發酵工程FermentationEngineering第二章發酵工業菌種本章內容

一、常用的工業微生物二、發酵工業菌種篩選的原則與基本技術三、發酵工業菌種改良最常用的工業微生物細菌醋酸桿菌屬制醋工業的菌種乳酸桿菌枯草桿菌丙酮丁醇梭菌大腸桿菌谷氨酸棒狀桿菌假單胞菌熒光假單胞菌熒光假單胞菌(P.fluorescens)屬于假單胞菌屬rRNAI群熒光DNA同源組，是植物根際最普遍的微生物類群，具有分布廣、數量多、營養需要簡單、繁殖快、競爭定殖力強的特點。熒光假單胞菌，而且許多菌株能產生幾種活性物質，抗多種植物病害。其作用機制包括：抗生素的作用、噬鐵素對鐵的營養競爭、有效的根際定殖等。世界許多國家均有人報道分離到抗植物病害的熒光假單胞菌,而且許多菌株能產生幾種活性物質,如抗油菜菌核病的菌株。銅綠假單胞菌（綠膿桿菌）谷氨酸發酵菌種日前用于谷氨酸發酵的菌種有谷氨酸棒桿菌、乳糖發酵短桿菌、黃色短桿菌、嗜氨小桿菌、球形節桿菌。我國常使用的生產菌株是北京棒桿菌AS1.299、北京棒桿菌D110、鈍齒棒桿菌A51.542、棒桿菌S-914和黃色短桿菌T6~T13等。在己報道的谷氨酸生產菌中，除芽孢桿菌外，雖然它們在分類學上屬于不同的屬種，但都有一些共同的特點，如菌體為球形、短稈至棒狀、無鞭毛、不運動、不形成芽孢、呈革蘭氏陽性、需要生物素做生長因子、在通氣條件下培養產生谷氨酸。谷氨堪酸發酵片機制谷氨粱酸的梳生物栽合成品途徑歇大致嫩是：途葡萄杜糖經EM痛P途徑或HM礦P途經帖生成瓜丙酮擇酸→振再氧嶼化成蜓乙酰東輔酶A→然后夾進入TC殼A→再通需過乙醛軟酸循醫環、CO查2固定作寺用→生宇成a-酮戊叢二酸瘦→谷氨孔酸脫敘氫酶的催朽化及趟有NH匪4+存在造的條貍件下掛生成魚谷氨屆酸谷氨涉酸生面產菌鋪能夠鐘在體痛外積闊累菌竹體最恩大生撕長需蜘要量30背0多倍箱的谷投氨酸丸，研賞究發黑現：曲大量鉛積累繞并非含是當躲初設軟想的蹲由于光特異霉代謝攔途徑趟導致勵，而抗是：代謝生調節為控制；細胞拉膜通松透性焰的特財異調廢節；發酵搭條件肝的適防合。谷氨食酸菌種唐的定旨向選車育改變蘇細胞靠膜的墓通透珍性：生物晝素（太乙酰Co規A羧化用酶的流輔酶斷）營糠養缺眨陷型貍株喪失幕脂肪加酸合佳成酶寧的油舟酸缺便陷型；喪失a-磷酸使甘油愁酶的忍甘油列缺陷基型。選育控溫度鋒敏感陶突變盤株：例：蹄使用學典型泊的溫花度敏攀感突泥變株TS名-8莊8生產收谷氨酸時宿，通日過控夫制發醫酵條派件，杯在生鴉長適翅當階礙段將莖發酵溫樓度由30℃提捕高到40℃，可在旅生物工素含拍量為33福ug缺/L，含毯糖3.越6%的甜復菜糖圣蜜發致酵培走養基曬中，產生20辟g/陵L谷氨除酸，練對糖個轉化病率>5吸5%。生物中素對硬谷氨狼酸發紐奉酵的爆影響生物仆素作為村催化脂肪指酸生冬物合接成最初女反應夠的關駛鍵酶——乙酰Co脊A羧化將酶的泡輔酶，參旅與了宴脂肪剛酸的衛生物合佩成，石進而財影響突磷脂脈的合旺成。氣當控盾制生源物素保在亞適量妨時，悠脂肪盤酸合誦成就禍不完不全，您導致盞磷脂嶼合成灰不完全。而細射胞膜岸是由補磷脂揚雙分被子層麥組成凱的，惜當磷棄脂含量減搞少到鍬正常考時的翅一半抖左右隱時，杜細胞察發生嘩變形秤，谷氨酸提能夠食從胞幼內滲糠出、糠積累食于發禽酵液價中。會如果遭生物素過群量，筑則發個酵過提程菌庸體大嶄量繁討殖，螺不產章或少肉產谷氨酸草，代誰謝產仆物中至乳酸院和琥伶珀酸穴明顯正增多。生物毀素亞攜適量轎的原則因（2u殃g/騾L~掩5u增g/勻L）：當生遺物素反缺乏距時，叢菌種需生長典十分恰緩慢；當生抄物素蘇過量迎時，阻則轉手為乳后酸發因酵。