高三生物專題課題土壤中分解尿素細菌分離與計數第1頁/共81頁專題2微生物的培養與應用課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數第2頁/共81頁專題2微生物的培養與應用課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數兩個主要目的第3頁/共81頁專題2微生物的培養與應用課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數兩個主要目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌第4頁/共81頁專題2微生物的培養與應用課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數兩個主要目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌尿素:CO（NH2）2

第5頁/共81頁專題2微生物的培養與應用課題2土壤中分解尿素的細菌的分離與計數兩個主要目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細菌②統計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細菌CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3脲酶第6頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株第7頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株耐高溫的DNA聚合酶第8頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株耐高溫的DNA聚合酶美國微生物學家布魯克1966年發現水生耐熱細菌Taq分離到耐高溫的TaqDNA聚合酶第9頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株自然界篩選：第10頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株自然界篩選：根據它對生存環境的要求，到相應的環境中去尋找。第11頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株自然界篩選：根據它對生存環境的要求，到相應的環境中去尋找。實驗室篩選：第12頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株自然界篩選：根據它對生存環境的要求，到相應的環境中去尋找。實驗室篩選：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。第13頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株選擇培養基：第14頁/共81頁一研究思路（一）篩選菌株選擇培養基：在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基。目的是從眾多微生物中分離所需要的微生物。第15頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目第16頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目1.顯微鏡直接計數：第17頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目1.顯微鏡直接計數：先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微生物總數第18頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目1.顯微鏡直接計數：先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微生物總數優點：第19頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目1.顯微鏡直接計數：先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微生物總數優點：設備簡單、能觀察微生物的形態特征。第20頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目1.顯微鏡直接計數：先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微生物總數優點：設備簡單、能觀察微生物的形態特征。缺點：第21頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目1.顯微鏡直接計數：先將待測樣品制成懸液，然后取一定量的懸液放在顯微鏡下進行計數。根據在顯微鏡下觀察到的微生物數目來計算出單位體積內的微生物總數優點：設備簡單、能觀察微生物的形態特征。缺點：不能區分死菌和活菌。第22頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:第23頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:應用：第24頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:應用：統計樣品中活菌的數目第25頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:應用：統計樣品中活菌的數目原理：第26頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:應用：統計樣品中活菌的數目原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。第27頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:應用：統計樣品中活菌的數目原理：注意：一般選擇菌落數在30-300的平板進行記數。當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。第28頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:第一位同學只涂布了一個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。第29頁/共81頁一研究思路（二）統計菌落數目2.稀釋涂布平板計數法:第一位同學只涂布了一個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。第二位同學考慮到設置重復組的問題，涂布了3個平板，但是，其中1個平板的計數結果與另2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數值用來求平均值。第30頁/共81頁一研究思路（三）設置對照第31頁/共81頁一研究思路（三）設置對照增強實驗的說服力和準確性。第32頁/共81頁一研究思路（三）設置對照增強實驗的說服力和準確性。將待測樣品經過一系列的稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液均勻涂布在平板上，然后培養。第33頁/共81頁一研究思路（三）設置對照增強實驗的說服力和準確性。將待測樣品經過一系列的稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液均勻涂布在平板上，然后培養。注意：為了結果接近真實值，可將同一稀釋度菌液涂布到3個或3個以上的平板上，經培養，計算出菌落的平均數。第34頁/共81頁一研究思路（三）設置對照判斷培養基中是否有雜菌污染：第35頁/共81頁一研究思路（三）設置對照判斷培養基中是否有雜菌污染：將未接種的培養基同時進行培養。第36頁/共81頁一研究思路（三）設置對照判斷培養基中是否有雜菌污染：將未接種的培養基同時進行培養。判斷選擇培養基是否具有篩選作用：第37頁/共81頁一研究思路（三）設置對照判斷培養基中是否有雜菌污染：將未接種的培養基同時進行培養。判斷選擇培養基是否具有篩選作用：對照培養基接種后培養觀察菌落數目。第38頁/共81頁二實驗設計第39頁/共81頁二實驗設計1.

實驗設計的內容包括：第40頁/共81頁二實驗設計1.

