關于微生物藥物產生菌第1頁，課件共64頁，創作于2023年2月分離微生物篩選方法的建立微生物分類學抗生素發酵（選用不同培養基及培養條件）篩選（采用微生物學、生物化學、生物學或化學方法等進行測定）早期鑒別化合物的分離與純化理化性質及生物學性質的測定采集樣品新物質臨床前藥理臨床試驗開發研究生物合成作用機制耐藥機制全合成結構改造結構測定——可能為新物質——毒性低，療效好——陽性樣品—全發酵液、上清液或菌絲體浸泡液（或粗提品等）新微生物藥物的篩選流程第2頁，課件共64頁，創作于2023年2月第1章微生物藥物的產生菌藥物的產生菌；新藥產生菌的分離；新微生物藥物的篩選。第3頁，課件共64頁，創作于2023年2月1.1微生物藥物的產生菌主要包括放線菌、真細菌和絲狀真菌等。1、放線菌應用于臨床的微生物藥物大部分來源于放線菌的次級代謝產物。放線菌產生的抗菌藥物中化學類別較多。第4頁，課件共64頁，創作于2023年2月（1）放線菌產生的抗菌藥物β-內酰胺類氨基糖苷類大環內酯類四環素類紫霉素類糖肽類多烯類其他抗細菌抗生素第5頁，課件共64頁，創作于2023年2月產生β-內酰胺類抗生素的放線菌抗菌藥物產生菌備注頭霉素C耐內酰胺鏈霉菌（Streptomyceslactamdurans）帶小棒鏈霉菌（Str.clavuligerus）諾卡菌素A均勻諾卡菌（Nocardiauniformis）硫霉素卡特利鏈霉菌（Str.cattleya）由硫霉素半合成的亞胺硫霉素——亞胺培南（imipenem）在臨床治療耐藥菌感染中有較好療效棒酸帶小棒鏈霉菌（Str.clavuligerus）抑制青霉素酶橄欖酸橄欖鏈霉菌（Str.olivaceus）抑制內酰胺酶第6頁，課件共64頁，創作于2023年2月抗菌藥物產生菌鏈霉素streptomycin灰色鏈霉菌（Str.griseus）枝鏈霉菌（Str.rameus）鮮黃鏈霉菌（Str.galbus）比基尼鏈霉菌（Str.bikiniensis）新霉素neomycin弗氏鏈霉菌（Str.fradiae）巴龍霉素Paromomycin小串鏈霉菌NRRL2455（Str.catenulae）卡那霉素kanamycin卡那霉素鏈霉菌（Str.kanamyceticus）慶大霉素gentamicin絳紅色小單孢菌NRRL2953（Micromonosporapurpurea）棘孢小單孢菌NRRL2985(M.Echinospora)大觀霉素spectinomycin壯觀鏈霉菌（Str.spectabilis）產生氨基糖苷類抗生素的放線菌第7頁，課件共64頁，創作于2023年2月產生四環素類抗生素的放線菌抗菌藥物產生菌四環素tetracycline生綠鏈霉菌（Str.viridifaciens）吸水鏈霉菌（Str.hygroscopicus）氧四環素/土霉素terramycin龜裂鏈霉菌（Str.rimosus）褐黃鏈霉菌（Str.gilvus）氯四環素/金霉素aureomycin金霉素鏈霉菌LSB2201（Str.aurofaciens）佐山鏈霉菌（Str.sayamaensis）具有廣譜的抗細菌活性。作用于細菌的蛋白質合成。產生菌均為鏈霉菌。第8頁，課件共64頁，創作于2023年2月產生大環內酯類抗生素的放線菌抗菌藥物產生菌紅霉素erythromycin紅霉素鏈霉菌ER-598,2135（Str.erythreus）灰平鏈霉菌（Str.griseoplanus）竹桃霉素oleandomycin抗生鏈霉菌ATCC11891（Str.antibioticus）麥迪加霉素midecamycin生米卡鏈霉菌（Str.mycarofaciens）螺旋霉素產二素鏈霉菌（Str.ambofacoensis）大環內酯類抗生素的產生菌均為鏈霉菌。