血流感染實驗室診斷新方法第一頁，共六十五頁，2022年，8月28日二血流感染與診斷金標準一微生物與人體感染三全自動血培養技術與臨床的聯系提綱第二頁，共六十五頁，2022年，8月28日一微生物與人體感染第三頁，共六十五頁，2022年，8月28日人類共生微生物（正常菌群）：宿主生命早期建立并持續終生，相互受益。微生物與人體宿主的關系病原菌：能引起疾病的微生物寄居位置改變、免疫低下、平衡失調等共生微生物與病原菌都是人體廣義的“感染微生物”，感染結果由微生物與人體之間相互作用的復雜結果來決定。第四頁，共六十五頁，2022年，8月28日感染微生物毒力

因子的強弱感染結局人體特異性防御機制的強弱錯綜復雜的相互作用

嚴重感染：大范圍疾病體征慢性感染：病態體征或不表現病態全部清除：痊愈三種結局事實上，只有很少的微生物能使人體致病！第五頁，共六十五頁，2022年，8月28日

●外毒素和內毒素：

外毒素是微生物對數生長期分泌的熱穩定蛋白質，內毒素是革蘭氏陰性菌外膜上毒性脂質部分，引起發熱、發疹、惡心嘔吐、多器官損害與衰竭等全身癥狀；

●粘附：如腸致病性大腸桿菌；

●動力：如細菌的鞭毛；

●血清抗性：抗補體對脂多層的溶解，常引起全身性感染；

●莢膜：抗吞噬，如新型隱球菌；

●細胞內生存：抗吞噬，如鼠弓形體；

●酶：能水解宿主細胞組織；

●攝取鐵的機制：產生溶血素，如流感嗜血桿菌；

●抗原變異：引起宿主免疫交叉反應，自身免疫反應；

……

了解一下微生物毒力因子第六頁，共六十五頁，2022年，8月28日

●初級防御：

完善的屏障體系（皮膚、粘膜、纖毛、粘液等）、皮膚脂肪酸積聚、PH高或低、氧張力、正常菌群營養和細胞膜結合位競爭、酶及酸等；

●次級防御：

補體、溶菌酶、血液與淋巴液中噬菌素、吞噬細胞、抗體等體液免疫與細胞免疫；

……

了解一下人體防御機制第七頁，共六十五頁，2022年，8月28日

微生物感染中，血流感染常造成嚴重的后果，死亡率達到32%-54%，

及早明確診斷，便于合理用藥和分析提示預后…

微生物與人體感染第八頁，共六十五頁，2022年，8月28日二血流感染與診斷金標準第九頁，共六十五頁，2022年，8月28日血流感染血敗血癥（septicemia）

菌血癥(bacteremia）

膿毒血癥（fyemia）

真菌血癥（fungemia）泛指是指病原菌及其毒素侵入血流所引起的一類臨床綜合征。病程

中常有炎癥介質的激活和釋放，引起高熱、寒戰、心動過速

呼吸急促、皮疹和神志改變等一系列臨床癥狀，嚴重者可引

起休克、DIC和多器官功能衰竭，死亡率較高。第十頁，共六十五頁，2022年，8月28日血流感染流行病學資料全球：1800萬病例美國：確診病例130萬歐洲和日本：確診病例190萬每年治療費用：167億美金－美國67億美金－歐洲導致死亡病種排名第十位每年導致大約40萬人死亡敗血癥在10年間增加了139％非心內ICU病區最常見的死亡病因在130萬病例中，有78萬例發生在ICU病區CritCareMed2001;29:1303-10殺手第十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日感染病原體統計數據兒童感染第十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日老年>70歲休克重大創傷昏迷既往抗生素史機械通氣留置導管免疫抑制藥物急性腎功能不全延長ICU時間血流感染易感因素第十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日病原體因素：超級細菌、耐藥菌株病人因素：基人礎疾病嚴重、免疫功能低下、傷口污染、內毒素和菌群移位等醫源性因素：*機體的天然屏醫療手段破壞障*鎮靜*各種侵入性鎮痛藥物對呼吸道感染的影響*抑酸劑*抗生素濫用操作境因環素：ICU長期滯留血流感染易感因素第十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日院內獲得性感染：入院48小時后，多由致病力強、耐藥的微生物引起

