1第二章藥品判別試驗(yàn)藥物鑒別試驗(yàn)授課第1頁(yè)2/45一、判別定義Identification中國(guó)藥典年版定義判別項(xiàng)下要求試驗(yàn)方法，僅反應(yīng)該藥品一些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)特征，不完全代表對(duì)該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)確證。★注意：判別試驗(yàn)方法僅證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中藥品是否為其所標(biāo)示藥品，而非對(duì)未知物進(jìn)行定性分析。藥物鑒別試驗(yàn)授課第2頁(yè)3/45藥品質(zhì)量檢驗(yàn)工作中首項(xiàng)任務(wù)含量測(cè)定方法相同，采取中性乙醇溶解供試品后，用0.1mol/lNaOH進(jìn)行滴定，酚酞為指示劑指示終點(diǎn)。藥物鑒別試驗(yàn)授課第3頁(yè)4/45二、判別試驗(yàn)項(xiàng)目性狀（Description)普通判別試驗(yàn)

（generalidentificationtest）專屬判別試驗(yàn)

（specificidentificationtest）藥物鑒別試驗(yàn)授課第4頁(yè)5/45（一）性狀藥品性狀（description）反應(yīng)了藥品特有物理性質(zhì)，普通包含外觀、溶解度和物理常數(shù)等。1.外觀：指藥品聚集狀態(tài)、晶型、色澤以及臭、味等性質(zhì)。2.溶解度：藥典采取“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來描述藥品在不一樣溶劑中溶解性能。藥物鑒別試驗(yàn)授課第5頁(yè)6/45水楊酸阿司匹林外觀白色細(xì)微針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭或幾乎無臭白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭或微帶醋酸臭溶解度在乙醇或乙醚中易溶；

在沸水中溶解；

在三氯甲烷中略溶；在水中微溶在乙醇中易溶；

在三氯甲烷或乙醚中溶解；

在水或無水乙醚中微溶；

在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時(shí)分解藥物鑒別試驗(yàn)授課第6頁(yè)7/45（一）性狀3.物理常數(shù):

不但對(duì)藥品含有判別意義，也反應(yīng)了該藥品純雜程度。藥典收載物理常數(shù)包含：相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。水楊酸阿司匹林熔點(diǎn)158-161℃135-138℃（1）熔點(diǎn)：固體→液體溫度藥物鑒別試驗(yàn)授課第7頁(yè)8/45（一）性狀（2）比旋度:在一定波長(zhǎng)與溫度下，偏振光透過長(zhǎng)1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g溶液時(shí)測(cè)得旋光度稱為比旋度。是反應(yīng)手性藥品特征及其純度主要指標(biāo)，用于判別藥品、含量測(cè)定。附錄VIE旋光度測(cè)定法藥物鑒別試驗(yàn)授課第8頁(yè)9/45已知比旋度，怎樣求算物質(zhì)含量？《藥品分析試驗(yàn)指導(dǎo)》P170，葡萄糖含量測(cè)定[α]為比旋度；α為旋光度；l為光程長(zhǎng)短（dm）；c為每100ml中含有干燥品物質(zhì)重量（g）藥物鑒別試驗(yàn)授課第9頁(yè)10/45（一）性狀（3）吸收系數(shù)：在給定波長(zhǎng)、溶劑和溫度等條件下，吸光物質(zhì)在單位濃度、單位液層厚度時(shí)吸收度稱為吸收系數(shù)。有兩種表示方式：摩爾吸收系數(shù)和百分吸收系數(shù)。后者是中國(guó)藥典收載方法，它是指在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1％（W/V)，厚度為lcm時(shí)吸收度，用表示，用于考查藥品質(zhì)量，定量分析。藥物鑒別試驗(yàn)授課第10頁(yè)11/45幾個(gè)常見喹諾酮類藥品紫外吸收特征藥品介質(zhì)λmax(nm)諾氟沙星0.1mol/LNaOH2731098司帕沙星0.025mol/LNaOH291691洛美沙星0.1mol/LHCl287975吡哌酸0.1mol/LHCl2751630氧氟沙星0.1mol/LHCl226；294918甲磺酸培氟沙星0.1mol/LHCl2771001由吡啶酮酸并聯(lián)苯環(huán)、吡啶環(huán)或嘧啶環(huán)等芳香環(huán)組成化合物藥物鑒別試驗(yàn)授課第11頁(yè)12/45(二)普通判別試驗(yàn)（generalidentificationtest）

