天津醫(yī)科大學(xué)級碩士論文答辯歡迎各位專家

蒞臨指導(dǎo)補(bǔ)腎活血法對阿霉素腎病小鼠

腎組織wt1表達(dá)的影響

專業(yè):中西醫(yī)結(jié)合臨床目錄縮略語前言研究目的對象與方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論結(jié)論致謝縮略語FSGS局灶節(jié)段性腎小球硬化

HE蘇木素-伊紅染色

PASM六胺銀染色RT-PCR反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)

SRC補(bǔ)腎活血方劑前言局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)是一種具有多種病因、發(fā)病機(jī)制及組織損傷類型的臨床病理綜合征,其特點(diǎn)多為蛋白尿,常為腎病性蛋白尿,伴有局灶節(jié)段性腎小球硬化和足突的消失,足細(xì)胞損傷被認(rèn)為是腎小球硬化發(fā)生發(fā)展的始動因素前言阿霉素腎病鹽酸阿霉素是一種強(qiáng)效的抗腫瘤藥物,對機(jī)體具有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒作用,阿霉素及其代謝產(chǎn)物通過脂質(zhì)過氧化反應(yīng)改變足細(xì)胞表面糖蛋白結(jié)構(gòu)及分布,導(dǎo)致足細(xì)胞足突融合和足細(xì)胞缺失,破壞了正常濾過膜的結(jié)構(gòu)和功能,導(dǎo)致蛋白尿生成,最終形成腎小球硬化,從而產(chǎn)生了與人類FSGS相似的病理變化。前言wt1是一種腫瘤抑制基因,近幾年的研究已發(fā)現(xiàn),wt1與許多腎小球疾病的發(fā)生有聯(lián)系,其表達(dá)則僅限于足細(xì)胞。wt1對維持正常的足細(xì)胞功能起著非常重要的作用,細(xì)胞裂隙孔膜處的重要蛋白分子nephrin證實(shí)是由wt1轉(zhuǎn)錄活化的,其染色間接反映腎小球足細(xì)胞數(shù)量。前言FSGS臨床上治療較為困難,目前多數(shù)主張采用綜合治療,包括低蛋白飲食,維生素,激素,免疫抑制劑,環(huán)孢素A,降脂藥物,抗凝,血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑,血漿置換,移植腎及中藥治療等手段。

中醫(yī)藥治療腎臟疾病具有多途徑、多層次、多靶點(diǎn)的治療特色，有良好的應(yīng)用前景。前言

補(bǔ)腎活血法是由張大寧教授1978年在國內(nèi)首先提出的一種新興的中醫(yī)臨床治療方法。他在多年的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)腎病患者存在不同程度的腎虛與血淤,符合古人“久病及腎,久病多淤”的觀點(diǎn),由此提出“補(bǔ)腎活血法”,以補(bǔ)腎活血法為依據(jù)的組方中藥具有補(bǔ)腎、活血、軟堅(jiān)的功效,可改善腎虛血淤所致病理變化,使機(jī)體陰陽平衡、邪祛正存。研究目的

觀察補(bǔ)腎活血法中藥對阿霉素誘導(dǎo)的阿霉素腎病小鼠腎組織wt1表達(dá)水平的影響

探討補(bǔ)腎活血法中藥減輕FSGS腎臟損傷的可能機(jī)制對象及方法

ADR單次尾靜脈注射誘導(dǎo)BALB/c小鼠FSGS模型

BALB/c(24只）適應(yīng)性喂養(yǎng)1周對照組（5只）造模組（19只）ADR模型組（6只）治療組（6只）等體積鹽水對照組（5只）剔除死亡小鼠等體積蒸餾水中藥（10ul/g.d）灌胃灌胃灌胃對象及方法補(bǔ)腎活血方劑90%乙醇加熱回流2次生黃芪

五味子

半枝蓮

青蒿

五靈脂

蒲黃炭丹參

川芎

草決明

大黃

大黃炭

茵陳

脂溶性對象及方法體重由電子天平測量，均為清晨排尿前體重，每周測量一次。檢測血清白蛋白(Alb)計(jì)算尿蛋白排泄率（UAE）=尿白蛋白濃度（mg/L）×尿量（ml）/24h尿量（ml）。對象及方法

小鼠戊巴比妥麻醉后處死切取左腎組織HEPASM免疫熒光RT-PCR灌胃6周后用戊巴比妥麻醉處死對象及方法統(tǒng)計(jì)學(xué)方法（所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理）多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA）方差齊者組間兩兩比較用LSD法方差不齊者采用Dunnett’sT3檢驗(yàn)檢驗(yàn)水準(zhǔn)а=0.05，

