臨床免疫定性實驗的質(zhì)量保證第一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四室內(nèi)質(zhì)量控制（InternalQualityControl,IQC)

由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作。第二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四室間質(zhì)量評價（ExternalQualityAssessment,EQA）為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由第三方機構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來評價實時的測定結(jié)果的可接受性。當EQA用來為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒炇艺J證的目的而評價實驗室操作時，常描述為實驗室能力比對檢驗（Proficiencytesting,PT）。第三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四常用臨床免疫檢驗方法三大“標記”免疫檢驗技術:熒光標記、放射性核素標記和酶標其它標記免疫測定技術：發(fā)光物標記、金標、鑭系元素標記等免疫沉淀和免疫凝集試驗第四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四

實驗方法的選擇公認的參考方法。參照衛(wèi)生部臨床檢驗中心制定的臨床檢驗操作規(guī)范中所推薦的方法。根據(jù)權(quán)威部門發(fā)布的方法學評價結(jié)果，選用線性關系好、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好的實驗方法。第五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四方法的評估

參數(shù)設定：真陽性TP，真陰性TN，假陽性FP，假陰性FN敏感性:患者中陽性百分率

公式①：×100％特異性:非患者中陰性百分率公式②：×100％第六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四方法的評估

診斷效率:準確區(qū)分患者及非患者能力公式：×100%

陽性預測值:在所有陽性結(jié)果中真患者百分率公式：×100%第七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四方法的評估

陰性預測值:在所有陰性結(jié)果中非患者百分率公式：×100%第八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四二、影響ELISA測定的因素標本收集實驗室測定報告和解釋灰區(qū)的設置結(jié)果報告和解釋室內(nèi)質(zhì)控

第九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四樣本的外源性干擾因素：標本溶血標本被細菌污染標本貯存時間過長標本凝固不全冷凍保存標本避免反復凍融第十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四樣本的內(nèi)源性干擾因素：類風濕因子補體異嗜性抗體、治療性抗體、自身抗體溶菌酶磷脂藥物小分子總蛋白濃度第十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四試劑盒的因素

固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:純化、合成和基因工程抗原抗體：多抗、單抗和基因工程抗體酶結(jié)合物：酶免疫測定的核心成份色原底物：OPD和TMB運輸貯存第十二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四儀器的校準與標定

酶標儀的校準一定要定時進行（一般使用頻繁不超過半年，最多不超過一年）。加樣器及水浴用溫度計均應進行計量校準后使用，前者可采用稱重法校準，后者可到國家計量單位進行。第十三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四酶免疫測定操作中的注意事項加樣溫育洗板顯色比色結(jié)果判斷結(jié)果報告及解釋第十四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四加樣定期對移液器進行維護和校準加樣不可太快，避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。全自動加樣系統(tǒng)的標本“交叉污染”問題。操作時差對結(jié)果的影響

第十五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四

溫育常采用的溫育溫度有43℃、37℃、室溫等。溫育所需時間與溫度成反比，即溫育溫度高，則所需時間相對較短。溫育時，微孔板應置于水?。ǜ∮谒妫┗驖窈兄?，以使反應溶液的溫度迅速與室溫平衡?！斑吘壭钡呐懦?使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度。第十六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四洗板洗滌是ELISA測定過程中決定實驗成敗的關鍵步驟。洗板液一般為含0.05%Tween20的中性PBS。手工洗板要避免氣泡殘留孔內(nèi)，洗板機洗板時，將洗液完全吸凈，否則空白值將升高甚至出現(xiàn)“花板”現(xiàn)象。機洗的次數(shù)要通過多次實驗來確定。第十七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四顯色加入底物A和B后，應振蕩混勻當?shù)孜餅镺PD(鄰苯二胺）時，顯色反應應避光進行；底物為TMB（四甲基聯(lián)苯胺）時，要新鮮配制。顯色時間：建議在37℃下反應15～30分鐘后，終止反應比色測定。

第十八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四比色加酸終止顯色反應后，比色測定前應振蕩混勻測定時，要注意酶標儀的波長是否已調(diào)至合適最好選擇雙波長比色測定，雙波長測定能去除背景的干擾，注意避免出現(xiàn)吸光度值為負值的現(xiàn)象。

第十九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四灰區(qū)的概念ELISA“灰區(qū)”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。即將CO值上下一段區(qū)域定為陽性可疑。處于“灰區(qū)”的樣本，可通過確認試驗或重復檢測來確定到底是陽性還是陰性。如果重復檢測仍然落在“灰區(qū)”，則結(jié)果可報“陽性”。第二十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四灰區(qū)的設置