在谷午氨酸握發酵介過程氧中，豎影響見菌種蛙代謝素途徑卻的因素蠟見下旦表。第3暮6頁腦，共書69腹頁防止鋼噬菌炊體和語雜菌閉的污恰染谷氨爺酸生切產菌甲一般都鋸是生莖物素潮缺陷甲型，欣而在屠發酵培泊養基再中又游大多歇是控絞制生虜物素斤亞適化量，考所以谷氨瀉酸生短產菌粘對噬碌菌體浙和雜荒菌的敲抵抗胃能力纖較弱。最怕富污染箭噬菌戀體，材輕則舍出現盤谷氨鈴酸收漫率低譯、難提取忠，重斗則倒偏罐，滅造成退很大見的經奏濟損醒失。括所以，冒雜菌曲和噬僚菌體鍛的防報治工弦作就街顯得嗚特別愁重要。一定血要從器空氣稻過濾蠻、培餃養基抬、設溜備、回環境宴等環節嚴紐奉格把色關。最常用送的工吊業微心生物酵母讓菌釀酒嘗酵母假絲輩酵母煩屬產朊相假絲溉酵母解脂證假絲朝酵母熱帶伍假絲協酵母畢赤渾酵母貸屬、撒漢遜柜酵母枝屬：育酒精巨發酵要工業騎及釀膝造工砍業的遙有害側菌1、酵騙母菌件形態夜：酵母命菌是易一群祥單細騎胞的級真核遮微生犯物,其形蓮態因種燈而異.通常巨為圓旨形、鋪卵圓護形或猜橢圓唇形。也有欺特殊扇形態就，如辨檸檬蹦形、幣三角閉形、菠藕節淡狀、系臘腸冷形，章假菌騾絲等餐。酵母惜菌假菌注絲:酵母格菌在嶼一定距條件土下培壺養，餓產生晨的芽逮體與謠母細屢胞不滑分離就形成注的特種殊形歷態。啤酒揉酵母央的菌珍落紅酵敏母的彎菌落各種屯酵母戲菌的薦菌落酵母飯菌菌賊落最常用伍的工境業微哨生物霉菌曲霉問屬米曲米霉黑曲塔霉青霉齊屬青霉涂菌：釘點青紛霉、織產黃冬青霉桔青午霉根霉抱屬德氏屈根霉米根甜霉、剝小麥胡曲根尸霉紅曲茶霉屬紫紅達曲霉最常用漢的工沫業微蹄生物放線撈菌鏈霉國菌屬小單奮孢菌驢屬地中欺海諾獨卡氏陵菌米蘇工里游石動放棕線菌未培懸養微例生物定義朵：指禿迄今摔所采班用的攜微生筍物純光培養僅分離剪及培險養方跌法還扔未獲開得純奔培養壇的微槽生物融，其誦在自酒然環隔境微馳生物幫群落狐中占庸有非深常高載的比養例，杯約為99％。研究它方法①模膛擬自辭然培顏養法:原位靠培養臭、培乳養條培件優佛化、單細孕胞操彼作②宏續基因葬組分云析法二、班發酵聯工業薯菌種船分離潤篩選賞原則的與基廈本技園術（一）發酵祝工業水菌種脆篩選肢的總糟趨勢敬與要疫求（二）分離側篩選決原理鮮與技蛾術（三）應用界舉例1.菌種隙選擇沸的總籮趨勢野生駐菌→饞變異晚菌自然接選育兔→代每謝控族制育眠種誘發話基因廢突變拾→基牲因重襲組的徐定向杯育種純凈健壯產量質量穩定2易于控制培養條件,周期短3對誘變劑敏感4抗污染力強5原料廉價,生長迅速,目的產物產量高6不是病原菌12、微屋生物磚工業蔑對菌廳種的里要求7產物分泌型工業研菌種噸的改壺良方隱法解除臂或繞輩過代筍謝途闊徑中繪的限呈速步哭驟：鳥通過睡增加標特定倚基因修的拷濱貝數逮或增乖加相浩應基皇因的撒表達繁能力蓄來提命高限嶺速酶估的含蕩量；垮在代拘謝途責徑中犯引伸長出新小的代恥謝步膽驟，泉由此度提供妻一個揀旁路允代謝孟途徑濾。增加園前體蜘物的做深度棋。改變棗代謝械途徑褲，減菊少無佳用副睛產品阿的生胡成以型及提哲高菌雀種對驢高深廳度的震有潛貍在毒宇物的辛底物慣、前歪體或菜產品妥的耐梅受力僅。抑制瓶或消酒除產歪品分棚解酶飄。改進畝菌種漆外泌麗產品檔的能刷力。消除酸代謝即產品返的反涌饋抑夸制，軋如誘忽導代董謝產苗品的查結構革類似越物抗論性。工業切菌種羅的改旅良方之法（二猜）分離肺篩選郵原理鋤與技刻術1.篩選忘的指導脆思想2.分離臭篩選每工作譯在實懇際中栗應用無的幾榆個方設面3.新種腿分離男篩選您原理創與技扭術1.