腎活檢組織光鏡和免疫熒光標本的制備及檢查_第1頁
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腎活檢組織光鏡和免疫熒光標本的制備及檢查第1頁/共22頁前言光鏡、免疫熒光、電鏡觀察腎活檢組織結構對診斷各種類型的腎小球疾病有重要意義標本處理及制片質量的好壞，與診斷的難易及準確與否有著極為密切的關系必須重視標本制備中的每個細小環節第2頁/共22頁準備工作生理鹽水浸透紗布（潮濕擰不出水）紗布及編號的膠布置培養皿備用清潔5ml小瓶，加光鏡固定液3ml（10％的中性福爾馬林溶液），蓋塞緊后備用清潔5ml小瓶內加冷電鏡固定液3ml置冰瓶（4%戊二醛）第3頁/共22頁腎活檢標本的初步處理第4頁/共22頁取材判斷皮質組織皮髓交界組織皮質-髓質-皮質組織僅取得髓質組織則為取材不成功第5頁/共22頁取材判斷判斷已取組織：腎組織，肌肉、脂肪、結締組織等用解剖顯微鏡或放大鏡判斷腎組織部位（皮質和髓質，有無腎小球），及時與術者聯系腎皮質色淡，見分布不規則，朦朧的紅色小點（腎小球）。隨經驗積累，可肉眼判定立即置腎組織于蠟板上，迅速測量其長度（cm），記錄、分割，迅速固定取標本部位、量重要。如無腎小球或皮質<1cm，考慮再次穿刺第6頁/共22頁標本分切法取組織長1.5cm~2.0cm最佳（1次）小鑷子將組織輕置蠟板上，鏡下觀察、量長度銳利刀片切割組織1mm、2mm及4mm數段先供電鏡標本，要求皮質1mm（腎小球1個）其次免疫病理，需組織約2mm（腎小球3~5個）余組織供光鏡（腎小球>10個）第7頁/共22頁標本分切法腎活檢穿刺組織的分取腎活檢穿刺組織的分取LM：光鏡；IF：免疫熒光；EM：電鏡第8頁/共22頁標本的處理光鏡分切后的組織平放蠟板上（勿扭曲）小鑷子沾少許光鏡固定液于組織表面，約30″組織稍硬后，再將整條組織放入固定液內（這樣固定的組織平整、不易彎曲，便于切出完整的切片）第9頁/共22頁標本的處理免疫熒光及免疫酶標分切后的組織迅速置預冷的培養皿內的濕紗布中置冰瓶即送至恒溫冷凍切片機內（<-30℃）進行包埋、切片如不能即切片，標本必須置-40℃~-70℃冰箱保存（保持抗原活性，防止抗原移位或流失），但放置時間不宜>2d第10頁/共22頁標本的處理電鏡將分切后的腎組織即浸4%的冷戊二醛固定液中，置冰瓶內送至電鏡室第11頁/共22頁注意事項短時完成觀察和分切標本，注意保持腎組織濕潤，切勿使其干涸解剖顯微鏡光源不宜太強，否則觀察組織易干涸，不易看清腎小球免疫熒光用的腎組織必須避免接觸固定液，尤其含酒精固定液（避免影響冰凍切片結果）；電鏡和光鏡固定液不得互相混淆動作輕柔夾取未固定組織，勿牽扯組織，避免人為因素造成組織細胞變形第12頁/共22頁腎活檢標本光鏡檢查第13頁/共22頁第14頁/共22頁HEPASPASMMasson第15頁/共22頁腎活檢標本免疫熒光檢查第16頁/共22頁第17頁/共22頁MN-IgG

IgAN-IgALN-IgM第18頁/共22頁免疫熒光電鏡常用染色HEPASMassonPAM-Masson剛果紅油紅“O”光鏡IgAIgG第19頁/共22頁小結按指南要求安全開展腎活

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