中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準PAGEICS65.020.99B20ICS65.020.99B20NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T719.1~719.3—2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范Environmentalimpacttestingofgeneticallymodifiedsoybean2003－12－01發(fā)布2004－03－01實施目錄NY/T719.1-2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生存競爭能力檢測…1NY/T719.2-2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第2部分：外源基因流散的生態(tài)風險檢測…………………………9NY/T719.3-2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第3部分：對生物多樣性影響的檢測……………13

ICS65.020.99B20ICS65.020.99B20NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T719.1—2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生存競爭能力檢測Environmentalimpacttestingofgeneticallymodifiedsoybean－Part1:testingthesurvivalandcompetitiveabilities2003－12－01發(fā)布2004－03－01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T719.1-2003前言NY/T719《轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范》分為以下三個部分：——第1部分：生存競爭能力檢測；——第2部分：外源基因流散的生態(tài)風險檢測；——第3部分：對生物多樣性影響的檢測。本部分是NY/T719的第1部分。本部分附錄A為規(guī)范性附錄。本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出并歸口。本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所、南京農(nóng)業(yè)大學、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心。本部分主要起草人：彭于發(fā)、彭德良、喻德躍、強勝、李寧、付仲文。本部分為首次發(fā)布。

NY/T719.1-2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生存競爭能力檢測1范圍NY/T719的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因大豆生存競爭能力的檢測方法。NY/T719的本部分適用于轉(zhuǎn)基因大豆變?yōu)殡s草的可能性、轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆及雜草在農(nóng)田中競爭能力的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過NY/T719本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB4404.2糧食作物種子—豆類3要求3.1試驗材料轉(zhuǎn)基因大豆品種、受體大豆品種、當?shù)仄胀ㄔ耘啻蠖蛊贩N。上述材料的質(zhì)量應達到GB4404.2中不低于二級大豆種子的要求。3.2資料記錄3.2.1試驗地名稱與位置試驗地的名稱、地址、經(jīng)緯度或全球地理定位系統(tǒng)(GPS)地標。繪制小區(qū)示意圖。3.2.2土壤資料記錄土壤類型、土壤肥力、排灌情況、土壤覆蓋物等內(nèi)容。描述試驗地近三年種植情況。3.2.3試驗地周圍生態(tài)類型3.2.3.1自然生態(tài)類型記錄與農(nóng)業(yè)生態(tài)類型地區(qū)的距離及周邊植被情況。NY/T719.1-20033.2.3.2農(nóng)業(yè)生態(tài)類型記錄試驗地周圍的主要栽培作物及其他植被情況，以及當?shù)卮蠖固锍Ｒ姴　⑾x、草害的名稱及危害情況。3.2.4氣象資料記錄試驗期間試驗地降雨(降雨類型、日降雨量，以mm表示)和溫度(日平均溫度、最高和最低溫度、積溫，以oC表示)的資料。記錄影響整個試驗期間試驗結(jié)果的惡劣氣候因素，例如嚴重或長期的干旱、暴雨、冰雹等。3.3試驗安全控制措施3.3.1隔離條件試驗地四周有100m以上非大豆作物為隔離帶，或100m范圍內(nèi)與其它大豆花期相隔30d以上。3.3.2隔離措施種植非豆科植物作為隔離帶。面積較小的試驗地設圍欄。設專人監(jiān)管。3.3.3試驗過程的安全管理試驗過程中如發(fā)生試驗材料被盜、被毀等意外事故，應立即報行政主管部門和公安部門，依法處理。3.3.4試驗后的材料處理轉(zhuǎn)基因大豆材料應單收、單貯，由專人運輸和保管。試驗結(jié)束后，除需要保留的材料外，剩余的試驗材料一律焚毀。3.3.5試驗結(jié)束后試驗地的監(jiān)管保留試驗地的邊界標記。當年和第二年不再種植大豆，由專人負責監(jiān)管，及時拔除并銷毀轉(zhuǎn)基因大豆自生苗。4試驗方法4.1競爭性4.1.1試驗設計實驗地為農(nóng)田生態(tài)類型，采用不完全隨機區(qū)組設計，三次以上重復，小區(qū)面積不小于4m×4m。4.1.2播種播種方式分為地表撒播和正常播種。播種密度分為低密度（正常密度減半）和高密度（正常密度加倍）播種。分期播種4次，適宜季節(jié)和非適宜季節(jié)各2次。每種播種方式和播種密度的播種面積為2m×2m。4.1.3管理播種后不進行任何栽培管理。