篩選需的兩瘋種指辦導思粒想先分預離純虜化，明再結酸合工穩藝要理求進拌行篩旱選。分離由純化唯同時椅富于軋篩選脈條件歪，一寨步得轎出所別需菌曠株。結果脊有兩躍種可廳能：獲得渾適于謝工業適發酵嚷菌株只獲作得選火育所稱需的洲出發塵菌株2.分離權篩選冶工作果在實恐際中兄應用萍的幾粥個方鏈面從被闊污染否的生裝產及鋸科研合用菌略中分險離目告的菌跑；生產積中長芬期使翁用的亂菌種柄的定馬期分裳離篩碌選；從各嬌種育絡種方屬法處舅理的訊微生仰物材和料中助分離梳篩選罪適于趨工業毯目的悲的優舒良菌純株；從保甲藏機獅構獲攔取菌疼種好處富：經屆濟性均、指敘導性從已不知菌靈種和雜大自亞然中痕分離爸新菌蜻株尋找永新的頭發酵砍產品蹲的產叮生菌深；尋找冬老產圍品的姑新的臟優良罷菌株經。國際焦承認訊的中穗國培饑養物丘保藏敗單位武漢況大學騰的撿中國熱典型銀培養所物保吵藏中滑心CC需TC以C。保牧藏了撥幾乎肅所有航的培宮養物赤。(CCTCC)國際墨承認曠的中任國培幟養物暢保藏曾單位中科尖院微叨生物箭研究棍所的泊中國史普通低微生皂物菌汗種保貪藏管顯理中肆心CG傅MC延C。保個藏有競普通僻菌種項。(CGMCC)此外栗，較披著名跪的中言國培坡養物病保藏巧單位釣還有中國撓微生余物菌叉種保談藏管公理委夠員會CC失CC尖M—弄—管理開機構3.新種癢分離涼與篩倡選的僻步驟調查貍研究摸（包征括資語料查趟閱）試驗店方案灰設計含微址生物上樣品高的采票集（如綱何使度樣品展中含由所需加微生物梁的可芬能性否大？郵）樣品挪預處校理（如何瓶在后圖續的仁操作還中使每這種揮可能性愈實現降）菌種茅分離根據國目的兔菌株垮及其敏產物咽特點壺分選擇泡性分術離方泳法未隨機欺分離驚方法(定向聲篩選士←選災擇壓歐力)(用篩企選方伍案-檢測嫌系統職進行堡間接遵分離惡）富集秘液體快培養合固承體培蜻養基姓條件紙培養(初篩)菌種瓣純化復篩菌種倦純化初步毛工藝覆條件麗摸索樸再復記篩掘生產蘆性能愿測試較優兼菌株1-妙3株保藏區及進肺一步忙做生嫩產試處驗均某些縱必要費試驗陳和或作廢為育醉種的壁出發翠菌株銜毒性創試驗萍等（1）含晉微生弄物樣狐品的遍采集采樣文時應王注意藥的問究題:土壤愛微生紫物的航分布采土辰深度令：5~詠25短cm土壤溝植被仇情況采樣嬌季節土壤洋的酸稿堿度對于躺分離帽篩選姻新菌撓種，出還存魚在另桐兩個室選擇宇標準填：土壤儉來源焦廣泛在已斬適應議相當總苛刻扁環境姿壓力槐的微哭生物選類群縱中尋密找新咐菌種采樣1、采午樣對價象以采釀集土炸壤為量主。關一般追園田喝土和絹耕作幟過的器沼澤霸土中濾，以關細菌防和放糞線菌從為主書；富憑含碳污水化俘合物慰的土鈔壤和逗沼澤普地中乳，酵繞母和莊霉菌彎較多偉，如事一些享野果戰生長婦區和掉果園位內。租采樣園的對竭象也倡可以貌是植股物，朋腐敗犬物品雙，某華些水椅域等通。細菌繡（108）>放線廣菌（107）>霉菌榆（106）>酵母今菌（105）>藻類省（104）>原生駱動物積（103）從自舒然界籮篩選2、采艱樣季蝴節：擔以溫掘度適噴中，念雨量叨不多誓的秋扒初為轟好。3、采魄土方并式：球在選夸好適壓當地澇點后秤，用桃小薩四子除算去表食土，擱取離玻地面5-蒜15到cm處的提土約10濃g，盛入徒清潔謠的牛奸皮紙城袋或索塑料任袋中烤，扎陜好，享標記泊，記氣錄采丙樣時犯間、血地點金、環妹境條太件等且，以研備查錢考。暴為了浩使土肚樣中桌微生旺物的亞數量斬和類另型盡嫩少變蓮化，憐宜將舍樣品辣逐步煎分批供寄回谷，以鹽便及冶時分從離。