西安源森生物苦杏仁甙水提法最佳條件及含量測定研究苦杏仁甙是從中藥苦杏仁中分離的具有止咳作用的一種芳香族氰甙，可釋放少量氫氰酸而用于鎮咳平喘，藥用價值極高，且已被廣泛應用于醫藥、保健品中。西安源森生物實驗室為充分開發苦杏仁提取物，嚴格控制苦杏仁甙的質量，將在本次實驗中以水為提取溶劑，采用UV法分別測定不同料液比、浸泡時間及提取時間條件下提取的苦杏仁甙含量。本次實驗以純度大于99%的苦杏仁甙為對照品，含量測定波長291nm.一、西安源森生物苦杏仁甙水提實驗材料與方法西安源森生物本次實驗儀器旋轉蒸發器RSE-52AA；紫外分光光度計UV-3010；SHB-111循環水式從用真空泵。材料與試劑新疆小白杏杏仁；苦杏仁甙標準品(純度大于99%)；石油醚、甲醇(均為分析純)、去離子水。方法西安源森生物苦杏仁甙提取方法精密稱取一定量經粉碎機粉碎并過篩的苦杏仁一加入適量石油醚在室溫下震蕩浸提24h

一過濾一濾渣用石油醚清洗后揮干一稱重一得到去油杏仁粉一將杏仁粉過100目篩后備用。精密稱取杏仁粉1.5g，放入磨口三角瓶中，用定量的水浸泡提取一過濾一收取濾液一濃縮一定容至50ml容量瓶中一搖勻得苦杏仁甙提取液。分析方法苦杏仁甙的紫外吸收光譜以甲醇為溶劑配制苦杏仁甙標準溶液(0.1mg/ml)—置1cm石英小池一放在紫外分光光度計上一選擇200?300nm波長范圍測定吸收A值，并以甲醇作空白記錄其紫外吸收光譜。如圖1所示：〔Li\(I.1(1-八(I.2S-y\TOC\o"1-5"\h\z心L f?—0|。 25(1 3(KiX(部圖1 苦杏仁鼠在甲醉溶液中的紫外吸收光譜I;ll2.I UV'Ab-sorplli?[]specLrutnn「hli] "lin苦杏仁甙于波長219nm處出現最大吸收峰，因此確定檢測波長為219nm。標準曲線的繪制精密稱取經105°。干燥至恒重的苦杏仁甙標準品5mg一甲醇溶解定容至50ml—制得0.1mg/ml苦杏仁甙標準溶液。準確移取標準溶液1、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml，用甲醇分別定容至10ml，得到濃度為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10mg/ml的系列標準溶液。以甲醇溶液做參比，分別放入1cm石英池內，在219波長處分別測定其吸光度，結果見表1：懸1 用光度勺苦香仁武深厘的關幣TubleIRrlnLiciruhiph心n-nMmr'limcymJiimygdjilLi'cErniLruLinn、停件濃很rg.iij unin遂11橢not_i：oa, o.ds口的i.d咀it啜 nftil'。J削 HITS0.24(1 1「顫 (1一簡0 0.少、』.461 。蕓：1h葛以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為A=505679C+0.0141，相關系數r=0.9996，見圖2：濃度5眄圖2 苫杏仁試標準曲線Fig.2 Th七standardcurveoflleuylz-l!ilIl□經查檢驗相關系數的臨界值表得臨界相關系數r(99.9%，n⑵=0.872<r，說明苦杏仁甙濃度在0.01?0.10mg/ml范圍內。在波長219nm處測其吸光度值與濃度呈良好的線性關系，可按標準曲線法進行定量分析。供試液制備精密移取一定量苦杏仁甙提取液一水浴加熱濃縮至干一冷卻一甲醇溶解定容至10ml容量瓶中一搖勻，作為供試液，備用。供試液的測定將供試液放入1cm石英池內，用甲醇溶液做參比，在219波長處分別測定其吸光度，重復3次，根據回歸方程計算溶液濃度，進而計算出苦杏仁甙含量。測得新疆小白杏杏仁中苦杏仁甙含量為3.084%。