主要抗G+細菌，對軍團菌、支原體、衣原體有抗菌作用。阻斷蛋白質的合成。第9頁，課件共64頁，創作于2023年2月抗菌藥物產生菌備注兩性霉素amphotericin節狀鏈霉菌M-4575（Str.nodosus）七烯大環內酯類，抗真菌抗生素制霉菌素nystatin諾爾斯鏈霉菌ATCC11455（Str.noursei）四烯大環內酯類，抗絲狀真菌和酵母樣真菌多烯類抗生素產生菌主要是鏈霉菌，作用于真菌，能與真菌細胞膜中的固醇結合，使膜受損，影響細胞正常代謝，導致細胞死亡。產生多烯類抗生素的放線菌第10頁，課件共64頁，創作于2023年2月抗菌藥物產生菌備注利福霉素rifamycin地中海擬無枝酸菌ME/83（Amycolatopsismaditerranei）利福霉素及其衍生物有廣譜的抗菌活性，可用于抗結核桿菌，作用于細菌RNA多聚酶氯霉素chloramphenicol委內瑞拉鏈霉菌（Str.venezuelae）氯霉素是廣譜抗細菌抗生素，抑制蛋白質合成磷霉素forfomycin弗氏鏈霉菌NRRL-3417（Str.fradiae）磷霉素抑制細胞壁合成，對G+和G-細菌均有抗菌活性環絲氨酸cycloserine蘭花鏈霉菌（Str.orchidaceus）環絲氨酸抑制細胞壁合成，對G+、G-細菌和結核分枝桿菌均有抗菌作用長崎鏈霉菌（Str.nagasakiensis）產生其他抗細菌抗生素的放線菌

第11頁，課件共64頁，創作于2023年2月蒽環類糖肽類色霉素類烯二炔類絲裂烷類其他抗腫瘤抗生素（2）放線菌產生的抗腫瘤藥物第12頁，課件共64頁，創作于2023年2月蒽環類抗生素產生菌道諾霉素daunomycin波塞鏈霉菌FI-1762（Str.peuceticus）天藍微紅鏈霉菌NRRL3046（Str.coeruleorubidus）阿霉素adriamycin波塞鏈霉菌青灰變種IMRU3920（Str.Peuceticusvar.caesius）洋紅霉素carminomycin洋紅馬杜拉放線菌（Actinomaduracarminata）

以發色團插入DNA雙螺旋中而與DNA結合，抑制依賴于DNA的RNA多聚酶，抑制RNA合成和DNA復制第13頁，課件共64頁，創作于2023年2月糖肽類抗生素產生菌博來霉素bleomycin輪枝鏈霉菌（輪枝鏈輪絲菌）（Streptoverticillumverticillus）平陽霉素pingyangmycin輪枝鏈輪絲菌平陽變種（Streptoverticillumverticillusvar.pingyangense）博安霉素boanmycin輪枝鏈輪絲菌平陽變種（Streptoverticillumverticillusvar.pingyangense）與DNA結合，使DNA單鏈斷裂，抑制胸腺嘧啶進入DNA中，終止癌細胞的分裂第14頁，課件共64頁，創作于2023年2月色霉素類抗生素與DNA結合，抑制依賴于DNA的RNA多聚酶色霉素橄欖產色鏈霉菌69895（Str.olivochromogenes）光神霉素白泥鏈霉菌ATCC12957（Str.argillaceus）烯二炔類抗生素活化后形成芳香環二自由基，切斷DNA鏈，抑制了DNA的合成新制癌霉素neocarzinostatin抑癌鏈霉菌新抑癌亞種（Str.Carzinostaticussubsp.neocarzinostaticus）絲裂烷類抗生素能使互補的DNA雙鏈之間形成交聯，從而抑制DNA