（2）樣羞品的預處竄理目的針：提耕高分祖離效飽率方法怕：物理醒方法破：熱夫處理架；膜嘴過濾學法；碰離心夫法化學搶方法勇：化鋼學成紅分增毫加特博定微血生物爽的數銳量誘餌猴法：半富集析目的列菌膜過州濾法當樣粱品中勾菌數杰很低敞時,可以秀將一蓄定體正積的壁湖水拆、海艘水或票飲用絨水等率樣品藏通過隔膜過題濾器,然后冶將將仆膜轉山到相酸應的豬培養版基上印進行盟培養,對形甜成的窄菌落圈進行溜統計跨。例如喪：放分線菌庫的分扎離篩婚選，睡培養并基的盲組成糟原則大多登數放庸線菌釘的分逐離培爪養是俘在貧遮脊或廚復雜駛底物珍的瓊病脂平橡板上車進行菠的。羞除嗜敞溫性拌放線猜菌外四，其榴他放畢線菌釋一般廣在培順養4-委20天內額在分革離平燈板上殖緩慢草形成與菌落咽。在放窄線菌繪分離屆瓊脂茂中通半常都聰加入雞抗真漫菌劑辯制霉違菌素定或放扒線菌俗酮，循以抑互制真煮菌的殖繁殖豬。選擇避性地削添加紋抗生額素。分離小瓊脂舞平板丑制備裁好后褲，一昨般皆尾應在37挪℃培養繡箱中淋存放3天。放線添菌的非分離土樣灘中放盲線菌亭的非能選擇材性分緊離：蠢土樣潤風干寸，磨戚碎，壓無菌腐海綿玻壓印簡土樣部后壓歐印平獵板后但培養漂。植物雨體上按放線挎菌的絞分離纖：無川菌取艱植物椅組織情，干券燥以得減少煮細菌籮數量計，剪文碎植憂物材崖料后首植入漆平板鹿表層糖后培臭養。越也可巧洗下侄微生型物后莫振蕩尺培養相。水中鮮放線填菌的孩分離帖：激為使綁所要窯分離摩的放納線菌訓的數啟量種勝類增逼多，突一般系將水遇樣離線心或肺濾紙把過濾念，取艘離心調沉積咬或濾懲紙表院面沉恨積進歡行系禍列稀廢釋和態涂布決。次代綠培養喪及純悅化菌落辱形成庸后可劃根據盛肉眼甲可見贊的菌搖落形喚態上違的差壁異，泰作初憶步的授鑒定怨和區青分。通過發高倍嫌放大廊進行繭鏡檢該，可希了解斃氣生湯和營嗽養孢例子形競成情茅況。成功桐地分委離出芽各種跨不同偶的放廢線菌旅屬及子種的玩關鍵例是所懼采集案樣本從的本老身及沿其分級離用業的瓊槐脂培慈養基室；而裂肉眼向識別駐不同名的生掛長形倍態、道從而甚初步隊地加陰以鑒營定，盟在分榨離放盞線菌蘿時顯潛得尤禾為重添要。將分苦離平凍板上癢所形礎成的刪菌落比用經水火焰附灼燒晌滅菌踢的鉤昏形針孕或無朱菌牙腦簽挑必取，傻點接雞到瓊內脂平劈燕板上扮進行蓮影印媽培養扭，以嚴進一體步篩施選和筑分離蓄。（3）分費離方脊法的幅選擇根據軍目的謹菌有呢無選花擇性宵特征杯來選您擇分錄離方壇法菌種傷的營媽養特書征獨箱特生長齒特征摩獨特無選擇熟性特葉征必根據庭產物淘的特筍征進椒行隨機僵分離選擇芝性分焦離的獅關鍵抹：生舌長培益養條牢件的留選擇惕與控瞧制，筋從而撒實現蔬定向呀富集橫篩選為。選擇俊性分健離A、選擇載性分帆離原消理和置技術1、生央長條富件的贈選擇是與控底制原廣理控制敵營養讀成分控制瘦培養宴基酸葵堿度添加遷抑制壓劑控制器培養腸溫度控制懼通氣歲條件2、選猴擇性蜻分離促技術富集騰液體嗽培養技術固體徒培養勢技術施加鹿選擇牌壓力唇，進傾行定牛向篩煮選①富征集液憶體培遭養增加兵混合筑菌群什中所拋需菌暢株數觀量的比一種月技術技術桃特點毒：給混噸合菌我群提結供一屯些有謹利于腳目的轟菌株巾生長驗或不細利于牛目的拆菌以豪外的學其他純菌型喝生長佩的條畝件培養蓮方式分批必培養咱方式銅：以匠最大稿比生鏟長速溫率叫（μma竊x）篩選于，存曉在選照擇壓奶力的令控制慣、移廉種時德間和角次數松等問緩題連續樸培養門方式泰：以稼比生焦長速夸率（μ）篩選μABS0基質凱濃度體對A、B兩種當菌的裳比生叔長速吹率（μ）的影繼響當S<捐S0時，晨富集什么菌株景？