取下，同樣使用滅菌的鑷子輕輕夾起濾膜邊緣，將濾膜緩緩提起并快速貼合在在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，注意濾膜過濾到細(xì)菌一面朝上。需要注意的是濾膜必須完全貼在培養(yǎng)基上，濾膜與培養(yǎng)基的接觸面不能存在氣泡，貼緊濾膜后將培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)過來,放進(jìn)37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培育24±2小時(shí)。觀察培養(yǎng)基時(shí)選取符合以下特征菌落進(jìn)行革蘭氏染色并進(jìn)行鏡檢:紫紅色、具有金屬光澤的菌落；深紅色、不帶或者略帶金屬光澤的菌落；淡紅色、中心顏色較深的菌落。如果存在經(jīng)過革蘭氏染色的無芽胞桿菌陰性結(jié)果，就將陰性結(jié)果的菌種接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，在37℃恒溫條件下培育24小時(shí),如果有產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌種，就可以判定為總大腸菌群陽性。使用改變培養(yǎng)條件的方式將存在于在自然條件下的大腸菌群與可以在排泄物中存活的大腸菌群區(qū)別開，在44.5℃條件下培養(yǎng)仍有存活的大腸菌群，則可以認(rèn)為檢測成功。1.3.3多管發(fā)酵法首先需要配置乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，將稱量好的蛋白胨，牛肉膏，乳糖以及氯化鈉溶于蒸餾水中，待充分溶解后攪拌均勻，一邊攪拌一邊加入溴鉀酚紫乙醇溶液。當(dāng)全部混合均勻后將培養(yǎng)液分裝于有倒管的試管中，高壓滅菌20分鐘。滅菌可放在冷暗處備用。除蒸餾水外其他藥劑分量加倍，所制得為二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。取一個(gè)大燒杯添加1000mL蒸餾水并進(jìn)行水浴加熱，準(zhǔn)確稱量10g蛋白胨、2g磷酸氫二鉀、20g瓊脂并加入其中攪拌均勻，當(dāng)藥品全部溶入后檢測并校正培養(yǎng)基PH為7.2，加入10g乳糖，混勻后分裝，高壓滅菌20分鐘。需要使用培養(yǎng)基時(shí)先加熱融化，放置變冷到50-55℃時(shí)，按一定比例加入伊紅美藍(lán)混合液，搖勻后倒入培養(yǎng)皿。此為伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基。另外檢測耐熱大腸桿菌需配置EC培養(yǎng)基。將20g胰蛋白胨、5g乳糖、1.5g三號(hào)膽鹽、4g磷酸氫二鉀、1.5g磷酸二氫鉀、5g氯化鈉全部精確稱量后，取一大燒杯加入1000ml蒸餾水并水浴加熱，加入藥品的同時(shí)不斷攪拌直到充分均勻溶解，分裝入帶有小倒管的試管并高壓滅菌20分鐘，最終測定pH為6.9±0.2即可。此法所制成的培養(yǎng)基為EC培養(yǎng)基。取10

ml.水樣接種到10

ml.二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，取1

ml.水樣接種到10

mL乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另取1

mL水樣注人到9

mL滅菌生理鹽水中，混勻后吸取1

mL(即0.1mL水樣)注入到10

mL乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中,每一稀釋度接種5管。檢驗(yàn)水源水時(shí)，肉眼可見的嚴(yán)重污染，應(yīng)加大稀釋度，可接種

1、0.1、0.01

mL甚至0.1、

0.01、0.001

mL每個(gè)稀釋度接種5管，每個(gè)水樣共接種15管。接種1

mL以下水樣時(shí)，必須作10倍遞增稀釋后,取1mL接種。每遞增稀釋一次，換用1支1

ml.滅菌刻度吸管。而水樣是明確知道已經(jīng)處理過的，例如礦泉水等，可直接接種5份水樣到二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)基上，每份接種10

mL水樣。將接種管放置在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24

h±2

h，如果所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸，則可報(bào)告為總大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則進(jìn)行分離培養(yǎng)。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，于36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18到24小時(shí)，.觀察菌落形態(tài)，挑取符合相應(yīng)特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實(shí)試驗(yàn)。經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,同時(shí)接種乳糖蛋白脹培養(yǎng)液，置36℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24

