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文檔簡介

2、掌握原代和傳代細胞培養。4、了解培養成纖維細胞的形態。將動物機體的組織從機體中取出,經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成長和繁殖，這一過程稱原代培養。...文檔交流僅供參考...細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程.懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后對具有移動特性的穩定細胞系或細胞株進行長期保存，一方面可以作為細胞研究的試驗材料，另一方面可以做細胞制品的生產材料。目前廣泛應用的細胞保存方融，這樣做是為了防止細胞由于冷凍過程中產生了冰晶胞破裂....文檔交流僅供參考...三、實驗器材及藥品.器材：懷孕的小白鼠、培養箱、培養瓶、培養皿、移液器、眼科剪、鑷子、酒精燈、離心機、水浴鍋、倒置顯微鏡、CO培養箱、超凈工作臺、離心管、2高壓滅菌鍋、試管架等。...文檔交流僅供參考...將實驗所需用到的工具(如槍頭、培養皿、眼科剪、2、培養基的配制....3、原代培養.(1)、準備。將實驗過程中會用到的工具以及藥品全部放在超凈工作臺上進行紫外消毒滅菌。實驗開始前帶好酒僅供參考...(2)、剪切與消化。將胚胎組織放于平板中,用眼科剪將心管(3)、分離細胞。消化到一定時間時，如果離心管中的溶液中出現了明顯的渾濁,可用吸管吸出少許消化液在入與胰酶等量的培養液終止消化。離心管于離心機中離心,棄上清液,得到分散的細胞。...文檔交流僅供參考...(4)、轉移細胞并培養。向含有分散細胞的離心管中加細胞培養瓶中。置于36。5℃恒溫CO箱培養，瓶口少2供參考...培養. (1)、倒置顯微鏡下觀察細胞的形態。倒置顯微鏡下觀察培養細胞的長勢及密度,根據細胞密度決定傳代的稀供參考... 并用PBS沖洗兩遍。然后向培養瓶中加入200μl的胰酶進行消化。消化一段時間后用配置好的培養液等比例(3)、傳代細胞的培養.向離心管內加入大約7—8ml的培養液，吹打混勻。將培養液轉移到培養瓶中,置于37度恒溫CO培養箱中培養.培養1-2天后于顯微鏡下觀2 消化一段時間后用配置好的培養液等比例終止消化.然 (2)、冷凍.向離心管中加入一定量的培養液以及10%-20%的DMSO冷凍液，吹打混勻并轉移到冷凍管中。先將冷凍管在4度冰箱中放置10min，再放在-70度的 (3)、復蘇。將冷凍的細胞取出來后，立刻放在40度的傳代第一次換液細胞菌操作,這是決定試驗成功的關鍵因素。在做原代培養的時候,一定要將小鼠胚胎

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