灰區(qū)”的設置有二種方式：⑴CO（1±CV），CV為該試劑的批內(nèi)CV(一般在15-20%)；⑵CO±2s，s為實驗室做室內(nèi)質(zhì)控RCV常規(guī)條件下的變異）的標準差。第二十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四結(jié)果判斷與報告按照試劑盒確定的Cut-off值判斷結(jié)果。對于“灰區(qū)”的問題，報告方式引入“可疑”較為合理，同時對結(jié)果做必要的說明。各試劑盒CO值差異及變異系數(shù)大等因素，結(jié)果缺乏可比性，位報告結(jié)果的不一致對于臨床實驗室來說是不可回避，也是目前醫(yī)療糾紛主要集中點和“結(jié)果互認”的最大障礙，所以必須引入陽性和弱陽性的報告方式。ELISA檢測的原始存根必須完整而全面地保存。第二十二頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC）

IQC是一個集體活動，不光是對實驗室一次測定的有效性的判斷，也反應了實驗室測定趨勢的變化。IQC的失控不能做為處罰的依據(jù)，應建設性的找出失控的原因，針對其采取措施加以改進。對IQC應定期進行評價第二十三頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四統(tǒng)計質(zhì)控方法質(zhì)控物濃度的選擇每次（批）質(zhì)控物的數(shù)量和放置位置質(zhì)控規(guī)則Levey-Jennings質(zhì)控圖方法“即刻法”質(zhì)控方法第二十四頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四質(zhì)控血清的選擇弱陽性質(zhì)控血清：趨近測定下限的反應物濃度水平；能靈敏的反映試劑盒測定下限的改變，確保弱陽性標本不被漏檢。陰性質(zhì)控血清：避免分析物和微生物之間出現(xiàn)交叉反應；能監(jiān)測到出現(xiàn)假陽性反應常見的原因。第二十五頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四定性免疫測定質(zhì)控物濃度的選擇陽性質(zhì)控標本選擇：可選擇S/CO值減去三倍批間CV與該S/CO值的乘積（仍大于1的質(zhì)控血清作室內(nèi)質(zhì)控用，計算公式：

S/CO（1-3CV%）﹥1S/CO比值可在1.5~4之間弱陽性質(zhì)控標本選擇：

選擇S/CO處于1.0~1.5左右的質(zhì)控血清以判斷每次測定時試劑盒測定下限的有效性。第二十六頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四每塊板質(zhì)控物的數(shù)量及位置2～3份弱陽性質(zhì)控2～3份陰性質(zhì)控隨機放置血液標本中間第二十七頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四Levey-Jennings質(zhì)控圖方法

基本的統(tǒng)計學含義：穩(wěn)定條件下，在20個IQC結(jié)果中不應有多于1個結(jié)果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結(jié)果中超過3SD（99.7%可信限）的結(jié)果不多于3個。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法第二十八頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四

Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法

l2S

：一質(zhì)控點在±2S之外應警惕。

13s:一質(zhì)控點在±3S之外，為失控。

R4S

：連續(xù)2個質(zhì)控點相差>4S。

41S

：連續(xù)4個質(zhì)控點落同側(cè)±1S之外。７X

：連續(xù)7個質(zhì)控點落均值一側(cè)。第二十九頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四室內(nèi)質(zhì)控的現(xiàn)狀及應對措施

對于抗體檢測，尤其是競爭法檢測HBeAb、HbcAb，由于不同試劑盒、不同檢測方法間CO值存在差異及變異系數(shù)大等因素，結(jié)果缺乏可比性，在沒有統(tǒng)一的判斷標準、及明確的臨床意義的情況下，引入弱陽性報告方式。由于質(zhì)控品不穩(wěn)定，每個月需重新設立靶值對位于“灰區(qū)”和弱陽性結(jié)果及少見模式結(jié)果進行復查，避免偶然因素及孔間差對結(jié)果造成影響第三十頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四質(zhì)控小結(jié)

定期召開質(zhì)控分析會，討論質(zhì)量控制情況要在常規(guī)條件下建立質(zhì)控圖參數(shù)，用S/CO比值繪制質(zhì)控圖采用自制的質(zhì)控物，是一種經(jīng)濟的方法，關鍵是要確保質(zhì)控物的性質(zhì)穩(wěn)定使用新批次的外部對照質(zhì)控物時，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20％

第三十一頁，共三十三頁，編輯于2023年，星期四質(zhì)控小結(jié)建議長期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新繪制質(zhì)控圖。