藥品微生物檢驗特點及過程限制藥品因素環(huán)境影響培育視察抽樣檢查破壞試驗方法驗證過程限制1中國藥品生物制品檢定所無菌/微生物限度檢查理念環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查靈敏度檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷2中國藥品生物制品檢定所微生物檢查的過程限制一、試驗設(shè)施（硬件——物質(zhì)保障）二、檢驗程序（軟件——有效的結(jié)果）三、結(jié)果推斷（調(diào)查——牢靠的結(jié)論）3中國藥品生物制品檢定所一、試驗設(shè)施試驗室系統(tǒng)操作環(huán)境關(guān)鍵設(shè)備比照培育基物質(zhì)保障4中國藥品生物制品檢定所（一）、試驗室系統(tǒng)干凈試驗條件有效性：整體10000級、局部100級。平安性：愛護(hù)樣品、人員和環(huán)境。可操作性：便利、快捷、順暢。干凈試驗條件的維護(hù)、驗證陽性菌試驗室達(dá)到P2生物平安標(biāo)準(zhǔn)5中國藥品生物制品檢定所試驗室改造示例：原布局圖

擬定布局圖

建議布局圖1

建議布局圖2

試驗室系統(tǒng)——中檢所微生物試驗室6中國藥品生物制品檢定所（一）、試驗室系統(tǒng)試驗室系統(tǒng)的管理與維護(hù)：1、屏障系統(tǒng)的有效性壓差、風(fēng)速、微粒、照度（外包服務(wù)合同）2、清潔、靜態(tài)與動態(tài)監(jiān)控、熏蒸3、環(huán)境菌庫酒精棉球分別微生物新潔爾滅分別微生物7中國藥品生物制品檢定所環(huán)境菌庫干凈環(huán)境常見菌（浮游菌）：頭狀葡萄球菌（Staphylococcus

capitis）溶血葡萄球菌（Staphylococcus

haemolyticus）緩癥鏈球菌（Streptococcus

mitis）科氏葡萄球菌（Staphylococcus

cohnii）藤黃微球菌（Micrococcus

luteus）8中國藥品生物制品檢定所（二）、操作環(huán)境1、隔離器2、生物平安柜3、超凈工作臺9中國藥品生物制品檢定所（二）、操作環(huán)境10中國藥品生物制品檢定所搽拭菌液稀釋、分液的誤差為：5.5%表面搽拭操作的回收率大于99%11中國藥品生物制品檢定所（三）、關(guān)鍵設(shè)備微生物檢查薄膜過濾儀一次性薄膜過濾培育器應(yīng)急檢驗用一次性薄膜過濾培育器12中國藥品生物制品檢定所（四）、比照培育基培育基適用性（靈敏度）；培育基性能穩(wěn)定性（標(biāo)準(zhǔn)化）。比照培育基理化評價（可控性）生物學(xué)評價（有效性）回收率比較MPN比較生長曲線比較生態(tài)評價某些CRS原則固態(tài)培育基液態(tài)培育基瓊脂加減法13中國藥品生物制品檢定所二、檢驗程序環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查靈敏度檢查有效的方法方法驗證SOP操作有效的結(jié)果可靠的結(jié)論結(jié)果判斷14中國藥品生物制品檢定所二、檢驗程序接受任務(wù)試驗方案試驗準(zhǔn)備樣品核對試驗操作過程監(jiān)控培育視察有效的結(jié)果物質(zhì)保障15中國藥品生物制品檢定所試驗室管理規(guī)范（軟件）中檢所抗生素室微生物試驗室質(zhì)量管理體系編寫說明及批準(zhǔn)頁1試驗室概況1.1試驗室簡介1.2試驗室通訊資料1.3試驗室認(rèn)可項目/參數(shù)表1.4試驗室平面圖及功能區(qū)域1.5儀器設(shè)備總覽1.6常備試劑耗材一覽表1.7試驗室發(fā)展目標(biāo)2管理規(guī)范2.1平安管理2.2業(yè)務(wù)流程2.3人員管理（6個SOP）2.4樣品管理（3個SOP）3標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程3.1檢驗工作SOP（13個）3.2儀器操作SOP（30個）3.3試驗記錄SOP（9個）4試驗室保障4.1試驗室設(shè)施、設(shè)備及消耗品供應(yīng)商確定原則4.2試驗室設(shè)施服務(wù)商4.3試驗設(shè)備供應(yīng)商4.4試驗室消耗品供應(yīng)商16中國藥品生物制品檢定所（一）、試驗準(zhǔn)備試驗準(zhǔn)備應(yīng)堅持“平戰(zhàn)結(jié)合”，物質(zhì)準(zhǔn)備有備無患，應(yīng)隨時保證“來之能戰(zhàn)”。尤其留意常備有效期要求的物品：培育基、沖洗液、濾器、小型試驗器材等。17中國藥品生物制品檢定所試驗準(zhǔn)備——無菌室專用酒精棉球制備