當S>閑S0時，花富集什么菌株的？連續歉培養凝方式拐：以舞比生豈長速鄰率μ篩選連續傘富集烘培養們技術陡分離延菌株負的優照點分離借的菌母株特漿別適真合連拴續發錄酵生泡產過痛程有利您于分腿離具扔有某語種工爺業生賓產特星性的譯菌株可以赤篩選友出能抽共生價的穩柿定混食合培蛛養物②固體掉培養夸技術常用袍于分佛離某渠些酶緒產生葛菌選擇字壓力蝕：在番選擇往培養悠基中齊加入扎所需搭酶的譽基質隨機牽分離億原理邊與技架術從產漁物入浴手，遇通過安設計高產靈培養萌基和建敲立快賭速靈近敏專擱一的報篩選搏方法巷，從諒隨機配分離勞的菌墻落中讀篩選辯出所居需的釘目的耽菌。技術關鍵擔：產岔物合鴨成條帖件的箭選擇芽與控盯制及鎖相應物篩選催方法以的確醒定。隨機設分離蚊技術譯舉例抗生陪素產誼生菌伶的篩掀選藥理臂活性伏化合涌物產儲生菌鈴的篩訓選生長夠因子劍產生筍菌的勵篩選多糖撲產生統菌的院篩選高產仇培養檔基設游計的難幾個現原則制備柱一系右列的粥培養百基，息其中豪有各剃種類煤型的如養分閱成為慶生長賴限制陽因素克；使用一聚合初或復造合形塵式的學生長總限制諸養分翅；避免堤使用乏容易蜻同化埋的碳壘源或這氮源體，防普止分禮解代喘謝物險阻遏脹；確定取含有使所需物的輔唉因子瓜（Co2+,M趕g2+,M立n2+,F稅e2+）；使用pH緩沖府劑以墨減少pH變化捎；前體壇、促灘進劑艦及抑歐制劑代的采糖用。抗生蹄素產鏟生菌刮的篩緣瑞選篩選輩模型渠：試驗課菌篩選科方法碰：鋪菌寶法復印抗平板湊法液體垂培養腸篩選抗藥芒性篩選篩選呆模型尸：氨芐探青霉辨素和β-內酰衰胺酶產生宣菌（敢克雷鄰白氏混菌）膽協同I籍II無試貓樣時午（不譜含棒女酸時長），I對II菌作乳用不呈大有試屆樣時萍（含存棒酸突時）躺，I對II菌恢真復藥薪效，祥棒酸耽抑制饅水解恐酶活帆性固體句培養索篩選試驗暢菌娃代表肯微生男物類朱型金黃嗚色葡貞萄球代菌20澇9p革蘭遞氏陽譜性球桐菌枯草惠桿菌66祝33革蘭泥氏陽壤性桿例菌大腸券桿菌妥革辜蘭氏微陰性畫腸道劑細菌恥垢第分枝款桿菌60艷7結核括桿菌白色緩念珠龍菌寺酵堆母狀侵真菌青霉噴菌絲狀組真菌藥理的活性叢化合割物產曾生菌購的篩蜂選藥理毫活性眾化合賭物是勸指能繁抑制胳人類慣代謝志中某挽一個忽關鍵叫酶的城微生河物產啟物即蛋酶抑越制劑鄙，從混而達洋到治宋療的貢目的黑。篩選雕模型跪：目管標酶生長瀉因子呆產生加菌的磚篩選篩選影模型物：營否養缺匙陷型恒試驗佳菌篩選帽方法塌：利鎮用被宣分離譜的微貨生物攏產物鏡能否私促進蕩營養照缺陷歇型試彈驗菌嗓生長氨基坐酸產詠生菌陸的篩視選樣品預處站理初篩逆（除遭真菌刊）在分按離平遞板上賽生長疲獲得捆多個翼單菌號落復印炸平板（co禾py法）平板悲培養票，其承中有直產生綠氨基泳酸的菌玩落分趨泌氨遙基酸對應揀到co啄py前相戚應u.孟v線殺父死長猜好的堂菌落位置洗，找隸到目餐的菌減落再鋪暗上一隱層含魂營養牌缺陷有型試嗎驗菌零的瓊狀脂培養原后產氨燦基酸筐菌落遼周圍吸有生種長圈目的測菌落鞭進行泥液體拖培養袍，對產露物進麗行定航量測蝦定篩選駁產物哈含量留高的扮菌株多糖弓產生救菌的殿篩選取樣迫特點口：碳橫水化強合物宮工業惠的廢扣棄物篩選棍方案移：從修菌落岔外觀炒判斷謠，選稀擇外敏觀呈目粘液最狀的滅菌落縫，然蓬后根法據液花體培喬養測避定多廉糖含伏量來頭篩選換高產夠菌。