的合成絲裂霉素頭狀鏈霉菌NRRL2564（Str.caespitoseus）第15頁，課件共64頁，創作于2023年2月抗腫瘤藥物產生菌放線菌素Dactinomycin抗生素鏈霉菌（Str.antibiotics）小小鏈霉菌（Str.parvullus）鏈黑菌素streptonigrin團片鏈霉菌ATCC13257（Str.flocculus）殺霉鏈霉菌ATCC13853（Str.fungicidicus）鏈脲菌素streptozotocin不產色鏈霉菌NRRL2697（Str.achromogenes）吡唑呋喃菌素pyrazofurin純白鏈霉菌（Str.candidus）其他抗腫瘤抗生素第16頁，課件共64頁，創作于2023年2月藥物產生菌備注烏苯美司（bestatin）橄欖網狀鏈霉菌（Streptomycesolivoreticuli）免疫抑制劑，并對多種腫瘤有免疫治療作用藤霉素（fujimycin,）鏈霉菌（S.tsukubaenis）有抗真菌活性，大環內酯類免疫抑制劑雷帕霉素（rapamycin）吸水鏈霉菌（S.hygroscopicus）三烯大環內酯類免疫抑制劑，有抗真菌活性康樂霉素C（kanglemycinC）地中海諾卡菌康樂變種（Nocardiamediterraneivar.kanglensis）免疫抑制劑（3）其他藥物產生菌第17頁，課件共64頁，創作于2023年2月抗菌藥物產生菌備注桿菌肽bacitracin枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）地衣形芽孢桿菌（B.licheniformis）黏菌素colistin多粘芽孢桿菌黏菌素變種（B.polymyxavar.colistinus）多粘菌素polymycin多粘芽孢桿菌（B.polymyxa）丁酰苷菌素butirosin環狀芽孢桿菌NRRLB-3313（B.circulans）氨基糖苷類抗生素磺酰胺菌素sulfazecin嗜酸假單胞菌（Pseudomonasacidophila）單環β-內酰胺類抗生素單菌胺素monobactams紫色色桿菌（Chromobacteriumviolaceum）單環β-內酰胺類抗生素硝吡咯菌素pyrrolnitrin吡咯假單胞菌2327（P.pyrrocinia）堆囊菌素sorangicin纖維素堆囊菌(Sorangiumcellulosum)大環內酯類抗生素琥蒼菌素ambruticin纖維素堆囊菌（S.cellulosum）抗真菌作用2、細菌第18頁，課件共64頁，創作于2023年2月真菌是第一個應用于臨床的抗生素——青霉素的產生菌，并從此進入了抗菌治療中的抗生素時代。抗菌藥物產生菌備注青霉素penicillin點青霉（Penicillumnotatum）產生菌很多，多數菌種屬于青霉屬。對細菌有抗菌作用，抑制細菌細胞壁合成。產黃青霉（Pen.chrysogenum）巴恩青霉（Pen.baarnense）矮小青霉（Pen.humuli）黃曲霉（Aspergillusflavus）構巢曲霉（Asp.nidulans）頭孢菌素CcephalosporinC頂頭孢霉（Cephalosporiumacremonium）對細菌有抗菌作用，抑制細菌細胞壁合成。灰黃霉素griseofulvin灰黃青霉（Pen.griseofulvum）產生菌較多，均為青霉屬;作用于微孔蛋白，抑制真菌生長詹氏青霉250（Pen.janczewskii）3、真菌第19頁，課件共64頁，創作于2023年2月藥物產生菌其他環孢菌素AcyclosporinA光澤柱孢菌（Cylindrocarponlucidum）有抗真菌活性，其結構為11個氨基酸的環肽雪白白疆菌（Beauveriabassiana）腐皮鐮刀菌4-11（Fusariumsolani）洛伐他汀lovastatin土曲霉（Aspergillus）抑制膽固醇生物合成4、其他藥物產生菌第20頁，課件共64頁，創作于2023年2月天然青霉素第21頁，課件共64頁，創作于2023年2月