致病微生物：細菌（90％）、真菌、病毒、支原體、衣原體等ICU常見致病微生物：陽性球菌感染增加、真菌感染增多銅綠假單胞不動桿菌金葡菌真菌不同感染部位常見致病菌：尿路：大腸桿菌、腸球菌傷口：葡萄球菌、大腸桿菌呼吸系統；G-多見，近年球菌增多腹腔感染：多混有厭氧菌長期應用抗生素：真菌感染，念珠菌（白念）多見，近來曲霉菌等其它真菌感染增加血流感染常見病原體第十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日血流感染常見病原體感染源、感染途徑：外源性感染：交叉感染內源性感染：自身感染第十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日血流感染病原體流行病學資料革蘭氏陽性菌感染呈上升趨勢特別是葡萄球菌和腸球菌廣譜耐藥菌株（VRE、MRSA/MRSE、VISA/VRSA）真菌血癥呈上升趨勢（特別是假絲酵母菌）革蘭氏陰性菌感染沒有變化厭氧菌/混合感染呈下降趨勢分枝桿菌血癥呈上升趨勢兒科感染中凝固酶陰性葡萄球菌感染升高醫院獲得性感染升高第十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日第十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日ICU獲得性感染肺炎47%下呼吸道感染18%血流感染12%泌尿道感染18%其他5%歐洲ICU感染流行病學調查：

10038例ICU患者有4501例發生感染(44.8%)Spenceretal.ClinMicrobiolInf,1997,3:S21.第十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日內科ICU常見感染的部位心血管5%眼耳鼻喉3%肺炎30%皮膚軟組織3%血流16%尿路30%胃腸道5%下呼吸道6%RichardsM,etal.Epidemiology,prevalence,andsitesofinfectionsinintensivecareunits.SeminarsinRespiratoryandCriticalCareMedicine.2003;24(1):3-22第二十頁，共六十五頁，2022年，8月28日外科ICU常見感染的部位心血管4%眼耳鼻喉3%肺炎33%皮膚軟組織3%血流13%尿路18%胃腸道4%手術切口15%下呼吸道6%RichardsM,etal.Epidemiology,prevalence,andsitesofinfectionsinintensivecareunits.SeminarsinRespiratoryandCriticalCareMedicine.2003;24(1):3-22第二十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日ICU感染但ICU獲得的感染占所有醫院獲得性感染的45%ICU的醫院感染率比一般病房高5~10倍ICU的耐藥菌分離率高，感染難治……第二十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日血流感染診斷金標準

____正確的血培養血流感染診斷方法第二十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日PCT分子生物技術熒光原位雜交技術血流感染其他診斷方法第二十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日血培養查病原菌對診斷以下疾病很重要:-菌血癥、敗血癥、真菌血癥等

-感染性心內膜炎

-臨床不明原因感染

-假體植入后感染(人工關節、人工瓣膜)-脈管導管相關性菌血癥

-化膿性關節炎

-肺炎、腦炎-分枝桿菌感染……血培養檢測的意義第二十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日根據培養結果：選擇正確的抗感染治療方案

調整經驗治療方案

判斷感染性疾病的類型評價療效及預后正確采取感染控制措施是否隔離減少院內感染

血液及無菌體液是最有意義的病原學檢測標本。血培養檢測的意義第二十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日血液

腹腔液

腹膜透析液

滑液

……

血培養范圍—所有“無菌”體液標本胸腔液

腦脊液

心包液

導管液……

第二十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日傳統手工培養

不足：培養時間長；培養技術落后，陽性率低；結果判斷不易（溶血？渾濁？）；盲種等開放式操作容易污染；易漏檢和誤檢等；全自動化培養

全面解決手工培養的所有問題！！血培養診斷方法連續偵測、非浸入性檢測技術

（最大限度的降低污染機會和操控人員被感染可能性）

全自動血培養是診斷血流感染最先進的方法！第二十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日全自動血培養技術

與臨床的聯系第二十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日全自動血培養檢測原理第三十頁，共六十五頁，2022年，8月28日所有細菌呼吸產生能量有氧呼吸無氧呼吸產生不同量CO2