精密度實驗用苦杏仁甙對照品溶液(0.5mg/ml)于一日內在219nm波長下重復測量吸光值6次，得日內精密度，RSD=0.4089%，n=6；用同一份溶液連續測量6日，得日間精密度，RSD=0.4978%，n=6。重現性實驗精密稱取經去油處理后并過100目篩的杏仁粉6份，每份1.5g，精密移取0.5ml經提取、定容后的樣品測定液，用甲醇定容至10ml容量瓶，在219nm波長下測量吸光度A，計算RSD=0.2940%，n=6。穩定性實驗用同一份杏仁提取液放置48h，分別于以下時間0.5、1、2、4、8、12、24、36、48h測定其吸光度，計算RSD=0.3565%，n=9。實驗結果表明，在實驗條件下，苦杏仁甙供試液的吸光度在48h內基本保持不變。回收率實驗取已知苦杏仁甙含量的樣品，共6份，每份約1.5g,分別加入苦杏仁甙對照品，按樣品測定液的制備項下提取、定容后，精密移取0.5ml用甲醇二次定容至10ml容量瓶，并在219nm波長下測定苦杏仁甙含量，計算平均回收率，結果見表2。表2回收率實驗結果=Pliib-lc2.』Kcsuhsofrccuvcryi?xpcrui]-e[]L(□=h)項樣品含呈血g)標準品加入量g)回收量魄)回收率平K回收率颶)RSI.1傀)L80.5025.朽THfi.3968(i,&SI8Z11899.985HL.5.776Hfi.盤1III瀉100^4580.97491H(i,協小柘時[敦158(13576JC786屈，10*1明79.981日1時板R171(4.盛二、西安源森生物苦杏仁甙水提實驗結果與分析在苦杏仁甙的提取工藝中，諸多因素影響苦杏仁甙的提取得率，經初步實驗選定料液比、浸泡時間、提取時間為主要因素，分別對以上因素做單因素試驗。西安源森生物苦杏仁甙水提實驗單因素試驗結果1.料液比對苦杏仁甙提取得率的影響I.8 1 1 1 1 11:1l：b[:Sl：L(il：L：l：ll料成比(的1)圖3 料;液比對保取得率的影詢KigJEffixLofsolid-liquidonyield浸泡時間為30min，提取時間為15min，料液比(g:ml)分別為1:4、1:6、1:8、1:10、1:12、1:14時，其提取效果如上圖圖3所示。由圖3可以看出，苦杏仁甙的提取得率與料液比有關。當料液比為1:10時苦杏仁甙的提取得率(2.971%)要比料液比為1:4時的提取得率(2.227%)高0.744%。這是因為隨著水量增加，會降低水中苦杏仁甙的濃度，增加苦杏仁甙與水的接觸面，從而使苦杏仁甙的溶解率增大，但當料液比大于1:10時，苦杏仁甙的一次浸提率趨于穩定，即一定比例的水已將有效成分基本溶出完全。故從節約溶劑量和降低后續工序的成本等方面綜合考慮，選擇料液比為1:10。浸泡時間對苦杏仁甙提取得率的影響料液比(g:ml)為1:10，提取時間為15min，浸泡時間分別為0、10、20、30、40、50min時，其提取效果如圖4所示。

Fig4浸泡時fnUi.iiFig4浸泡時fnUi.iii：1浸泡時間對提取得率的影響Lifleetof河蟲linjc煩］yield由圖4可以看出，用95^以上的沸水直接提取苦杏仁甙時的提取得率(2.577%)比用常溫水浸泡10min后提取的提取得率(2.717%)要高出0.140%，這可能是因為在一定時間內沸水更容易使杏仁中的苦杏仁甙溶出，但隨著浸泡時間的增加，苦杏仁甙在常溫水中的溶解率逐漸增高，直至浸泡30min時，溶解率達到最高，之后溶解率趨于穩定，提取得率也不在增加。提取時間對苦杏仁甙提取得率的影響料液比(g:ml)為1:10，浸泡時間為15min，提取時間分別為0、10、20、30、40、50min時，其提取效果如圖5所示。