沙棗多糖對小鼠免疫功能影響的研究【摘要】目的研究沙棗多糖(EAPS)對正常小鼠免疫功能的影響。方法將沙棗多糖分為3個劑量組(60，120，240mg·kg-1)，連續(xù)給小鼠ig7d，進(jìn)行免疫臟器指數(shù)的檢測、碳粒廓清試驗、血清溶血素形成和綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)，探討沙棗多糖對正常小鼠免疫功能的影響。結(jié)果沙棗多糖能顯著提高小鼠免疫臟器指數(shù)，單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能，增強小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)，促進(jìn)溶血素的生成。結(jié)論沙棗多糖能提高機體的非特異性和特異性細(xì)胞免疫功能。

【關(guān)鍵詞】沙棗多糖免疫功能

沙棗ElaeagnusangustifoliaL.又名香柳、桂香柳、銀柳、七里香等，屬胡禿子科落葉小喬木或灌木，在西北各省的干旱沙區(qū)廣為栽培。據(jù)《新疆中草藥手冊》記載，沙棗能“強壯，鎮(zhèn)靜，固精，健胃，止瀉，調(diào)經(jīng)，利尿”。維吾爾醫(yī)多將其用于脾胃虛弱，消化不良，腸炎腹瀉等疾病的治療［1，2］。目前沙棗主要是以食用為主，其深加工還沒有得到充分的開發(fā)利用。為了提高沙棗產(chǎn)品的附加值，石河子大學(xué)投入大量精力對沙棗進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)沙棗中含有豐富的沙棗多糖，對動物具有良好的免疫保健功能。為了開發(fā)這一藥用資源，我們將沙棗多糖作用于小鼠，通過測定以觀察對小鼠免疫器官脾、胸腺指數(shù)、單核巨噬細(xì)胞吞噬功能、血清半數(shù)溶血值、遲發(fā)型超敏反應(yīng)功能的影響，為中藥有效成分的進(jìn)一步研究提供理論基礎(chǔ)。

1材料與儀器1動物昆明種小鼠，8～12周齡，體重18～25g，雌雄隨機，石河子大學(xué)實驗動物中心提供。2試劑丙酮，烏魯木齊化學(xué)試劑廠產(chǎn)品；石油醚，烏魯木齊化學(xué)試劑廠產(chǎn)品；印度墨汁，北京篤信精細(xì)制劑廠產(chǎn)品；綿羊紅細(xì)胞懸液，石河子大學(xué)實驗動物中心提供；Alsever′s血球保存液，按常規(guī)配制；都氏試劑，高鐵氰化鉀ｇ，加水至1000ml，4℃保存；補體。3儀器KQ-250型超聲波提取儀，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；SENCOR502B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海申生科技有限公司產(chǎn)品；SartoriusBS210S電子天平，北京塞多利斯天平有限公司產(chǎn)品；SHZ-C型循環(huán)水式多用真空泵，鞏義市英欲予華儀器廠產(chǎn)品；722型光柵分光光度計，上海精密科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；鍍鉻游標(biāo)卡尺，湖北省教學(xué)儀器廠，精密度mm。

2方法

沙棗多糖的提取稱取沙棗粉末g，加少量水浸泡24h濕潤。加入石油醚L，在超聲循環(huán)提取儀中提取30min，過濾。在濾渣中加入95%的乙醇L，超聲提取30min，過濾。在所得濾渣中加入蒸餾水L，超聲提取30min，重復(fù)用水提取3次。提取完畢后過濾、合并濾液，在旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀上減壓濃縮至200ml。加入95%的乙醇使溶液中乙醇含量達(dá)到80%，低溫靜置過夜，抽濾，濾渣分別用乙醚、丙酮、無水乙醇洗滌數(shù)次，得灰白色粉末樣物質(zhì)，放入烘箱中于60℃干燥備用。由苯酚-硫酸法測得提取物中沙棗多糖含量為％。

檢測項目及方法

實驗動物分組及給藥方式本實驗設(shè)計了高、中、低3個劑量組(每組10只)，即小鼠每日每只經(jīng)口給予(加入飲水法)沙棗多糖60mg·kg-1體重/體重

胸腺指數(shù)=胸腺重量/體重

單核巨噬細(xì)胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的測定［4］末次給藥后1h，稱體重，各鼠均按ml/10g劑量由尾靜脈注入印度墨汁，注射后分別在1min(t1)、5min(t2)從小鼠眼眶靜脈叢取血20μl，溶于ml%Na2CO3溶液中搖勻，放置20min后于680nm處測其吸光度值，以%Na2CO3溶液做空白對照，將小鼠處死后取肝臟和脾臟，用濾紙吸干血跡后稱重，根據(jù)公式計算廓清指數(shù)K值和校正廓清指數(shù)α值。計算公式：K＝／(t2－t1)；α＝K1/3×體重/

小鼠血清溶血素的檢測［5］給藥第3天，每鼠腹腔注射2％SRBCml致敏，并繼續(xù)給藥。致敏后第4于末次給藥后90min取小鼠眼球血，靜置1h，2000r/min離心10min，取上層血清20μl，用NS稀釋500倍，取此血清樣1ml作為補體，37℃溫浴1h，反應(yīng)結(jié)束，將反應(yīng)管立即移入冰浴中，以終止反應(yīng)，以2000r/min離心10min，取1ml上清液盛于由3ml都氏試劑的試管搖勻，放置10min后于540nm測其吸光度值。計算小鼠的半數(shù)溶血值。