4、幾猶種典限型微杰生物副的分妻離篩誕選方毛法舉回例細菌放線男菌真菌細菌宮分離攏：以仙乳酸搭菌為我例取未乏成熟去的醬瓜醪樣絹品1g至無賴菌磨歐口瓶搬中加麥落芽汁歇至瓶客口處館，封察塞，25蓋℃培養24碑-4胞8h培養載基中原長出寸絹絲握狀波尤動物聚，鏡咐檢洽桿狀停，陽頂性染蕉色止初步畫斷定灑乳酸牌菌用選濤擇性門培養撤基分勇批富桑集培翅養2-販3代稀釋秀分離命法分版離單光菌落擾，培這養基貞為含鉤麥芽老汁、Ca尿CO3的瓊脂甲培養遭基根據動透明攪圈挑屆選菌村落性能釋測定煉（鏡膠檢桿煎狀，棍染色新陽性拐；乳念酸紙州層析沈鑒定伙）Rf值定費性（有匆機酸擋呈黃鏟斑點睛）乳酸固生成犁量測惠定（執滴定秒法）放線臺菌的浙分離詢：援以產商鏈霉散素菌枕種的凈分離因為例從（欲從退撫化菌日種中持篩選保）取工君業發糊酵液涂（含傘孢子針）樣駛品1環放入僵帶玻貨璃珠自的裝告有10特ml無菌受水的丑小三瞞角瓶灑中，蹤蝶搖勻采用謹稀釋建法制逢平板社，獲泛取單郵菌落斜面縮慧保藏娛高湊產菌撇恢復根據艦高產元菌的熄特點景，選皇擇目披的菌環落放大浮培養趕，發拘酵液逝性能讀測試篩選代模型邁：形類態依侄據真菌齊的分驚離篩烘選：是以啤介酒酵致母的若分離耳為例取發質酵液坐少許柴以10倍稀兵釋成10-1-1就0-7稀釋錄分離奪法取0.先1m騾l加入柿固體餐培養毛基鋪桃平皿拖（×2）在麥徑芽汁茅固體猾培養俱基上億，25馳℃培養48腿-7找2h形態想篩選歲根據護正常家株特雖點進霜行挑速選，派接種貓斜面凱備用純化扛，采怕用平芹板分侄離法敵進一嘩步純世化，純至少忙反復就三次①生碎成子艇囊孢同子速春度測肆定胃②發警酵力舍測定性能免測定昌③熱叔死溫郊度測史定④凝氏集力寧測定⑤雙無乙酰型含量真測定菌種揮選育晃改良瓜的具尤體目抬標提高世目標攪產物途的產鄭量提高巷目標童產物困的純姥度，趣減少客副產冊物改良府菌種己性狀跨，改悉善發呆酵過鉗程改變禮生物頸合成抱途徑償，以陡獲得演高產閱的新打產品第二調節慎發奔酵高利產菌抓種選牢育常規量育種(誘變紗育種)細胞偵工程夜育種基于篇代謝樂調節南的育劑種技尸術基因亭工程啄育種蛋白首質工拌程育匠種代謝燈工程浴育種選擇辱育種爭方法符時綜狐合考組慮的康因素(1邊)待改怕良性雷狀的鉛本質服及與賀發酵龜工藝宿的關遭系(如批斜式或拔連續講發酵周試驗)；(2暴)對這芽一特兵定菌奸種的紐奉遺傳桿和生曲物化爹學萬蘇面認貴識的考明了尖程度凡；(3污)經濟可費用斥。如果數對特量定菌妖種的捏基本杏性狀殃及其更工藝玻知曉踩甚少阻，則戀多半質采用紐奉隨機竄誘變啊、篩處選及剃選育描等技碗術：如果撓對其暗遺傳年及生認物化姑學方繁面的顫性狀龜已有襪較深例的認定識，采則可垮選擇戴基因削重組工等手鳴段進睜行定歸向育達種。誘變粘育種以微跌生物異的自記然變說異作庸為基僚礎的好生產瘦選種察的機桂率并償不很牌高，洞一個狹基因躲的自隔然突先變頻陽率僅10-6-1耍0-1闖0左右膚。誘變蓋育種孔：以鬧誘發練突變工為基到礎的茂育種請，是旁迄今騎為止圣國內泄外提膛高菌厘種產警量、遺性能辜的主鳥要手森段。誘變物理柜、化綢學或從生物余誘變凍方法一、步誘變舅劑和賞誘變即處理物理具誘變谷劑：貪射線緞如紫乏外線爬、X—射線律、γ—射線籌，快候中子沸；物理悟因素哪中目腦前使疲用得滔最方博便而遠且十綿分有忽效的疫是紫引外線尺。許糧多高遺產菌源株的糟選育放都用棟過紫芳外線釀，對隨于一厲般實城驗室需、中渾小型瓶工廠鋤都適婆用，悶也很躍安全督。其他傅的幾缺種射蠻線都助是電滔離性勾質的獨，有撤一定撕的穿啄透力繁，一吼般都文由專舒業人碗員在僻專門垮的設接備中澡使用街，否類則有蝦一定夏危險型性。化學忽誘變藝劑：化學解因子聾如堿銳基類按似物溝、5—氟尿的嘧啶捧、烷犁化劑腎等。化學喘誘變管劑中面使用叉最多默、最管有效已的是挨烷化麗劑。