提抵時間m提取時間對提取得率的影響提抵時間m提取時間對提取得率的影響Li11cc[ofCKlnilLLtuu訃【】yield由圖5可知，苦杏仁中苦杏仁甙的提取得率在5min時較低，僅為2.197%,5?20min范圍內苦杏仁甙得率隨提取時間的延長而明顯提高，當提取時間20min時，提取得率達到最高值(2.983%)。當提取時間在20min以上時，提取效果隨時間的增加有所下降，這是因為在高溫下提取，時間過長部分杏仁蛋白變性，使得苦杏仁甙不易溶入水中，而且長時間加熱也會使部分苦杏仁甙被破壞，提取得率下降，故從效益考慮，確定浸提時間為20min最佳。西安源森生物實驗室苦杏仁甙水提正交試驗設計在單因素試驗的基礎上，為了考察多因素的綜合效應，選擇料液比、浸泡時間、提取時間為考察因素，以測得的杏仁中苦杏仁甙含量為考察指標，每個因素選3個水平，選用L9(34)

正交表對蘆筍中總黃酮提取工藝進行研究，以確定較佳的工藝條件。各因素的試驗安排及苦杏仁甙的提取得率結果見表3：表3 正交試技設計及試管數據〔完全隨機模型)Table3 Designandd-ataoforthogon.a1tcsL(toiallyrandommodel)因素料液比浸泡時問提收時間試撿窒列提h谷率Gnin)Gnin)Au\AHC1.1WILSILU(DIL999二iM：制K〔iiL：二L7L3i&泗3I,7&812'：1:[(i)I]32.HKK5:J3IIE16J3LL2,0693(1:LJ)I3L：I.873S3I3二(iKl933I2.LI3以S.958b.[(idb.[兄H.皈i口1b,細b.173b.E4UB,IE￡III6.[(KiH.(KKi6.5S5H.IKdKiL986二d5S匕SI上舊K2工的1匕0602.201了,(i：581、」二(i33上(KKiL.HfiJ二(63R(IIQH(i,0(i(>(|,339HMl根據表3中的數據進行方差分析，結果見表4。表目 正交設計方差分析表〔完全隨機模型：Tublc4 1b-cLablcof llcillIysis財f 口目汀訂汩變異來源平方刑「1由度均5F顯著水平第l列0.01747(I,ILB&l&i0.07773第2列(i.ddtil1(i.003221.37619(i.iHtitu第3列(i.l?3l1(1.08657117.57(U(I.。的|3第1列泉(UKILI7(1.(i(i[i71誤，.?一0.00150(1.(i(i[i71總叫15653注：此正交試蚣方差分析是用。性數據姓理軟件所做?當顯著水平值<0.05時為概顯蓍.0.1V顯著水平值<0.5時為較晶著.顯著水平A。.1時為不顯著M表示空列）n由表4可知，因素C（提取時間）影響極顯著，因素A（料液比）較顯著，因素B（浸泡時間）不顯著。各因素對杏仁中苦杏仁甙水提工藝的影響大小次序為：提取時間〉料液比〉浸泡時間；綜合各因素K值并直觀比較，得出杏仁中苦杏仁甙水提工藝理論上的最佳工藝條件為A2B2C2,即提取時間為20min，料液比為1:10，浸泡時間時間為30min。（三）提取次數對苦杏仁甙提取得率的影響選用正交試驗所得最佳工藝條件，分別提取1、2、3、4次，提取效果如圖6所示二［I—— _I———IL3I提取次數勒圖6 提取次數對提取得率的影響Lffe-uiofuxinii yi-eld由圖6可知，提取次數越多，提取得率越高。但是提取2次與3次所得到的苦杏仁甙量差別不大，可見提取2次后苦杏仁中苦杏仁甙已基本被提取完全，再增加提取次數，提取率無顯著增加。三、西安源森生物苦杏仁甙水提工藝實驗結論（一） 以純度大于99%的苦杏仁甙為標準品，采用紫外分光光度法，在波長為219nm處測定杏仁中苦杏仁甙的含量，準確度與硝酸銀滴定法基本一致。本法不僅穩定，靈敏度高，方法簡便，而且節約測定時間和試劑，為測定杏仁中苦杏仁甙的含量提供了良好的