P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各組受試者體質(zhì)量、右腎質(zhì)量比較組別n體質(zhì)量(g)右腎質(zhì)量（g)對照組(1)530.981±0.5910.202±0.011模型組(2)625.354±1.1720.178±0.005治療組(3)628.925±0.2760.183±0.002F6.306*1.623

P(1)：(2)0.0200.136

(2)：(3)0.0401.000

(1)：(3)0.0080.136*P<0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各組受試者ALB、UAE比較組別nALB(g/l)UAE(mg/24h)對照組(1)526.728±0.518

11.499±0.146

模型組(2)620.160±0.63670.453±0.603

治療組(3)626.167±0.59430.784±0.526F27.362**

3609.636**

P(1)：(2)

<0.001

<0.001

(2)：(3)

0.001

0.005

(1)：(3)0.504<0.001

**P<0.001實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果

腎臟組織形態(tài)學(xué)對照9W組DM6W組DM9W組對照組模型組治療組圖1：各組HE染色×400對照組腎組織腎小球和腎小管的形態(tài)、結(jié)構(gòu)均正常。模型組腎小球毛細(xì)血管襻面積減少,部分毛細(xì)血管腔變窄甚至完全閉塞,腎小球呈局灶節(jié)段性硬化;腎小球血管袢和腎小球囊粘連。治療組腎組織形態(tài)學(xué)變化較模型組顯著減輕。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

腎臟組織形態(tài)學(xué)圖2：各組PASM染色×400

對照組腎組織腎小球和腎小管的形態(tài)、結(jié)構(gòu)均正常，模型組可見腎小球基底膜增厚，階段性硬化，治療組減輕實(shí)驗(yàn)結(jié)果

wt1免疫熒光結(jié)果圖3各組wt1免疫熒光×200

對照組wt1正常表達(dá)于腎小球內(nèi)，沿毛細(xì)血管壁呈均勻分布。模型組可見節(jié)段性缺失；治療組腎小球wt1表達(dá)輕微缺失。

RT-PCR結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1234561、2：對照組；3、4：ADRN模型組；5、6：治療組圖5-1各組RT-PCR結(jié)果比較wt1GAPDH實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論

SRC對FSGS的治療作用及機(jī)制研究蛋白尿足細(xì)胞損傷

FSGS腎臟損傷wt1足細(xì)胞表型失調(diào)nephrin表現(xiàn)蛋白尿腎小球硬化足突融合討論SRC對FSGS的治療作用及機(jī)制研究體重UAEHE、PASM腎組織形態(tài)學(xué)免疫熒光wt1表達(dá)RT-PCR示wt1表達(dá)治療組

治療后結(jié)論阿霉素腎病小鼠模型組體重、血白蛋白水平下降，蛋白尿增加，wt1的表達(dá)減弱。結(jié)論補(bǔ)腎活血方劑可以提高小鼠體重、血白蛋白水平、減少蛋白尿，改善腎臟硬化程度。增強(qiáng)wt1的表達(dá)，阻止和延緩腎小球的硬化進(jìn)展。創(chuàng)新與不足FSGS臨床上治療較為困難,西藥作用的位點(diǎn)比較單一，臨床治療療效不是非常理想，而中藥能從多個(gè)作用位點(diǎn)保護(hù)腎臟，改善臨床癥狀，減輕蛋白尿，對于FSGS治療有著廣闊的發(fā)展前景，本實(shí)驗(yàn)探討補(bǔ)腎活血法對FSGS的治療效果，為FSGS治療開辟新的途徑。創(chuàng)新創(chuàng)新與不足

復(fù)方提取液，具體藥效成分不明確，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行單味藥研究，以期明確具體藥效成分深入探討該藥抑制蛋白尿的分子機(jī)制體外細(xì)胞培養(yǎng)，深入探討該藥起作用的分子途徑不足致謝

飲其流時(shí)思其源，吾成學(xué)時(shí)念吾師、三年的碩士研究生的學(xué)習(xí)和生活就要隨著這篇論文的答辯而結(jié)束了。首先謹(jǐn)向我尊敬的導(dǎo)師張勉之老師致以誠摯的謝意和崇高的敬意。導(dǎo)師嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)態(tài)度、高度的敬業(yè)精神、兢兢業(yè)業(yè)的工