試驗準(zhǔn)備——場地清潔

試驗準(zhǔn)備——臺面清潔

18中國藥品生物制品檢定所（二）、樣品核對盡快取得樣品，確保樣品傳遞過程中的完整性、平安性、有效性；細(xì)致核對樣品及樣品資料，高度關(guān)注媒體公布樣品（問題樣品），同時盡量獲得非問題樣品及同類樣品，進(jìn)行比較試驗、比較分析；樣品外觀檢查、完整性檢查。19中國藥品生物制品檢定所樣品外觀檢查——欣弗

樣品外觀檢查——刺五加

樣品外觀檢查——雙黃連

樣品完整性真空檢漏

20中國藥品生物制品檢定所（三）、試驗操作不斷完善標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（SOP），嚴(yán)格避開試驗室污染。實驗人員培養(yǎng)基實驗器材實驗環(huán)境檢驗結(jié)果待檢樣品原料輔料設(shè)備環(huán)境藥品（食品）人員藥品食品生產(chǎn)過程中可能污染微生物的主要環(huán)節(jié)藥品食品微生物檢查過程中可能污染微生物的主要環(huán)節(jié)21中國藥品生物制品檢定所試驗操作——物料進(jìn)場消毒液搽拭物品外表面干凈傳遞（風(fēng)淋、紫外照射）雙層無菌包裝核心區(qū)外圍試驗操作——人員進(jìn)場一更二更核心操作區(qū)試驗操作——無菌操作技術(shù)22中國藥品生物制品檢定所（四）、試驗過程監(jiān)控樣品監(jiān)控手指監(jiān)控沉降菌監(jiān)控?zé)o菌檢驗框架示意圖23中國藥品生物制品檢定所三、結(jié)果推斷長菌與否分別鑒定溯源調(diào)查結(jié)果報告牢靠的結(jié)論有效的結(jié)果物質(zhì)保障24中國藥品生物制品檢定所三、結(jié)果推斷是不是微生物？是什么微生物？微生物來自哪里？幾點思索

參見：《FTIR法用于藥品檢出菌與藥品微生物檢驗干凈室環(huán)境菌的相像性考察》《藥學(xué)學(xué)報》，2007，42（11）：1189～1194《推斷無菌檢查陽性結(jié)果有效性的試驗探討》《藥物分析雜志》，2008，28（05）：66～7125中國藥品生物制品檢定所1、長菌與否？渾不渾濁?物理變更、化學(xué)變更還是生物變更？一靠閱歷二靠試驗三靠嚴(yán)格程序限制避開干擾26中國藥品生物制品檢定所是不是微生物？（1）、液體培育基渾濁物理變更？化學(xué)變更？生物學(xué)變更？（2）、平板上的菌落瓊脂表面、瓊脂中、瓊脂和平皿夾層菌落or藥渣？27中國藥品生物制品檢定所菌落or藥渣？經(jīng)60Coγ射線大劑量照射再檢驗延長培育時間到7天重新劃線培育鏡檢28中國藥品生物制品檢定所2、分別鑒定（1）馬上轉(zhuǎn)接2ml該培育物至相同的培育基中接著培育；（2）取5支凍存管，每管分裝1ml渾濁培育物，-80℃保存；（3）取渾濁培育物在TSA平板/血瓊脂上劃線，分別污染微生物；（4）假如發(fā)覺硫乙醇酸鹽流體培育管變渾濁，還應(yīng)增加血平板劃線，并在厭氧條件下培育分別厭氧菌。由平板分別到的菌落應(yīng)進(jìn)一步鑒定，并逐一保藏。29中國藥品生物制品檢定所是什么微生物？宏觀：生長形態(tài)微觀：鏡檢鑒定：生化鑒定（API、BD）核酸鑒定（16sRNA、DNA）……30中國藥品生物制品檢定所3、溯源調(diào)查樣品陽性培育物分別菌株檢驗過程監(jiān)控菌株環(huán)境菌（近期、遠(yuǎn)期）現(xiàn)場調(diào)查收集菌株鑒定與相像性分析相結(jié)合傳統(tǒng)方法與新技術(shù)相結(jié)合不同方法的交叉驗證31中國藥品生物制品檢定所微生物來自哪里？相像性分析同源性分析脈沖場電泳（PFGE）、傅立葉紅外（FTIR）