實驗設計的內容包括：實驗方案、材料用具、實施步驟和時間安排等。第41頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：土壤取樣樣品系列稀釋涂布平板與培養觀察并記錄結果菌落計數第42頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（1）土壤取樣第43頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（1）土壤取樣從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。第44頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（1）土壤取樣從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。（2）樣品的稀釋第45頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（1）土壤取樣從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。（2）樣品的稀釋因為不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保證獲得菌落數在30～300之間。不同。第46頁/共81頁第47頁/共81頁某同學在稀釋倍數為106

的培養基中測得平板上菌落數的平均數為234，那么每克樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4第48頁/共81頁某同學在稀釋倍數為106

的培養基中測得平板上菌落數的平均數為234，那么每克樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B第49頁/共81頁某同學在稀釋倍數為106

的培養基中測得平板上菌落數的平均數為234，那么每克樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B計算公式：第50頁/共81頁某同學在稀釋倍數為106

的培養基中測得平板上菌落數的平均數為234，那么每克樣品中的菌落數是（涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B計算公式：每克樣品中的菌株數=（C÷V）×M第51頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（3）微生物的培養與觀察第52頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（3）微生物的培養與觀察①培養皿編號：104、105、106各編號三個培養皿。第53頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（3）微生物的培養與觀察①培養皿編號：104、105、106各編號三個培養皿。②每個培養皿加入牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基15ml。第54頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（3）微生物的培養與觀察①培養皿編號：104、105、106各編號三個培養皿。②每個培養皿加入牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基15ml。③用移液管按照編號分別加入不同濃度土壤稀釋液各0.1ml，轉動培養皿，使土壤稀釋液與培養基混合均勻。第55頁/共81頁二實驗設計2.實驗流程：（3）微生物的培養與觀察①培養皿編號：104、105、106各編號三個培養皿。②每個培養皿加入牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基15ml。③用移液管按照編號分別加入不同濃度土壤稀釋液各0.1ml，轉動培養皿，使土壤稀釋液與培養基混合均勻。④冷卻倒置放入30~37攝氏度的恒溫培養箱中培養。觀察紀錄。第56頁/共81頁三操作提示第57頁/共81頁三操作提示1.

無菌操作2.

做好標記3.

規劃時間四操作提示第58頁/共81頁三操作提示1.

無菌操作2.

做好標記3.

規劃時間四結果分析與評價第59頁/共81頁五課題延伸第60頁/共81頁五課題延伸對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助生物化學的方法。第61頁/共81頁五課題延伸對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助生物化學的方法。2.

在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。氨會使培養基的堿性增強，pH升高。因此，我們可以通過檢測培養基pH變化來判斷該化學反應是否發生。第62頁/共81頁五課題延伸對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助生物化學的方法。2.

在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。氨會使培養基的堿性增強，pH升高。因此，我們可以通過檢測培養基pH變化來判斷該化學反應是否發生。3.

在以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑。培養某種細菌后，如果pH升高，指示劑將變紅，說明該細菌能夠分解尿素。第63頁/共81頁練習1.

用稀釋涂布平板法來統計樣品中活菌的數目，其結果與實際值相比A.比實際值高B.比實際值低C.和實際值一致D.比實際值可能高也可能低第64頁/共81頁1.

用稀釋涂布平板法來統計樣品中活菌的數目，其結果與實際值相比A.比實際值高B.比實際值低C.和實際值一致D.比實際值可能高也可能低第65頁/共81頁2.下列能選擇出分解尿素的細菌的培養基是A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水第66頁/共81頁2.下列能選擇出分解尿素的細菌的培養基是A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、瓊脂、水C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、瓊脂、水D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、水第67頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方請根據以上配方，回答下列問題：(1)該培養基含有微生物所需要的______類營養物質。其中最主要的碳源是________，氮源是______。(2)該培養基按物理性質劃分是________培養基；按培養基的作用劃分是______培養基。第68頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方請根據以上配方，回答下列問題：(1)該培養基含有微生物所需要的______類營養物質。其中最主要的碳源是________，氮源是______。(2)該培養基按物理性質劃分是________培養基；按培養基的作用劃分是______培養基。4第69頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方請根據以上配方，回答下列問題：(1)該培養基含有微生物所需要的______類營養物質。其中最主要的碳源是________，氮源是______。(2)該培養基按物理性質劃分是________培養基；按培養基的作用劃分是______培養基。4葡萄糖第70頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方請根據以上配方，回答下列問題：(1)該培養基含有微生物所需要的______類營養物質。其中最主要的碳源是________，氮源是______。(2)該培養基按物理性質劃分是________培養基；按培養基的作用劃分是______培養基。尿素4葡萄糖第71頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方請根據以上配方，回答下列問題：(1)該培養基含有微生物所需要的______類營養物質。其中最主要的碳源是________，氮源是______。(2)該培養基按物理性質劃分是________培養基；按培養基的作用劃分是______培養基。尿素4葡萄糖固體第72頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方請根據以上配方，回答下列問題：(1)該培養基含有微生物所需要的______類營養物質。其中最主要的碳源是________，氮源是______。(2)該培養基按物理性質劃分是________培養基；按培養基的作用劃分是______培養基。4葡萄糖尿素固體選擇第73頁/共81頁3.下面是分離分解尿素的細菌所用的培養基配方(3)該培養基具有選擇作用的原因是