依據(jù)某一類藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)特征，經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)來判別藥品真?zhèn)巍o機(jī)藥品：藥品中陰離子和陽(yáng)離子特殊反應(yīng)；有機(jī)藥品：經(jīng)典官能團(tuán)反應(yīng)。普通判別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥品，而不能證實(shí)是哪一個(gè)藥品。通常普通判別試驗(yàn)不適合用于數(shù)種化學(xué)藥品混合物判別或在有干擾物質(zhì)存在時(shí)判別。藥物鑒別試驗(yàn)授課第12頁(yè)13/45普通判別試驗(yàn)項(xiàng)目

丙二酰脲類：苯巴比妥芳香第一胺類：對(duì)乙酰氨基酚托烷生物堿類：硫酸阿托品有機(jī)酸鹽：阿司匹林無機(jī)金屬鹽類：鈉鹽無機(jī)酸鹽：氯化物有機(jī)氟化物類：氟康唑藥物鑒別試驗(yàn)授課第13頁(yè)14/45水楊酸鹽（Salicylates）判別試驗(yàn)方法1：取水楊酸供試品水溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。原理本品在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成配位化合物。方法2：取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀；分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。藥物鑒別試驗(yàn)授課第14頁(yè)15/45（三）專屬判別試驗(yàn)（specificidentificationtest）證實(shí)某一個(gè)藥品依據(jù)，它是依據(jù)每一個(gè)藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)差異及其所引發(fā)物理化學(xué)特征不一樣，選取一些特有靈敏定性反應(yīng)，來判別藥品真?zhèn)巍Ｗ⒁馀c普通判別試驗(yàn)區(qū)分★共性中找尋個(gè)性差異藥物鑒別試驗(yàn)授課第15頁(yè)16/45加碳酸鈉試液煮沸后放冷，加過量稀硫酸，析出白色沉淀，并有醋酸臭味+H2SO4CH3COOH藥物鑒別試驗(yàn)授課第16頁(yè)17/45三、判別方法藥品判別方法要求專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，靈敏度高，以及操作簡(jiǎn)便、快速等★對(duì)于化學(xué)藥品，慣用判別方法有化學(xué)法，光譜法，色譜法和生物學(xué)法。★對(duì)于中藥材及其制劑等，還有顯微判別法和特征圖譜或指紋圖譜。藥物鑒別試驗(yàn)授課第17頁(yè)18/45（一）化學(xué)判別法標(biāo)準(zhǔn)：反應(yīng)快速、現(xiàn)象顯著，含有明確原理慣用方法：呈色反應(yīng)判別沉淀生成反應(yīng)判別熒光反應(yīng)判別氣體生成反應(yīng)判別使試劑褪色判別測(cè)生成物熔點(diǎn)藥物鑒別試驗(yàn)授課第18頁(yè)19/451.呈色反應(yīng)判別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)試劑溶液，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀察有色產(chǎn)物。在判別試驗(yàn)中最為慣用反應(yīng)類型有：（1）三氯化鐵呈色反應(yīng)：普通都含有酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基；（2）異羥酸鐵反應(yīng)：普通多為芳酸及其脂類、酰胺類；藥物鑒別試驗(yàn)授課第19頁(yè)20/45（3）茚三酮呈色反應(yīng)：氨基酸及氨基糖苷；（4）重氮化一偶合顯色反應(yīng)：普通都有芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基；1.呈色反應(yīng)判別法：藥物鑒別試驗(yàn)授課第20頁(yè)21/452.沉淀生成反應(yīng)判別法：系指供試品溶液中加入適當(dāng)試劑溶液，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成不一樣顏色和含有特殊形狀沉淀。慣用沉淀反應(yīng)有：（1）與重金屬離子沉淀反應(yīng)：在一定條件下，藥品和重金屬離子反應(yīng)，生成不一樣形式沉淀；（2）與硫氰化鉻胺（雷氏鹽）沉淀反應(yīng)：這類藥品多為生物堿及其鹽和含有芳香環(huán)有機(jī)堿及其鹽；藥物鑒別試驗(yàn)授課第21頁(yè)22/453.熒光反應(yīng)判別法慣用熒光發(fā)射形式有以下類型：（1）藥品本身（2）藥品溶液加硫酸使呈酸性后（3）藥品和溴反應(yīng)后（4）藥品和間苯二酚反應(yīng)后在可見光下發(fā)射熒光；藥物鑒別試驗(yàn)授課第22頁(yè)23/454.氣體生成反應(yīng)判別法胺類藥品、酰脲類藥品以及一些酰胺類藥品：經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨氣；含硫藥品：可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體；含碘有機(jī)藥品：經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥品：經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生醋酸乙酯香味。藥物鑒別試驗(yàn)授課第23頁(yè)24/45例：葡萄糖判別——呈色反應(yīng)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，緩緩滴入微溫堿性酒石酸銅試液中，即生成氧化亞銅紅色沉淀藥物鑒別試驗(yàn)授課第24頁(yè)25/45（二）光譜判別法1.紅外光譜法專屬性強(qiáng)、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確原料藥，尤其適合于結(jié)構(gòu)復(fù)雜、細(xì)微差異同類藥品，如磺胺類、甾體激素類和抗生素類藥品。判別方法：中國(guó)藥典和BP均采取標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法；USP采取對(duì)照品法。藥物鑒別試驗(yàn)授課第25頁(yè)26/45藥物鑒別試驗(yàn)授課第26頁(yè)27/45試樣制備方法壓片法、糊法、膜法、溶液法應(yīng)用光譜圖對(duì)照時(shí)應(yīng)注意問題：（1）固體藥品晶型（2）供試片制備條件（3）CO2和水汽等大氣干擾（4）儀器間分辨率及操作條件影響（5）多組分藥品與多晶型現(xiàn)象（6）制劑判別2.紅外光譜法藥物鑒別試驗(yàn)授課第27頁(yè)28/452.紫外光譜法★光譜簡(jiǎn)單，專屬性差。★慣用方法有：