二新藥產生菌的分離（一）土壤微生物的分離土壤是微生物的重要棲息地。1.采集樣品2.分離微生物3.選留菌種及保存分離放線菌的樣品除土壤以外，還有河（湖、海）泥和水、枯樹葉、堆肥、動物糞便等。土壤樣品通常采表層土（5cm以下），樣品以未開墾過的土壤為佳，要盡可能選擇不同地理和生態環境的土壤。第22頁，課件共64頁，創作于2023年2月2.分離微生物樣品的處理分離培養基抑制劑的使用分離方法培養條件稀有放線菌的選擇性分離其他微生物的分離第23頁，課件共64頁，創作于2023年2月（1）樣品的處理利用放線菌孢子和細菌營養細胞及不同屬間放線菌孢子間的耐性差異，用物理或化學的方法除去細菌及目的外放線菌，或者用花粉作為誘餌，增加某些特定放線菌的分出率。第24頁，課件共64頁，創作于2023年2月處理條件樣品分離的放線菌40℃，2～16h土壤、植物根鏈霉菌55℃，6min水、土壤、糞便小單孢菌、鏈霉菌、紅球菌、嗜酸放線菌和嗜堿放線菌等55℃干熱，10d土壤高溫放線菌100℃干熱，15min土壤馬杜拉放線菌100～120℃干熱，1h土壤馬杜拉放線菌、小雙孢菌，小四孢菌，孢囊鏈霉菌①溫度

-分離前樣品加熱處理

第25頁，課件共64頁，創作于2023年2月②化學試劑的處理SDS-酵母膏處理法，SDS對放線菌孢子基本無害，酵母浸膏以及溫和的熱休克可以促進放線菌孢子的出芽，使細菌數明顯減少。風干的土壤與CaCO3混合后在26℃培養7～9d，然后分離放線菌。風干的土壤減少了細菌的數量，CaCO3有利于放線菌生長而不利于絕大多數真菌的生長。用0.01mol/LNaOH處理土壤5～10min（15℃）可減少細菌的數量，有利于分離小單孢菌。用1.4%酚處理土樣10min或用1.4%酚130℃處理30min，分別有利于獲得鏈霉菌或小單孢菌。用乙酸乙酯或氯仿和苯處理樣品，過濾風干后用來分離微生物，可以除去樣品中的真菌。第26頁，課件共64頁，創作于2023年2月③物理方法的處理離心，1600g離心20min，上清液主要有放線菌孢子，沉淀含有細菌和真菌孢子。超聲波處理，分離小單孢菌和鏈霉菌。特殊器具捕集空氣中的游離孢子，分離糖多孢菌。攪動，使干草上孢子脫落，用于從干草中分離高溫放線菌。膜過濾，將水經膜（孔徑0.45um濾膜）過濾，濃縮水中微生物，再將膜直接貼在瓊脂平板上培養。誘餌法，在培養基中添加特殊物質，如花粉、蛇皮、頭發等，可分離小瓶菌和發仙菌。第27頁，課件共64頁，創作于2023年2月（2）分離培養基總的要求：盡量使樣品中的全部放線菌都生長出來，而其他微生物（細菌和真菌）又盡可能不長。合成培養基——精氨酸培養基，高氏合成一號培養基，天門冬素培養基，察氏培養基等有機培養基——Waksman培養基，Bennett培養基幾丁質培養基——只有放線菌能夠利用幾丁質，生長的菌落小，白色，需轉接到產可溶性色素的適當培養基上加以區分HV培養基——以土壤腐殖質為唯一碳源和氮源的培養基第28頁，課件共64頁，創作于2023年2月選擇性分離放線菌所使用的培養基待分離的放線菌所用固體培養基中的主要成分馬杜拉放線菌屬葡萄糖，甘油，L-天冬酰胺，微量鹽，維生素（AV培養基）小雙孢