h±2

h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實(shí)有總大腸菌群存在。同樣改變溫度培養(yǎng)條件為44.5℃，仍可以存活的大腸菌群則為耐熱大腸菌群。根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)。查MPN(most

probable

number最可能數(shù))檢索表，報(bào)告每100

ml水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)值。將測定總大腸菌群的乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中全部產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌種取來，每個(gè)菌種都吸取1滴分別滴在不同的EC培養(yǎng)基中，放置在44.5℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24±12小時(shí),如果所有選取的菌種經(jīng)過培養(yǎng)后均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告結(jié)果為陰性,如果發(fā)現(xiàn)有產(chǎn)氣的培養(yǎng)基，則將產(chǎn)氣的菌種轉(zhuǎn)接種在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，再次放在44.5℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，但是本次培育時(shí)間為18-24小時(shí)，如果培養(yǎng)基上有典型大腸菌群特征的菌落出現(xiàn)，則證明該菌落為耐熱大腸菌群，并且結(jié)果為陽性。稀釋樣品在表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。所有乳糖發(fā)酵管均得出陰性結(jié)果時(shí)，可報(bào)告水樣中未檢測出大腸菌群。2結(jié)果與討論2.1菌落總數(shù)結(jié)果利用平板計(jì)數(shù)法對(duì)上述的樣品進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)后，得到以下結(jié)果，見圖2-1。圖2-1不同地點(diǎn)水樣的菌落總數(shù)可以明顯看出校園內(nèi)的珍珠湖與柳溪內(nèi)存在大量微生物菌落，正如預(yù)先所想。可能因?yàn)槠渌w流入和生活垃圾的進(jìn)入使水質(zhì)受到污染。而自來水只有一點(diǎn)點(diǎn)雜菌，可能是取樣時(shí)受到了污染或是檢測偏差。而礦泉水和蒸餾水平常是放心直飲和使用的，最終結(jié)果也不負(fù)眾望沒有任何雜菌，也證明了多道凈化流程都是有效的。2.2濾膜法測定結(jié)果腸菌群結(jié)果根據(jù)培養(yǎng)基的記錄結(jié)果以及計(jì)算式計(jì)算，可得出水樣中大腸菌群最可能數(shù)值。將得到的數(shù)據(jù)以每100mL所測水樣計(jì)算，進(jìn)行總大腸菌數(shù)（CFU/100mL）報(bào)告。見表2-2。總大腸菌群菌落數(shù)計(jì)算式已在下方列出。總大腸菌群菌落數(shù)（CFU/100mL）=數(shù)出的總大腸菌群落總數(shù)×100表2-2濾膜法測定大腸菌群以及耐熱大腸菌群取樣地點(diǎn)總大腸菌落數(shù)耐熱大腸菌群數(shù)校園內(nèi)柳溪上游校園內(nèi)珍珠湖校園內(nèi)自來水礦泉水蒸餾水18001400150005803203000與菌落總數(shù)大致相同，柳溪與珍珠湖內(nèi)大腸桿菌較多。柳溪因?yàn)閺纳嫌无r(nóng)田與施工區(qū)帶入肥料等垃圾易造成細(xì)菌滋生所以大腸桿菌最多。而珍珠湖內(nèi)雖然沒有其他水體流入造成污染，但仍會(huì)有自然垃圾和生活垃圾進(jìn)入，以及得不到及時(shí)更新以及補(bǔ)充氧氣，從其他方面造成了細(xì)菌滋生。