4.1.4調(diào)查和記錄NY/T719.1-2003分別于大豆種植后1個月、2個月和3個月各調(diào)查1次，調(diào)查和記錄的內(nèi)容包括：雜草種類、株數(shù)，雜草相對覆蓋度；大豆株數(shù)，株高（抽取最高的10株），覆蓋率。播種后每2周隨機抽取10株調(diào)查1次大豆復葉的動態(tài)變化。4.1.5結(jié)果分析用方差分析方法比較轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆、普通栽培大豆的出苗率、成苗率的差異，及其與雜草在覆蓋率和株高等方面的差異。4.2轉(zhuǎn)基因大豆對常規(guī)除草劑的耐性（適用于抗除草劑轉(zhuǎn)基因大豆）4.2.1試驗設計以受體大豆和普通栽培大豆為對照，在溫室中進行盆栽，不少于3次重復。選用當?shù)卮蠖股a(chǎn)常用的土壤處理除草劑１種、莖葉處理除草劑１～２種（兼除單、雙子葉雜草的可選１種，否則選２種）及目標除草劑，按推薦用量、加倍用量用藥，設清水對照。4.2.2播種播種深度3㎝～4㎝。盆缽直徑不小于20cm，播種密度300粒/m2。4.2.3管理播種后按當?shù)爻Ｒ?guī)栽培方式管理。4.2.4調(diào)查和記錄分別在用藥后２周和４周調(diào)查和記錄成苗率、植株高度（選取最高的5株）、藥害癥狀（選取藥害癥狀最輕的5株）。藥害癥狀分級見附錄A。4.2.5結(jié)果表述受害率按下列公式計算。X=Σ（N×S/T×M）×100式中：X—受害率，單位為百分率（%）；N—同級受害株數(shù)；S—級別數(shù)；T—總株數(shù)；M—最高級別。4.2.6結(jié)果分析用新復極差法比較轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆和普通栽培大豆對常規(guī)除草劑耐性的差異。NY/T719.1-20034.3自生苗產(chǎn)生率4.3.1試驗設計按4.1.1給出的細節(jié)。在競爭性試驗的同一塊田中進行。當年不收獲種子，在入冬前調(diào)查落粒數(shù)，在下一年觀察轉(zhuǎn)基因大豆產(chǎn)生自生苗的比例。調(diào)查總面積不小于200m2。4.3.2管理不加任何管理措施。4.3.3調(diào)查和記錄調(diào)查和記錄的內(nèi)容包括：出苗率（大豆出苗旺盛期）、成苗率（始苗期１個月后）。4.3.4自生苗的驗證對自生苗進行生物測定或分子生物學檢測，確認是否為轉(zhuǎn)基因大豆。4.3.5結(jié)果表述單位面積的自生苗出苗數(shù)和成苗數(shù)按公式（1）計算。X=N1/A1………………（1）式中:X－單位面積出苗數(shù),單位為株每平方米（株/m2）；N1—出苗總數(shù)，單位為株；A1—調(diào)查的面積，單位為平方米。自生苗的轉(zhuǎn)基因植株檢出率按公式（2）計算。X=n2/N2………………（2）式中:X－自生苗的轉(zhuǎn)基因植株檢出率,單位為百分數(shù)（%）；n2—自生苗的轉(zhuǎn)基因植株檢出數(shù)，單位為株；N2—自生苗的總數(shù)，單位為株。成苗數(shù)按公式（3）計算。X=N3/A3………………（3）式中:X－單位面積成苗數(shù),單位為株每平方米（株/m2）；N3—總成苗數(shù)，單位為株；A3—調(diào)查的面積，單位為平方米。轉(zhuǎn)基因大豆自生苗產(chǎn)生率按公式（4）計算。NY/T719.1-2003X=n4/N4………………（4）式中:X－轉(zhuǎn)基因大豆自生苗產(chǎn)生率,單位為百分數(shù)（%）；n4—轉(zhuǎn)基因大豆檢出數(shù)，單位為株；N4—檢測植株總數(shù)，單位為株。4.4繁育系數(shù)4.4.1試驗設計按4.1.1給出的細節(jié)。4.4.2管理按當?shù)爻Ｒ?guī)栽培方式播種后，不加任何其他管理措施。4.4.3調(diào)查和記錄記錄轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆和普通栽培大豆的始花期、盛花期、成熟期、單株粒數(shù)。4.4.4結(jié)果分析用新復極差法比較轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆和普通栽培大豆的始花期、盛花期、單株粒數(shù)的差異。4.5種子自然延續(xù)能力4.5.1試驗設計轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆和普通栽培大豆種子每20粒分別盛裝于小尼龍網(wǎng)袋中，各12袋，分別置于網(wǎng)室地表和網(wǎng)室地下20cm。4次重復。試驗從當?shù)卣Ｊ斋@期開始。4.5.2種子發(fā)芽率檢測按GB/T3543.4規(guī)定的方法進行。4.5.3調(diào)查和記錄記錄正常幼苗、不正常幼苗、未發(fā)芽種子和新鮮不發(fā)芽種子。4.5.4結(jié)果分析用新復極差法比較轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆和普通栽培大豆在不同時期發(fā)芽率的差異。4.6種子落粒性4.6.1試驗設計按4.1.1給出的細節(jié)。4.6.2栽培管理按當?shù)爻Ｒ?guī)栽培方式播種后，不加任何其他管理措施。NY/T719.1-20034.6.3調(diào)查和記錄隨機選擇不同品種不同播期處理的10個植株，在大豆生理成熟后開始，觀察供試材料在自然條件下的落粒數(shù)。每7d觀察1次，共觀察3次。計算落粒率。記錄植株總粒數(shù)、已落粒數(shù)。4.6.4結(jié)果表述落粒率按公式（5）計算。X=n5/N5………………（5）式中：X—落粒率，單位百分數(shù)（%）；n5—每株落粒數(shù)；N5—每株總粒數(shù)。4.6.5結(jié)果分析用新復極差法比較轉(zhuǎn)基因大豆、受體大豆和普通栽培大豆落粒性的差異。附錄A（規(guī)范性附錄）除草劑藥害癥狀分級標準表A1除草劑藥害癥狀標準藥害級別癥狀描述0級與清水對照生長一致1級株高、葉色略與對照不同2級植株略顯畸型、株高低于對照3級植株明顯矮化、莖桿增粗、葉片略顯增厚且顏色加深或葉片變黃4級植株停止生長，畸形嚴重、僵苗或整張葉片枯黃死亡，植株萎蔫5級植株死亡