菌屬AV培養基小單孢菌屬微量鹽，丙酸鈉，硫胺素（M3培養基）小四孢菌屬下層：葡萄糖，L-天冬酰胺，微量鹽上層：（水解）酪蛋白氨基酸諾卡菌屬微量鹽，丙酸鈉，硫胺素（M3培養基）嗜高溫放線菌屬半濃度營養瓊脂鏈孢囊菌屬葡萄糖，L-天冬胺酰，微量鹽（NH2），維生素，土壤浸出液各種菌屬膠體幾丁質，微量鹽第29頁，課件共64頁，創作于2023年2月（3）抑制劑的使用加入抗真菌試劑（制霉菌素、兩性霉素B、放線菌酮、丙酸鈉以及使真菌形成較小菌落的rosebengal等），抑制真菌生長；加入抗細菌抗生素（青霉素、鏈霉素）抑制細菌生長，增加放線菌的分出率；加入某些抗生素也可抑制部分放線菌，有利于分離到一定種類的放線菌。如新生霉素有利于分離北里孢菌屬。第30頁，課件共64頁，創作于2023年2月（4）分離方法稀釋法——最常用，將土壤樣品用無菌水（或生理鹽水、磷酸緩沖液）制成懸液，倍比稀釋，涂布平板，恒溫培養。干土噴射法——用噴土機或其他方法將風干碾細的土樣直接噴在分離平板上。孢子飛揚法——將樣品置于特制瓶中，其瓶口剛好能倒置一個分離平板，劇烈振蕩使孢子飛揚，撞到分離平板上進行分離培養。濾膜法——將0.22~0.45um的濾膜放在分離平板上，接種菌懸液或噴撒干土，適溫培養一段時間，放線菌菌絲可穿過濾膜小孔生長到培養基上，細菌只能在濾膜表面生長，去掉濾膜，深入培養基的放線菌經繼續培養后長出菌落。第31頁，課件共64頁，創作于2023年2月（5）培養條件一般培養溫度為25~30℃，也有32~37℃，培養7～14d，生長慢的放線菌可延長培養1個月；分離高溫放線菌用45～50℃培養1～2d；海水放線菌用20℃培養6周左右。第32頁，課件共64頁，創作于2023年2月（6）稀有放線菌的選擇性分離稀有放線菌的特征：生長速度比較緩慢；營養需求較為復雜；比較缺乏孢子分化的能力；不能穩定保存。第33頁，課件共64頁，創作于2023年2月分離幾種稀有放線菌的方法稀有放線菌種類形態特征預處理方法分離方法分離方法的特征馬杜拉放線菌100℃加熱15min，并懸浮于無菌的25％（V/V）Ringer’s溶液中懸浮液涂布于含有100ug/mL放線菌酮、25ug/mL利福平的固體培養基上高溫處理土樣與使用含有利福平的固體培養基相結合的選擇性分離方法第34頁，課件共64頁，創作于2023年2月稀有放線菌種類形態特征預處理方法分離方法分離方法的特征游動放線菌不形成真正的氣生菌絲，并且菌落呈鮮艷的橘黃色。營養菌絲上形成孢子囊。游動孢子由成熟的孢子囊產生。土樣浸泡于飽和的硫酸鎂鹽溶液中，再洗去鎂鹽，干燥土樣。將經過干濕處理后的土樣涂布于幾丁質瓊脂上，可得到大量的游動放線菌利用了生物趨化方法分離幾種稀有放線菌的方法第35頁，課件共64頁，創作于2023年2月稀有放線菌種類形態特征預處理方法分離方法分離方法的特征小單孢菌大多數種缺乏氣生菌絲，形成橘黃色或橘紅色的菌落孢子；分化的菌落表面變成黑色或暗褐色，有時呈光滑或粘稠。單孢子只在營養菌絲上形成，沒有運動性。堿處理有效的降低了革蘭氏陰性細菌的生長含有衣霉素的固體培養基可選擇性的支持小單孢菌的生長將土樣進行堿處理和使用含有衣霉素的固體培養基相結合的獨特方法分離幾種稀有放線菌的方法第36頁，課件共64頁，創作于2023年2月稀有放線菌種類形態特征預處理方法分離方法分離方法的特征諾卡菌大多數種形成蠟樣的或有光澤的菌落而不形成氣生菌絲，但也有一些種會產生不成熟的氣生菌絲，營養菌絲可斷裂成球狀或桿狀片斷用石蠟棒在土壤樣品的懸液中富集然后將石蠟從棒上剝離，接種到DST（Oxoid）瓊脂平板上，25℃培養3w分離幾種稀有放線菌的方