（1）測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)；

（2）要求一定濃度供試液在最大吸收波優(yōu)點(diǎn)吸收度；

（3）要求吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法；

（4）要求吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法；

（5）經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物吸收光譜特征。

以上方法能夠單個(gè)應(yīng)用，也可幾個(gè)結(jié)合起來使用，以提升方法專屬性。藥物鑒別試驗(yàn)授課第28頁(yè)29/45

示例一取色甘酸鈉，加磷酸鹽緩沖液（pH7.4）溶解并稀釋成每1ml中約含10μg溶液，照紫外-可見分光光度法（附錄IVA）測(cè)定，在238nm與326nm波優(yōu)點(diǎn)有最大吸收。對(duì)比吸收光譜特征參數(shù)藥物鑒別試驗(yàn)授課第29頁(yè)30/45示例二取對(duì)氨基水楊酸鈉250mg，加1mol/L氫氧化鈉溶液3ml，溶解后轉(zhuǎn)移至500ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。精密吸收5ml溶液置于內(nèi)含pH7磷酸鹽緩沖液12.5ml250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即為供試品溶液。另配制相同濃度緩沖溶液空白對(duì)照液。于2652nm和2952nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定吸收度A265和A295，要求A265/A295值應(yīng)在1.50～1.56之間。對(duì)比要求吸收波長(zhǎng)吸收度比值藥物鑒別試驗(yàn)授課第30頁(yè)31/45