被“3D”

傳感膜捕捉發酵

細菌生長代謝與3D傳感膜第三十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日“3D”傳感技術“3D”傳感膜捕捉

三種代謝途徑產生CO2報陽性（避免漏檢）第三十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日該技術源于歐嘉隆公司，分為色原法和熒光法傳感技術，現分別為梅里埃公司和BD公司所持有；列入我國“863”計劃內項目；“好培養”公司是我國唯一全面掌握色原法和熒光法技術的公司；“3D”傳感技術第三十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日四川好培養生物工程有限公司簡介四川好培養生物工程有限公司是由留學英美等國的中外學子和國內資深專家共同創建的中外高新技術合作企業。注冊于四川雅安國家農業科技園，專業從事探針、傳感新技術與新材料在微生物領域的應用研究和產品開發。公司總部和研發中心設在成都高新區生命科技園，技術轉化與產品生產基地設在雅安國家農業科技園。第三十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日全自動3D血培養瓶系列色原法熒光法第三十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日優質的血培養瓶除能提高檢出率外，還能給采血、運送、實驗室人員提供足夠的安全防護！至少包括以下要素：“真正”的3D傳感膜，全面捕捉CO2

，避免漏檢；“全封閉”式采血、運送及培養設計，保護醫護人員自身安全；優質富含生長因子的培養基；精確配比的瓶內氣體環境；臨床使用便捷，保存方便、材質優良、輕便不碎、便于開蓋操作的瓶體設計；全面中和抗生素等影響細菌生長的毒素，提高檢出率；優質血培養瓶六要素第三十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日優質血培養瓶要素之一

真正“3D”傳感膜，符合歐盟技術質量標準！第三十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日根據“血培養安全防護”要求：

血培養中的病原菌可能通過呼吸道或直接接觸污染操作人員、實驗室人員的皮膚、眼或者粘膜引起感染……有實驗室獲得感染的風險……優質血培養瓶要素之二暴露的穿刺點解決辦法？第三十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日專利ZL201320313947.9

安全蓋

密封環取下安全蓋消毒內膠塞揮干后采血蓋上安全蓋

送檢、培養注意：透明的安全頭蓋不要扔，采血完后全程蓋上！優質血培養瓶要素之二解決辦法：安全頭蓋第三十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日優質培養基按“細胞培養”要求配制；無“抗”優質動物原料；

富含需氧菌、厭氧菌、真菌

生長因子；優質血培養瓶要素之三第四十頁，共六十五頁，2022年，8月28日精確配比的瓶內氣體環境

需氧瓶：10%CO2+90%O2厭氧瓶：10%CO2+90%N2

優質血培養瓶要素之四第四十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日優質血培養瓶要素之五臨床使用便捷性室溫保存，穩定保質期長；FDA認證的醫藥高分子材質瓶體，高強度、高透明度、高氣密性、環保材質；“可旋蓋”設計，便于陽性瓶放氣及轉種；第四十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日

中抗需氧、厭氧、小兒瓶能全面中和吸附抗生素、補體等影響細菌生長的毒素……SPS:0.35%含量的SPS能中和血液中的補體，提高檢出率；吸附劑能有效吸附移除血液中及培養基中潛在抗菌素，如殘留抗生素、補體，溶菌酶，轉鐵蛋白，Gamma-球蛋白，過氧化物及高溫高壓消毒而產生的附產物。優質血培養瓶要素之六第四十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日采用優質的血培養瓶基礎規范的臨床標本采集(采集時間、

采血量、組合)關鍵提高檢出率第四十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日血培養臨床操作規范參考標準：中華人民共和國衛生行業標準

《臨床微生物實驗室血培養操作規范》20120424報批起草單位：中國科學院北京協和醫院衛生部臨檢中心香港醫院管理局瑪麗醫院第四十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日參考資料：

