抗生素效價(jià)的測(cè)定第1頁(yè)/共23頁(yè)1.概述一、抗生素的概念及抗生素的生物檢定抗生素是由微生物所產(chǎn)生的極微量便具有選擇性地殺死或抑制其他病原微生物生長(zhǎng)的一類天然有機(jī)化合物。抗生素的生物檢定是以抗生素對(duì)微生物的抗菌效力作為效價(jià)的衡量標(biāo)準(zhǔn)。第2頁(yè)/共23頁(yè)一、抗生素的效價(jià)和單位

抗生素的含量用效價(jià)和單位表示。該詞有時(shí)不加區(qū)別統(tǒng)稱為效價(jià)單位。效價(jià)（ｐotency），指檢品的實(shí)際單位數(shù)與其標(biāo)示量的比值。常表示為效價(jià)的百分?jǐn)?shù)。單位（unit,u）單位是衡量抗生素有效成分的具體尺度。第3頁(yè)/共23頁(yè)１、重量單位以抗生素的生物活性部分重量作單位１微克（ｕｇ）＝１單位，１毫克＝１０００單位。２、類似重量單位以特定的純粹抗生素鹽類的重量作為１單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環(huán)素鹽酸鹽（包括無(wú)生物活性的鹽酸根在內(nèi)）１微克（ｕｇ）＝１單位，１毫克＝１０００個(gè)單位。這是根據(jù)國(guó)際使用習(xí)慣而來(lái)的。３、質(zhì)量折算單位以特定的純抗生素鹽的質(zhì)量為單位而加以折算。青霉素0.6ug為1單位４、特定單位以特定的抗生素標(biāo)準(zhǔn)品的某一質(zhì)量定為一單位。第4頁(yè)/共23頁(yè)微生物發(fā)的分類稀釋法濁度法雙碟法第5頁(yè)/共23頁(yè)第6頁(yè)/共23頁(yè)2、濁度法系利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對(duì)試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的抑制作用，通過(guò)測(cè)定培養(yǎng)后細(xì)菌濁度值的大小，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品對(duì)試驗(yàn)菌生長(zhǎng)抑制的程度，以測(cè)定供試品效價(jià)的種方法。第7頁(yè)/共23頁(yè)3、管碟法：是利用抗生素在含敏感試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基中的球面擴(kuò)散滲透作用，從而形成一定的抑菌圈。通過(guò)瓊脂培養(yǎng)基，可觀察并測(cè)量出抑菌圈的大小。第8頁(yè)/共23頁(yè)管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)

原理和方法一原理

在一定的抗生素濃度范圍內(nèi)，對(duì)數(shù)劑量(濃度)與抑菌圈的表面積或直徑成正比，可以得出一條曲線。

抗生素濃度換算成對(duì)數(shù)，則抑菌圈直徑與抗生素對(duì)數(shù)成直線關(guān)系第9頁(yè)/共23頁(yè)管碟法的材料一，儀器菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)皿牛角杯陶瓦圓蓋二，試劑無(wú)菌生理鹽水ph6.0的磷酸緩沖液青霉素標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液青霉素標(biāo)準(zhǔn)品使用液第10頁(yè)/共23頁(yè)管碟法測(cè)定操作1.

試驗(yàn)用菌液金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌的營(yíng)養(yǎng)斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35~37℃培養(yǎng)20h到22h，；臨用前用水或者滅菌生理鹽水溶液將菌苔洗下，備用第11頁(yè)/共23頁(yè)2供試品及標(biāo)準(zhǔn)品的配制標(biāo)準(zhǔn)品與樣品從冰箱取出后，使與室溫平衡。供試品應(yīng)放于干燥器內(nèi)至少30min方可稱取。稱量最好為一次取樣稱量，動(dòng)作迅速，不得反復(fù)稱取，取樣后立即將稱量瓶瓶蓋蓋好，以免吸水。標(biāo)準(zhǔn)品的稱量最好用1/100,000克的分析天平，樣品稱量不得低于1/10,000克的分析天平。天平中的干燥加入劑應(yīng)保持經(jīng)常注意更換。稱量結(jié)束后，超聲波處理后的磷酸緩沖液，定容至刻度，過(guò)濾并稀釋。第12頁(yè)/共23頁(yè)雙碟的制備：

取內(nèi)徑90mm、高16—17mm的平底雙碟；注入加熱融化的培養(yǎng)基20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺(tái)上使凝固，作為底層。另取培養(yǎng)基適量加熱融化后，放冷至48－50℃（芽孢可至60℃），加入規(guī)定的試驗(yàn)菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度。）二劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18－24mm。

第13頁(yè)/共23頁(yè)（二）抑菌圈的形成在平板底部四邊，分別對(duì)角注明“SH”、“SL”和“UH”、“UL”標(biāo)記將不銹鋼小管(俗稱為牛津杯)放置在含敏感試驗(yàn)菌的瓊脂培養(yǎng)基上。thsluh第14頁(yè)/共23頁(yè)以無(wú)菌滴管分別在每個(gè)牛津杯內(nèi)加入相應(yīng)的抗生素溶液至滿但不溢出管外且四杯內(nèi)液面高度相同，蓋上平皿蓋，靜置30分鐘。第15頁(yè)/共23頁(yè)將培養(yǎng)基置入適宜試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)箱中，瓊脂培養(yǎng)基中的試驗(yàn)菌開始生長(zhǎng)。第16頁(yè)/共23頁(yè)第17頁(yè)/共23頁(yè)抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關(guān)；比較抗生素標(biāo)準(zhǔn)品與檢品的抑菌圈大小，可計(jì)算出抗生素的效價(jià)。第18頁(yè)/共23頁(yè)計(jì)算檢品的效價(jià)求出W和VW=（SH+TH）-（SL+TL）V=（TH+TL）-（SH+SL）TH供試品高劑量的抑菌圈TL供試品低劑量的抑菌圈SH標(biāo)準(zhǔn)品高劑量的抑菌圈SL標(biāo)準(zhǔn)品低劑量的抑菌圈第19頁(yè)/共23頁(yè)求出θ=D·log（IV/W）θ供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的效價(jià)比D標(biāo)準(zhǔn)品高劑量與供試品高劑量之比，一般為1I高低劑量之比的對(duì)數(shù)，即log2或