示例三

USP(30)采取對(duì)照品法，將樣品與對(duì)照品按同法處理，在200400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描兩溶液，要求在相同波優(yōu)點(diǎn)有最大吸收、最小吸收和相同吸收系數(shù)，或吸收比在要求程度內(nèi)。

阿替洛爾紫外光譜判別：“本品50μg/ml甲醇溶液顯示紫外光譜圖與相同條件下測(cè)得USP阿替洛爾參考標(biāo)準(zhǔn)品紫外光譜圖一致”對(duì)比吸收光譜一致性藥物鑒別試驗(yàn)授課第31頁(yè)32/45（三）色譜判別法★利用不一樣物質(zhì)在不一樣色譜條件下，產(chǎn)生各自特征色譜行為（Rf值或保留時(shí)間）進(jìn)行判別試驗(yàn)。采取與對(duì)照品（或經(jīng)確證已知藥品）在相同條件下進(jìn)行色譜分離，并進(jìn)行比較判別。藥物鑒別試驗(yàn)授課第32頁(yè)33/451.薄層色譜法ChP中對(duì)TLC判別法要求對(duì)照品供試品對(duì)照品混合供試品供試品結(jié)構(gòu)類似品供試品混合結(jié)構(gòu)類似品比移值+顏色綜合考慮一致性試驗(yàn)中考慮：供試品/對(duì)照品；薄層板；展開劑；顯色劑藥物鑒別試驗(yàn)授課第33頁(yè)34/452.HPLC和GC法普通要求按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)。要求供試品和對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間應(yīng)一致。

內(nèi)標(biāo)法時(shí)，要求藥品與內(nèi)標(biāo)物峰保留時(shí)間比值也應(yīng)相同。藥物鑒別試驗(yàn)授課第34頁(yè)35/45阿司匹林和阿司匹林片阿司匹林-原料藥判別：酚羥基顯色/酯鍵水解/紅外光譜阿司匹林片-制劑判別：藥物鑒別試驗(yàn)授課第35頁(yè)36/45（四）顯微判別法主要用于中藥及其制劑判別綜合藥用植物學(xué)與生藥學(xué)知識(shí)實(shí)現(xiàn)（五）生物學(xué)法主要用于抗生素、生化藥品及中藥判別利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等相關(guān)技術(shù)來判定藥品品質(zhì)一個(gè)方法藥物鑒別試驗(yàn)授課第36頁(yè)37/45（六）指紋圖譜與特征圖譜判別法經(jīng)過對(duì)所得到能夠表達(dá)中藥整體特征圖譜識(shí)別，提供一個(gè)能夠比較全方面控制中藥質(zhì)量方法，從化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)角度確保中藥制劑穩(wěn)定和可靠分析方法建立—指紋圖譜認(rèn)證—方法驗(yàn)證—數(shù)據(jù)處理與分析藥物鑒別試驗(yàn)授課第37頁(yè)38/45虎杖藥材對(duì)照指紋圖譜藥物鑒別試驗(yàn)授課第38頁(yè)39/4522批不一樣起源虎杖樣品經(jīng)校正后匹配圖藥物鑒別試驗(yàn)授課第39頁(yè)40/45四、判別試驗(yàn)條件及方法驗(yàn)證溶液濃度溶液溫度溶液酸堿度干擾成份存在試驗(yàn)時(shí)間藥物鑒別試驗(yàn)授課第40頁(yè)41/45方法驗(yàn)證★專屬性：在其它成份存在情況下，采取判別方法能否正確判別出被測(cè)物質(zhì)特征；普通選擇采取兩種以上不一樣類型方法★耐用性：測(cè)定條件發(fā)生微小變動(dòng)時(shí)，測(cè)