ICS65.020.99B20ICS65.020.99B20NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T719.2—2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第2部分：外源基因流散的生態(tài)風險檢測Environmentalimpacttestingofgeneticallymodifiedsoybean－Part2:testingtheecologicalriskofgeneflow2003－12－01發(fā)布2004－03－01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T719.2-2003前言NY/T719《轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范》分為以下三個部分：——第1部分：生存競爭能力檢測；——第2部分：外源基因流散的生態(tài)風險檢測；——第3部分：對生物多樣性影響的檢測。本部分是NY/T719的第2部分。本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出并歸口。本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所、南京農(nóng)業(yè)大學、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心。本部分主要起草人：彭于發(fā)、彭德良、喻德躍、強勝、李寧、付仲文。本部分為首次發(fā)布。

NY/T719.2-2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第2部分：基因流散的生態(tài)風險檢測1范圍NY/T719的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因大豆基因流散的生態(tài)風險檢測方法。NY/T719的本部分適用于轉(zhuǎn)基因大豆與野生大豆、普通栽培大豆的流散率以及基因流散距離和頻率的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過NY/T719本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。NY/T719.1－2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生存競爭能力檢測3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于NY/T719的本部分。3.1基因流散所有的英漢專業(yè)詞典中都將geneflow翻譯為“所有的英漢專業(yè)詞典中都將geneflow翻譯為“基因流（動）”轉(zhuǎn)基因大豆中的外源基因向普通栽培大豆或相關野生種自然轉(zhuǎn)移的行為。3.2流散率outcrossingrate轉(zhuǎn)基因大豆與普通栽培大豆或相關野生種發(fā)生自然雜交的比率。4要求按NY/T719.1－2003中第3章的要求。NY/T719.2-20035試驗方法5.1轉(zhuǎn)基因大豆與野生及栽培大豆不同基因型流散率5.1.1試驗設計單行相間種植，按對比法順序排列，受體材料不少于10個。小區(qū)面積不少于10m2，4次重復，東西向、南北向各2次重復。5.1.2播種播種深度3cm~4cm。每平方米播種10g~12g。5.1.3管理按當?shù)爻Ｒ?guī)栽培方式管理。5.1.4調(diào)查和記錄調(diào)查并記錄出苗期、始花期、盛花期、終花期和成熟期。5.1.5檢測將收獲的非轉(zhuǎn)基因材料種子（每處理不少于1000粒）在溫室或田間種植，出苗后進行生物學鑒定或分子生物學檢測，記錄含有外源基因的植株數(shù)。5.1.6結(jié)果表述流散率按公式（1）計算。PN100……（1）T