樣品HC50=(樣品的吸光度值/SRBC半數(shù)溶血時的吸光度值)×稀釋倍數(shù)

遲發(fā)型超敏反應(yīng)檢測按文獻(xiàn)方法［6］給藥第3天，每鼠腹腔注射2％SRBCml致敏，并繼續(xù)給藥。致敏后第4日取20％SRBC50μl懸液注射在小鼠右側(cè)足墊皮下，左側(cè)注射50μl生理鹽水，24h后用游標(biāo)卡尺測定小鼠左右足墊厚度之差為腫脹程度。同一部位測量3次，取平均值。

3結(jié)果

對小鼠免疫器官的影響結(jié)果顯示EAPS各劑量組均能增加小鼠胸腺和脾臟的重量。與對照組胸腺指數(shù)比較，EAPS在120mg·kg-1和240mg·kg-1劑量組有顯著性差異()；而60mg·kg-1劑量組無顯著性差異()；與對照組脾臟指數(shù)比較，EAPS在120mg·kg-1劑量組，呈極顯著性差異()；60mg·kg-1和240mg·kg-1劑量組，均有顯著性差異()。

表1沙棗多糖對小鼠免疫器官的影響

與對照組比較,*，**；n=10

對小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能(碳粒廓清速率)的影響由表2數(shù)據(jù)可知，EAPS各劑量組均能明顯提高廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)。與對照組比較，EAPS的120，240mg·kg-1劑量組廓清指數(shù)均達(dá)到極顯著水平()，EAPS的60mg·kg-1劑量組的廓清指數(shù)也達(dá)到了顯著水平()。EAPS各劑量組對小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能的增強作用，以120mg·kg-1劑量組最為顯著。

表2沙棗多糖對小鼠碳粒廓清的影響

與對照組比較,*，**；n=10

對小鼠血清溶血素及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響由表3可知，EAPS在240mg·kg-1劑量組的半數(shù)溶血值與對照組差異極顯著，120mg·kg-1劑量組與對照組的差異顯著，60mg·kg-1劑量組的半數(shù)溶血值只是略有升高，差異不顯著。60mg·kg-1劑量組足跖腫脹度差值明顯高于對照組，60mg·kg-1劑量組和240mg·kg-1劑量組足跖腫脹度差值與對照組相比差異顯著。

表3沙棗多糖對小鼠血清溶血素及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

與對照組比較，*，**；n=10

4討論

多糖類化合物是生物體的重要結(jié)構(gòu)成分，主要影響機體的網(wǎng)狀內(nèi)上皮系統(tǒng)和蛋白質(zhì)的合成及抗體的生成，含有激活淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞，具有促進(jìn)細(xì)胞因子的生成，改善機體的免疫功能的作用［7，8］。本實驗采用連續(xù)經(jīng)口給藥的方式進(jìn)行免疫相關(guān)指標(biāo)的測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)多糖給藥劑量為120mg／kg時受試物能明顯升高小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，這將對提高機體的免疫功能有一定的影響，因為胸腺是T細(xì)胞分化成熟的場所，也是機體細(xì)胞受抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答的部位［9］。

溶血素作為抗綿羊紅細(xì)胞抗體，經(jīng)綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)由小鼠體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，溶血素生成的增加，反應(yīng)了RP對免疫反應(yīng)較后期階段抗體分泌細(xì)胞形成具有增強作用。SRBC作為半抗原接觸皮膚與皮膚蛋白結(jié)合成為完全抗原，使T淋巴細(xì)胞致敏，因此遲發(fā)型超敏反應(yīng)是由特異性致敏效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，是檢測細(xì)胞免疫功能的常用方法之一。實驗數(shù)據(jù)說明沙棗多糖可以顯著增強小鼠抗體分泌細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力，從而增強小鼠的體液免疫，并可明顯增強由T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。

單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的標(biāo)志之一。當(dāng)細(xì)菌、異物等抗原性物質(zhì)進(jìn)入機體后，可迅速被單核巨噬系統(tǒng)吞噬和清除，其消除的速率反映了吞噬功能。實驗結(jié)果，沙棗多糖能顯著增加小鼠的廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)，其免疫調(diào)節(jié)機理值得深入探討。

實驗顯示，灌服沙棗多糖能顯著提高小鼠單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能，增強小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)，促進(jìn)溶血素的生成，以增強機體的特異性和非特異性免疫功能。沙棗多糖對小鼠的免疫功能有明顯的調(diào)節(jié)作用。

【參考文獻(xiàn)】

［1］黃俊華,買買提江,楊昌友,等.沙棗研究現(xiàn)狀與展望［J］.中國野生植物資源,2005,24(3):26.

［2］辛艷偉.沙棗的開發(fā)和利用［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(2):399.

［3］沈關(guān)心,周汝麟.現(xiàn)代免疫學(xué)實驗技術(shù)［M］.武漢:湖北科學(xué)技術(shù)出版社,2002：396.

［4］徐叔云.藥理實驗方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,1991：1233.

［5］陳奇.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002：315.

［6］林飛卿.醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)免疫學(xué)