使用栗化學印誘變偵劑的異優缺批點：1、大遠多數鞏情況饒下，蟻就突亦變數凳量而完言，概要比辛電離氣輻射姑更有咳效。化學謝誘變吉劑：化學補因子激如堿澇基類擦似物綿、5—氟尿蘆嘧啶徹、烷創化劑魂等。乏化學嘗誘變恥劑中深使用亡最多飽、最攏有效圖的是粉烷化役劑。1、大貢多數炊情況懲下，旬就突垮變數征量而于言，你要比涂電離英輻射毛更有甘效。2、化慰學誘臘變劑途是很賞經濟粱的，從因為幼只需艱要少輪量的叉合適拐的誘獻變劑椅，設改備是扎實驗糖室的抖一般婚玻璃朋器皿悅，一附個蒸互氣罩富。而恒用電能離輻變射±行工殿作時顛，設租備費婚用大紡，并終要注槳意安蓮全性浪。3、大敵部分彩誘變澆劑是失致癌塞劑，念所以潑在使從用中累必須衰非常疊謹慎薪，要析避免非化學場誘變復劑與顏皮膚悄接觸夢，，向且切轎勿吸飛入其減蒸氣增，有腹人對情某些德誘變皇劑極撓其敏辟感，絲式甚至建未直穿接接合觸就賭會過像敏，林這就辭更要詢當心凡。誘變技劑的韻選擇1．堿搞基類攀似物銜和羥遠胺具技有很掉高的治特異遮性，漠但很匆少使窄用，浪回復買突變氧率高俊，效揮果不杯大。2．亞亦硝酸誓和烷蠶化劑出應用算的范沃圍較哥廣，綠造成下的遺余傳損澇傷較墓多。奔其中納亞硝石基胍閑和甲館基磺心酸乙宇酯常荒被稱速為“起超誘薦變劑茄”，浴甲基雨磺酸孕乙酯料是毒卷性最標小的攝誘變乳劑之托一。3．吖借啶類曲誘變魚劑可鞭以造澇成生妖化代廢謝途廁徑的支完全押中斷罰。4．紫眉外線供仍十糧分有議效。輸電離府輻射魄是造打成染效色體怕巨大排損傷沙的最爆好誘巧變劑春，它你能造放成不滿可回斷復的疏缺突絨變。兵但它稅可能抬影響灰鄰近視基因攝的性蹦能。誘變蝕育種華的基么本方變法出發店菌株烘的選狐擇處理破菌懸蔑液的機制備誘變錘處理中間己培養分離煉和篩研選(一)出發膏菌株夕的選歡擇1．自許然界碌新分粒離的嘩野生斥型菌緣瑞株，宴對誘德變處鞠理較彼敏感熟，容悄易達馬到好短的效蝕果。2．在碗生產排中經住生產閑選種腸得到享的菌送株與絹野生定型較地相像議，也久是良架好的抄出發卡菌株良。3．每勉次誘戶變處拳理都顛有一槐定提孕高的勇菌株浴，往毯往多先次誘秀變能開積累刃較多懲的提惑高。4．出皆發菌亭株開毀始時天可以奶同時齊選2～3株，肅在處欠理比愁較后連，將鑒更適掉合的宴出發如菌株唐留作境繼續完誘變撇。5．要毯盡量呼選擇料單倍恨體細萍胞、碎單核江或核射少的向多細鈴胞體翁來作袋出發擱誘變累細胞筋，這昆是由名于變飯異性穿狀大棚部分碑是隱圾性的而，特泳別是腳高產摧基因胞。6．根委據采肚用的冊誘變伏劑或超根據黎細胞伏生理低狀態才或誘崇變譜僵選擇騎誘變告劑，朋因為造同一社誘變股劑的找重復益處理粉會使銀細胞地產生境抗性半，使溜誘變吵效果疊下降話。有徑的誘癢變劑霞是作萄用于惡營養乓細胞逗，就摘要選旱對數火期的酷細胞返：有葉的作眉用于惹休止益期，息就可從選用攝孢子跳。(二)處理劃菌懸短液的洲制備這一怎步驟叫的關哈鍵是促制備荒單細括胞和戰單孢獵子狀育態的狂、活訪力類賞似的迫菌懸江液，桃為此蝦要進挎行合錯適培息養基服的培舞養，遭并要泳離心漁，洗牙滌，庫過濾示。(三)誘變博處理結合你誘變熱對象潤的實柿際，吩設計皺誘變撐處理竟方案當。(四)中間懶培養由于基在發速生了還突變讀尚未運表現列出來虧之前棚，有厘一個收表現逮延遲進的過懇程，存即細霜胞內仗原有剪酶量悲的稀潮釋過回程(生理言延遲)，需3代以材上的顫繁殖獄才能植將突翅變性群狀表喉現出撞來。補這個所過程敘對今這后的用篩選斤和獲差得穩訴定菌拉株都鳥是極誰為重綿要的侵。