式中：P—流散率，單位為百分數(shù)（%）；N—檢測的含有外源基因的植株數(shù)，單位為株；T—播種后出苗總數(shù)，單位為株。5.1.7結(jié)果分析用方差分析方法比較轉(zhuǎn)基因大豆與野生及普通栽培大豆不同基因型流散率的差異。5.2基因流散距離和頻率的檢測5.2.1試驗設計采用角度大于90o的扇形，扇形口位于上風口，扇形半徑30m~50m,不設重復。面積約2000~3500m2。轉(zhuǎn)基因大豆種植在扇形口，其他材料種植于扇形脊。用轉(zhuǎn)基因大豆為授粉者，半徑不小于2m,選擇非轉(zhuǎn)基因普通栽培大豆為接受花粉者。5.2.2播種NY/T719.2-2003播種深度3cm~4cm。。每平方米播種10g~12g。5.2.3管理按當?shù)爻Ｒ?guī)栽培方式管理。5.2.4調(diào)查方法在成熟期以扇行口為起點，按距離梯度1m、2m、5m、10m、20m和50m收獲非轉(zhuǎn)基因大豆種子，每個距離取樣不少于1000粒種子。5.2.5檢測方法收獲后的種子當年在溫室條件下或次年在田間種植，出苗后進行生物學鑒定或分子生物學檢測，記錄含有外源基因的植株數(shù)。5.2.6結(jié)果表述計算基因流散距離和頻率。流散率結(jié)果計算見公式（1）。

ICS65.020.99B20ICS65.020.99B20NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T719.3—2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第3部分：對生物多樣性影響的檢測Environmentalimpacttestingofgeneticallymodifiedsoybean－Part3:testingtheeffectsonbiodiversity2003－12－01發(fā)布2004－03－01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T719.3-2003前言NY/T719《轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范》分為以下三個部分：——第1部分：生存競爭能力檢測；——第2部分：外源基因流散的生態(tài)風險檢測；——第3部分：對生物多樣性影響的檢測。本部分是NY/T719的第3部分。本部分附錄A為規(guī)范性附錄。本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出并歸口。本部分起草單位：中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所、南京農(nóng)業(yè)大學、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展中心。本部分主要起草人：彭于發(fā)、彭德良、喻德躍、強勝、李寧、付仲文。本部分為首次發(fā)布。

NY/T719.3-2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測第3部分：對生物多樣性影響的檢測1范圍NY/T719的本部分規(guī)定了轉(zhuǎn)基因大豆對生物多樣性影響的檢測方法。NY/T719的本部分適用于轉(zhuǎn)基因大豆對大豆田節(jié)肢動物多樣性、大豆病害及大豆根瘤菌影響的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過NY/T719本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB4404.2糧食作物種子—豆類NY/T719.1－2003轉(zhuǎn)基因大豆環(huán)境安全檢測技術(shù)規(guī)范第1部分：生存競爭能力檢測3要求按NY/T719.1－2003中第3章的要求。4試驗方法4.1試驗設計小區(qū)采用隨機排列，小區(qū)間設有2m寬隔離帶，小區(qū)面積不小于150m2，4次重復。處理1轉(zhuǎn)基因大豆不噴施農(nóng)藥；處理2受體大豆不噴施農(nóng)藥；處理3當?shù)仄胀ㄔ耘啻蠖蛊贩N不噴施農(nóng)藥；處理4當?shù)仄胀ㄔ耘啻蠖蛊贩N噴施農(nóng)藥。NY/T719.3-20034.2播種播種深度3cm～4cm。每平方米播種10g～12g。4.3管理按當?shù)爻Ｒ?guī)栽培方式管理。4.4調(diào)查和記錄4.4.1對大豆田節(jié)肢動物多樣性的影響4.4.1.1調(diào)查方法直接觀察法：從出苗到成熟，每10d調(diào)查1次，每次調(diào)查時每小區(qū)對角線5點取樣，每點調(diào)查20株，記載大豆上、中、下3個葉位的節(jié)肢動物的種類和所處的發(fā)育階段。在調(diào)查時應包括:——害蟲：粉虱、蚜蟲、薊馬、螨類、斜紋夜蛾、豆天蛾等；——捕食性昆蟲：蜘蛛、瓢蟲、草蛉、花蝽、獵蝽；——擬寄生昆蟲：赤眼蜂（成蟲階段）。吸蟲器調(diào)查法：在大豆齊苗后V3－V5調(diào)查第1次，以后在R1和R5期各調(diào)查1次。每處理調(diào)查5點，每點用吸蟲器由下往上吸取10株大豆（全株）及其地面上的節(jié)肢動物。樣品用75%乙醇溶液浸泡，帶回室內(nèi)整理和分類鑒定。4.4.1.2調(diào)查和記錄記錄節(jié)肢動物粉虱、蚜蟲、薊馬、螨類、斜紋夜蛾、豆天蛾、蜘蛛、瓢蟲、草蛉、花蝽、獵蝽、赤眼蜂等的發(fā)生種類和數(shù)量。4.4.2對大豆主要病害的影響4.4.2.1調(diào)查方法病毒病：在大豆苗期、鼓粒期各調(diào)查1次，按對角線5點取樣，每點20株。霜霉病：在大豆出苗后30d、始花期、鼓粒期各調(diào)查1次，按對角線5點取樣，每點20株。孢囊線蟲病：在大豆出苗后V3－V5期調(diào)查1次