法第37頁，課件共64頁，創作于2023年2月稀有放線菌種類形態特征預處理方法分離方法分離方法的特征鏈孢囊菌營養和氣生菌絲與鏈霉菌菌株一樣發育良好，包含著不能移動孢子的孢囊位于氣生菌絲的頂端可先將土樣在室溫風干，然后在120℃加熱1h將處理后的土樣或用土壤懸液涂布于含有維生素的培養基上分離幾種稀有放線菌的方法第38頁，課件共64頁，創作于2023年2月稀有放線菌種類形態特征預處理方法分離方法分離方法的特征北里孢菌屬形態特征以及菌落特征與鏈霉菌屬非常相似，但它們的細胞壁中含有LL-DAP、meso-DAP、甘氨酸、半乳糖，與鏈霉菌屬完全不同50ug/mL新生霉素的培養基利用了北里孢菌屬菌種對新生霉素具有抗性的特征分離幾種稀有放線菌的方法第39頁，課件共64頁，創作于2023年2月真菌的分離常用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、Martin培養基、察氏蔗糖（葡萄糖）瓊脂培養基，pH偏酸性。為了抑制細菌的生長一般在分離培養基中加入β-內酰胺類和氨基糖苷類等抗生素。細菌的分離常用有機培養基，如牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基、營養瓊脂加氨基酸維生素的培養基等，pH偏堿性。分離時一般加入一定量的抗真菌抗生素如制霉菌素、兩性霉素、放線菌酮等，抑制真菌生長，有利于細菌分離。加入多粘菌素可大大減少G－細菌生長，使G＋細菌得以富集。其他微生物的分離第40頁，課件共64頁，創作于2023年2月3.選留菌種及保存將菌株的優良特性保存下來，保持微生物的活力。低溫保藏法傳代培養保藏法液體石蠟保藏法沙土保藏法冷凍干燥保藏法第41頁，課件共64頁，創作于2023年2月（二）海洋微生物的分離第42頁，課件共64頁，創作于2023年2月①目的從海水和海底沉淀物中分離放線菌②分離的樣品用采樣器采集海水和海底沉淀物③前處理離心和過濾海水達到濃縮，沉淀物直接涂平板④培養基各種培養基，包括含人造海水的一些培養基（淀粉－水解酪蛋白－海水）⑤培養20℃，6w⑥挑選菌落挑出全部放線菌菌落⑦結果有幾株產生新抗生素的菌種，包括沉淀物中得到的產生aplasmomycin的Str.griseusOkami等從海洋中分離放線菌的程序第43頁，課件共64頁，創作于2023年2月（3）普通分離放線菌培養基適當稀釋，再加入人造海水蛋白胨5g磷酸鐵0.1g酵母膏1g人造海水1000ml瓊脂1.7%pH7.6分離海洋放線菌的培養基（1）SC培養基：可溶性淀粉10g酪蛋白1g人造海水500ml蒸餾水500ml瓊脂1.7%pH7.4（2）Z培養基：第44頁，課件共64頁，創作于2023年2月（三）極端微生物的分離極端微生物是在特殊環境（如高溫、低溫、高鹽、高堿、高壓等）中形成的一類特殊的微生物，因而在分離這類微生物時，需考慮它們生長繁殖所需的特殊條件，以設計分離與培養條件。分離嗜熱微生物，有些菌株的最適生長溫度高達80℃，pH在1-6；分離嗜鹽微生物時培養基中的鹽濃度可高達2.5mol/L。第45頁，課件共64頁，創作于2023年2月粘細菌基因重組微生物利用基因工程技術構建產生新的次級代謝產物的基因重組微生物，逐步創立組合生物合成。利用基因重組微生物提高已有抗生素的產量和有效組分的含量。纖維素堆囊菌（Sorangiumcellulosum）——大環內酯類抗生素堆囊菌素，—琥蒼菌素（抗真菌）（四）其他微生物資源第46頁，課件共64頁，創作于2023年2月組合生物合成——將產生不同抗菌藥物或其他生理活性中間體的基因重組到一種微生物中，使其生物合成途徑重新組合，生產迄今自然界還沒有的新的抗生素或生理活性化合物。