32中國藥品生物制品檢定所SamplePreparationAutomatedmeasurementafterdryingofthesamples!2.Suspending1.Harvesting3.LoadingFT-IRSpektrumofmicroorganisms圖不同來源的陰溝腸桿菌紅外圖譜聚類關(guān)系33中國藥品生物制品檢定所TheInfraredSpectrumlipidsproteinscarbohydratessaltswatercellwallcapsulesDNA,RNAflagellates,piliribosomevacuoles...FT-IRspectrumisafingerprintofthecellsBiochemicalStructureofCells34中國藥品生物制品檢定所35中國藥品生物制品檢定所溯源性分析例1——欣弗事務(wù)圖29欣弗培育物圖30欣弗培育物分別菌株鏡檢36中國藥品生物制品檢定所37中國藥品生物制品檢定所溯源性分析例1——欣弗事務(wù)頭狀葡萄球菌頭狀亞種（Staphylococcus

capitissspcapitis）溶血葡萄球菌（Staphylococcus

haemolyticus）緩癥鏈球菌（Streptococcus

mitis）科氏葡萄球菌科氏亞種（Staphylococcus

cohniissp

cohnii）藤黃微球菌（Micrococcus

luteus）溶血葡萄球菌（Staphylococcus

haemolyticus）。監(jiān)測到的環(huán)境菌株38中國藥品生物制品檢定所溯源性分析例2雙黃連注射液利巴韋林注射液FTIR相像性分析DuPontRiboPrinter基因指紋分析39中國藥品生物制品檢定所幾點思索（1）、怎樣才算是同一株菌？須要深化相識微生物本身微生物變異與保守的相對性；分析方法的可變性與微生物本身的可變性；生物學(xué)先鋒琳恩·馬古利斯(LynnMargulis)曾表示：“假如將一個特殊的質(zhì)粒植入大腸桿菌，大腸桿菌便會突然間變成克雷伯氏桿菌”。40中國藥品生物制品檢定所幾點思索（2）、什么是最適宜的技術(shù)？須要深化相識分析微生物的技術(shù)和手段形態(tài)學(xué)分析與相像性分析（生化反應(yīng)譜、片段相像性、FTIR光譜相像性等），在權(quán)衡方法本身的邊界和微生物變異性邊界的基礎(chǔ)上，似乎更適合對親緣關(guān)系下一個否定的結(jié)論，即解除法，在這個意義上是否可以引入化學(xué)分析的3δ概念、精密度概念？41中國藥品生物制品檢定所4、幾點思索（2）、什么是最適宜的技術(shù)？16sRNAcDNA序列，須要探討，太保守不利于區(qū)分；變異率太高（高到一般傳代、培育難以限制）則沒有意義。但一般來說16sRNAcDNA序列水平具有確定意義，困難在于確定足夠長。溯源分析不僅僅是鑒定到種，而是到株，對菌株的穩(wěn)定性相識？與之相關(guān)的技術(shù)粗放性問題。42中國藥品生物制品檢定所4、幾點思索（3）、怎樣下結(jié)論？分析的根本目的是要下一個結(jié)論以檢驗活動為中心、以檢驗過程為線索、以實驗事實為依據(jù)，依據(jù)全部信息的綜合分析實力。對陽性檢出菌的技術(shù)分析最終要回到檢驗活動本身，技術(shù)分析結(jié)論

43中國藥品生