第四十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日當懷疑血流感染或膿毒癥時，應常規行血培養懷疑患者有血流感染的癥狀有：不明原因的發燒(≥38℃)或體溫過低(36℃)白細胞增多（＞10.0*109/L,特別是“核左移”時），粒細胞減少（＜3.0*109/L）休克，寒顫，僵直皮膚粘膜出血、昏迷、多器官衰竭、血壓降低C反應蛋白、降鈣素原（PCT）、1,3-D-葡萄糖升高嚴重的局部感染(腦膜炎，心內膜炎，肺炎，腎盂腎炎，腹部術后感染…)心率異常加快、呼吸頻率加快等生命體征改變≤采血指征第四十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日推薦在寒戰或高熱高峰前后采集用抗菌藥物之前采集采血時間03060時間(分鐘)體溫血培養采血時機細菌濃度第四十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日采血量采血量是影響結果的關鍵因素成人一份標本2個培養瓶（需氧＋厭氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采兩份標本，即40ml。兒童一般只需采集需氧瓶，在保證采集血量＜1％總血量下，一般為1－3ml新生兒0.5ml采血量不足時應優先保證需氧瓶，因臨床90％以上的感染為需氧菌或兼性需氧菌感染血液與培養基比為1:5~1:10

血培養物每增加一毫升，真性菌血癥成年人微生物的檢出率增加3％第四十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日采血量第五十頁，共六十五頁，2022年，8月28日注意：“雙瓶雙側”原則；每位患者采血最少2套，3套更好初發患者，絕不能只采1套標本，血量不足和只做一瓶的，很難解釋所得結果；

第五十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日采血順序血量充足患者：先采厭氧瓶，后采需氧瓶血量不足患者：先足量采需氧瓶，后采厭氧瓶采血量不足時應優先保證需氧瓶，因臨床90％以上的感染為需氧菌或兼性需氧菌感染第五十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日采血間隔時間同時或短時間內采集2－3套血培養，因為體內巨噬細胞吞噬系統會在15～30min內清除掉進入人體內的細菌可疑急性心內膜炎患者要立即取血作血培養，30分鐘內完成3套血培養的采集，采集后立即進行抗菌藥的經驗治療。如果24小時內報告陰性，則繼續采集2套血培養。可疑的亞急性心內膜炎患者每間隔30分鐘至1h采集1套，連續采集3套標本。如果24小時內報告陰性，則繼續采集2套血培養。

第五十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日血培養采集

消毒一步法：0.5%葡萄糖酸洗必泰作用30s（不適用于小于2個月的新生兒），或70%異丙醇消毒后自然干燥。三步法：75%酒精消毒待干30s—1-2%碘酊30s或10%碘伏60s，劃圈直徑3cm以上—75%酒精脫碘或75%酒精消毒62s，揮干不可接觸。采集組合（雙側雙瓶原則）混勻送檢第五十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日關于采血的一些問題1、血培養采血建議從外周靜脈采，不建議采動脈血，為什么？

——對檢出結果無明顯差異，但動脈穿刺危險性較大2、常規血培養不宜從靜脈導管或靜脈留置裝置取血，為什么？

——污染菌或定植菌的可能性較大，除非懷疑CRBSI3、如果需要從導管處取血，初段血或導管內的補液是否需要棄去？為什么？

——不能棄去，以便于判斷污染菌、定植菌或病原菌4、如果用注射器采血，采好后注入血培養瓶之前是否需要更換針頭？為什么？

——無需更換，對提升陽性率無統計差異，增加了針刺傷的幾率第五十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日血培養的采集：無菌操作洗手、皮膚充分消毒血培養對無菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它標本要高。所以要最先采集血培養標本。污染率的指標是<3%

降低血培養污染率第五十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日操作注意事項皮膚、內膠塞消毒要充分揮發干；使用前檢查培養瓶是否打開過，是否過期；正確采集血量后，混勻；及時送檢上機，切勿冷藏或冷凍；注意安全防護，避免獲得性感染；采血：不宜從靜脈導管或靜脈留置口取血；若從導管設施取血，必需同時靜脈取血，以求對比和解釋；不要棄去初段血，不用抗凝劑沖洗；不主張換針頭入瓶。第五十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日一般細菌培養5d真菌培養14d分枝桿菌42d特殊病例需與臨床溝通延長培養時間如新型隱球菌等需大于5d，多數酵母菌5d內可檢出。培養時間第五十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日陽