第47頁，課件共64頁，創作于2023年2月（五）難培養微生物的分離與培養研究VBNC（viablebutnonculturable）——指那些可培養的不分化的微生物在受到外界壓力刺激后，通過一系列的類似分化的遺傳程序而使自身處于一種能抵抗饑餓和壓力的狀態；盡管此后不能用常規的培養方法恢復其生長繁殖，但實驗證明它們仍保持生存力與致病因子和/或基因。第48頁，課件共64頁，創作于2023年2月三.新微生物藥物的篩選（一）初篩發酵初篩發酵是能否產生抗生素的關鍵，需要選擇適合的發酵培養基和培養條件，以利于抗生素的合成。第49頁，課件共64頁，創作于2023年2月碳源糖類、脂肪、某些有機酸、醇或碳氫化合物供給微生物生命活動所需要的能量以及構成菌體細胞成分和代謝產物。氮源蛋白胨、黃豆餅粉、花生餅粉、玉米漿、肉膏、酒泥硫酸銨、氨水、硝酸鹽等供給微生物生長所需的氮素，構成菌體原生質無機鹽、微量元素磷、鎂、鉀、鈉等鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬等可以作為生理活性物質的組成或生理活性作用的調節物培養基成分培養基主要是供給微生物生長和合成抗生素的材料第50頁，課件共64頁，創作于2023年2月初篩方式固體平板發酵——便于大量篩選抗菌物質時采用。液體振蕩培養——放線菌大都為好氧菌，增加溶解氧有利于放線菌生長和抗生素的合成。第51頁，課件共64頁，創作于2023年2月（二）篩選模型的研究與應用10000株新分離的放線菌30株（可能是新抗生素）10種新化合物1種有希望的化合物，低毒性，體內有效新抗生素/分離的菌株數：1/1000新抗生素/已知抗生素：1/50有希望的抗生素/分離的菌株數：1/100002500株對細菌有抗菌活性500株250株鏈絲菌素類125株鏈霉素類40株四環素類55株其他已知抗生素交叉耐藥試驗和紙層鑒別Woodruff等的經典篩選毒性試驗第52頁，課件共64頁，創作于2023年2月1.常規的篩選方法瓊脂擴散法——利用多種微生物作為檢定菌，篩選有抗菌活性的物質。非致病菌抗生素耐藥突變株和超敏菌株厭氧菌協同活性檢測第53頁，課件共64頁，創作于2023年2月以作用機理為依據的篩選方法以耐藥機制為依據的篩選方法2.定靶篩選從臨床有效的抗生素的作用機理和細菌的耐藥機理來設計篩選模型，有目的地篩選具有某種作用機理的抗生素，試圖獲得抗菌作用強、對耐藥菌有效、毒性小的新抗生素。第54頁，課件共64頁，創作于2023年2月（1）以作用機理為依據的篩選方法①細菌細胞壁合成抑制劑的篩選；②細菌葉酸代謝抑制劑的篩選；③蛋白質合成抑制劑的篩選；④細菌DNA回旋酶抑制劑的篩選；⑤改變細胞膜通透性藥物的篩選；⑥作用于細菌外膜的藥物的篩選；⑦作用于細菌外排泵的藥物的篩選；⑧作用于非甲羥戊酸生物合成途徑的篩選；⑨氨基糖苷類抗生素的篩選第55頁，課件共64頁，創作于2023年2月細菌細胞壁合成抑制劑的篩選土壤分離的微生物（10200株）（細菌、真菌和放線菌）第二步：測定抑制同位素滲入meso-[3H]二氨基庚二酸L-[14C]亮氨酸用DiafloUM-2膜測定相對分子質量（1000以下）小分子量：azureomycinA和B（新）AM-1034AM-5289Amphomycin，青霉素G大分子量：ristocetinA和B其他（11種）+-+-++（487）（238）（1530）+-+-++第一步：抗微生物活性：細菌支原體細胞壁合成抑制劑（141）asukamycinSetomim