而自來水因?yàn)樗∷畼迎h(huán)境影響可能造成誤差所以有一點(diǎn)點(diǎn)大腸桿菌，但是自來水水質(zhì)可以放心日常使用，但建議還是不要直飲。而礦泉水和蒸餾水內(nèi)本就沒有任何菌落所以也不存在任何大腸桿菌菌群。2.3多管發(fā)酵法法測定結(jié)果多管發(fā)酵法結(jié)果根據(jù)培養(yǎng)基的記錄結(jié)果以及計(jì)算，可得出水樣中大腸菌群最可能數(shù)值。見表2。表2多管發(fā)酵法測定大腸菌群以及耐熱大腸菌群取樣地點(diǎn)總大腸菌落數(shù)耐熱大腸菌群數(shù)校園內(nèi)柳溪上游校園內(nèi)珍珠湖校園內(nèi)自來水礦泉水蒸餾水1900130090005204602000同樣以多管發(fā)酵法測定，可以驗(yàn)證濾膜法所得結(jié)果大致正確，而不同方法產(chǎn)生的誤差可能來源于多管發(fā)酵法的多次稀釋以及不同管之間的誤差。同樣我們可以看出柳溪與珍珠湖的大腸桿菌很多，而自來水可能因?yàn)檩斔团c獲取的過程中帶有了一點(diǎn)大腸桿菌，而礦泉水和蒸餾水則是完全沒有雜菌。3結(jié)論3.1結(jié)果討論參照《地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》不難看出，柳溪與珍珠湖水質(zhì)一般，且微生物超標(biāo)。校園內(nèi)自來水水質(zhì)正如預(yù)料，可以稱為良好，指標(biāo)沒有超標(biāo)，并未受到污染，可以放心直接使用。而礦泉水與實(shí)驗(yàn)室蒸餾水是直接飲用水和實(shí)驗(yàn)用水，有著極為嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)過了多道處理與凈化流程，所以水質(zhì)極為優(yōu)秀，幾乎沒有任何微生物生存。柳溪污染原因大概為從上游攜帶了各種垃圾以及肥料，造成了多種菌種的滋生，且因?yàn)閮蓚?cè)有下水道、水位低以及周圍施工等多方面原因?qū)е铝獌?nèi)容易堆積廢物和受到污染，故檢測出微生物指標(biāo)超標(biāo)，有大量的微生物菌群。珍珠湖水質(zhì)比柳溪稍好，因?yàn)楹疄樗浪瑑H靠雨水進(jìn)行更新，很難受到其他水體的污染，但是相對(duì)的，因?yàn)樘鞖庠蚝疅o法得到充分更新，水中的含氧量不足導(dǎo)致無法自凈，再加上可能有落葉等自然垃圾進(jìn)入，就出現(xiàn)了懸浮物和微生物污染，且可以看出因?yàn)闆]有其他水體的污染所以耐熱大腸菌群較少。自來水主要來源為地下水，很難受到污染，且周圍沒有污染源，在經(jīng)過自來水公司的嚴(yán)格管控與處理之后可以認(rèn)為自來水的水質(zhì)沒有問題。而礦泉水以及實(shí)驗(yàn)室的蒸餾水經(jīng)過多道程序凈化后直接分裝和儲(chǔ)存，在良好的密封環(huán)境中很難受到污染。另一方面可能因?yàn)閷?shí)驗(yàn)過程中稀釋、涂布或觀察等環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生誤差，甚至是取樣過程中受到一定程度的干擾，所以微生物檢測出的數(shù)據(jù)并不準(zhǔn)確，所以為最可能數(shù)值，并以此進(jìn)行比較。3.2水質(zhì)的治理與保護(hù)建議為了能讓校園環(huán)境更好,我認(rèn)為應(yīng)加強(qiáng)對(duì)對(duì)校園內(nèi)水質(zhì)的保護(hù)與治理。（1）例如減少向柳溪內(nèi)排放生活污水。有計(jì)劃、有條理的清理水體中的垃圾和浮游生物。減少生活垃圾的進(jìn)入，防止大量的微生物滋生。在珍珠湖岸邊時(shí)也是如此，不能隨意丟棄垃圾，多進(jìn)行掃除工作以免垃圾進(jìn)入湖水加重污染，加強(qiáng)對(duì)水體環(huán)境的保護(hù)。（2）在學(xué)習(xí)生活之余,可以在校內(nèi)舉辦一些有關(guān)水質(zhì)保護(hù)的活動(dòng)，也可以開設(shè)一些