方法啟措施緣瑞：讓變脖異處好理后為細胞員在液切體培火養基罰中培幟養幾兇小時欺，以典讓細離胞的跌遺傳貌物質喉復制召，讓垂細胞匯繁殖走幾代不，以上得到忠純的胡變異睬細胞榜。這樣偶，隱抹性的折變異興就會拋顯現儲出來詞，若注不經占液體拌培養憤基的悶中間借培養余，直元接在投平皿儀上分遼離就彼會出跟現變臟異和怕不變遮異細煉胞同鬼時存潮在于共一個貌菌落爹內的做可能醫，形墳成混燒雜菌詢落，幼以致盟造成夏篩選臉結果匹的不禿穩定救和將遣來的舒菌株蟻退化溪。(五)分離帝和篩夸選篩選際分初絕篩和緞復篩浴。初芒篩以功迅速奇篩出旺大量推的達當到初墓步要罰求的崗分離喘菌落鈴為目劫的，博以量樂為主匪。復篩純則是優精選書，以略質為縣主，失也就鑼是以攜精確介度為達主。功因此外在具赤體方廈法上裝就有錦差異.例如袋初篩籮可以頁在平哨皿上閑直接彼以菌杜落的記代謝楊產物盜與某爬些染敢料或積基質息的作雪用形慰成的較變色鐵圈或堡透明覽圈的映大小身來挑嚴取參枝加復際篩者羞，而主將90座%的菌帝落淘蛇汰。弊在數那量減乞少后夢就要間仔細芬比較賣參加多復篩離和再權復篩秋的菌疊株，錘最后痰才能恒選得怨優秀預菌株知。在肢以后篩的復升篩階郵段，鋤還應伙不斷曉結合掘自然玩分離療，純漂化菌誰株。（1）鼻營養顏缺陷儀型的狗選育營養熔缺陷境型是果指通賺過誘裁變而孟產生耕的缺勝乏合國成某瓣些營額養物勢質如園氨基豈酸、辮維生簽素和寬堿基藏等的冊能力嚇，必獲須在迫其基兼本培鑒養基挖中加土入相射應的滾營養踏成分警才能串正常偏生長腰的變哥異株君。與營朋養缺脊陷型胞對應狹的是互野生琴型。能滿壺足野診生型購菌株械正常蠶生長生的培刮養基黑稱基瓜本培而養基(M凱M)；在基匪本培掛養基別中加挪入相移應的篩營養蜜成分的的稱追補充揉培養質基(S泳M)；能滿繳足各除種營包養缺污陷型粱生長館的稱醒完全簡培養慢基(C球M)，如浴牛肉伍膏蛋震白胨隔培養叔基、酒麥芽撞汁培喉養基虹等。營養建缺陷腸型的嬸用途營養落缺陷惠型在崖生產著上和冠科學講研究勉上用坊途很眠大。宣目前梯生產久氨基糾酸、各核苷灘酸的總菌種洗都是符各種笛類型怨的缺詳陷型攀。要臺研究拿代謝歐途徑題，育然種技寄術都餅必須肢有營乒養缺峰陷型奸的菌昌株為府材料稼。篩選噸營養身缺陷礎型的爆步驟誘變淘汰訪野生炸型檢出艙缺陷屬型確定艱生長憐譜具體施方法購：影戰印法快、點絨種法悄、夾虧層法賴氨侮酸生通產菌葬種的愛選育害改良災思路出發估菌株：黃給色短活桿菌信、谷否氨酸隙棒桿障菌、潮乳糖稱發酵落短桿屯菌育種稻思路1.優先暴合成收的轉棗換——滲漏帝缺陷材型的謙選育2.切斷甘支路帳代謝——營養魂缺陷周型的透選育鼻：高除絲氨堡酸缺墊陷型3.抗結眾構類姑似物怠突變養株的帆選育葡：AE掛C4.解除珠代謝伯互鎖忠：Le鏈u-、抗Le愛u結構宗類似擔物、御喹啉s、苯醌s5.增加戴前體呆物的倒合成危和阻尿塞副筋產物世的生虜成：Al影a-、抗As拳p結構禽類似猛物選育撈適宜繪的CO2固定洲酶/T瓜CA循環楊酶活京性比競突變臉株6.改善擊細胞針膜的搏透過粒機能7.選育童溫度訓敏感榮突變到株8.應用宇細胞撕工程拖和基膚因工躍程育仔種選育賭適宜愿的CO2固定升酶/T禍CA循環踩酶活磚性比澇突變泳株賴氨庭酸合滴成中臨間代萄謝有楊以下次兩條導途徑粗：①通過TC渠A循環葡萄拴糖集丙酮能酸送草潑酰乙盛酸再天冬智氨酸賴氨御酸②通過年磷酸淘烯醇帖丙酮層酸羧遮化反段應葡萄派糖辦磷管酸烯櫻醇飯草家酰乙乖酸凳天冬馳氨酸式丙圈酮酸丙酮害酸賴氨為酸代謝陡工程流的定延義利用竭多基配因重具組技掃術有凍目的料地對雪細胞淹代謝