犐犆犛６５．０２０．９９

犅２０

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

犖犢／犜６７５—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)

大豆定性犘犆犚方法

犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犵犲狀犲狋犻犮犪犾犾狔犿狅犱犻犳犻犲犱狆犾犪狀狋狅狉犵犪狀犻狊犿狊犪狀犱犱犲狉犻狏犲犱

狆狉狅犱狌犮狋狊—犙狌犪犾犻狋犪狋犻狏犲犘犆犚犿犲狋犺狅犱狊犳狅狉狊狅狔犫犲犪狀狊

２００３０４０１發(fā)布２００３０５１５實(shí)施

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布

書(shū)

中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)

大豆定性犘犆犚方法

ＮＹ／Ｔ６７５—２００３

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版

北京復(fù)興門(mén)外三里河北街１６號(hào)

郵政編碼：１０００４５

電話：６８５２３９４６６８５１７５４８

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社秦皇島印刷廠印刷

新華書(shū)店北京發(fā)行所發(fā)行各地新華書(shū)店經(jīng)售

開(kāi)本８８０×１２３０１／１６印張１／２字?jǐn)?shù)１０千字

２００３年５月第一版２００３年５月第一次印刷

印數(shù)１－１０００

書(shū)號(hào)：１５５０６６·２１５１２３

網(wǎng)址ｗｗｗ．ｂｚｃｂｓ．ｃｏｍ

版權(quán)專有侵權(quán)必究

舉報(bào)電話：（０１０）６８５３３５３３

書(shū)

犖犢／犜６７５—２００３

前言

本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部科技教育司提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院、中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)所、農(nóng)業(yè)部科技發(fā)展

中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：羅云波、黃昆侖、張大兵、賈士榮、彭于發(fā)、金蕪軍、李寧、汪其懷。

本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。

Ⅰ

書(shū)

犖犢／犜６７５—２００３

轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)大豆定性犘犆犚方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了轉(zhuǎn)基因大豆及其產(chǎn)品的定性ＰＣＲ檢測(cè)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆及其產(chǎn)品、轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大豆及其產(chǎn)品、轉(zhuǎn)基因高油酸大豆及

其產(chǎn)品，包括大豆種子、大豆、豆粕、大豆粉、大豆油及其他大豆制品中轉(zhuǎn)基因成分的定性ＰＣＲ檢測(cè)。

２規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適合于本標(biāo)準(zhǔn)。

ＮＹ／Ｔ６７２轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)通用要求

ＮＹ／Ｔ６７４轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)ＤＮＡ提取和純化

３原理

針對(duì)轉(zhuǎn)基因抗草甘膦大豆（ＧＴＳ４０３２）含有的犆犪犕犞３５犛啟動(dòng)子、狀狅狊終止子、矮牽牛花的犆犜犘４、

犆狆４犲狆狊狆狊基因以及大豆內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因犾犲犮狋犻狀，設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，以檢測(cè)試樣中是否含有轉(zhuǎn)

基因抗草甘膦大豆的成分。轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大豆和轉(zhuǎn)基因高油酸大豆含有共同的元件犆犪犕犞３５犛啟動(dòng)

子基因以及內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因犾犲犮狋犻狀，用上述的引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增以檢測(cè)試樣中是否含有轉(zhuǎn)基因抗草丁膦大

豆和轉(zhuǎn)基因高油酸大豆的成分。

４試劑與材料

除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用分析純?cè)噭慌渲坪玫娜芤航?jīng)高溫滅菌后使用。

４．１各１０ｍｍｏｌ／Ｌ的四種脫氧核糖核苷酸（ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＴＴＰ）混合溶液。

４．２１０ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉８０ｇ，先用１６０ｍＬ水溶解后，再加水定容到２００ｍＬ。

４．３５００ｍｍｏｌ／Ｌ乙二胺四乙酸二鈉鹽（ＥＤＴＡ）溶液：稱取乙二胺四乙酸二鈉１８．６ｇ，加入７０ｍＬ水

中，再加入１０ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液，加熱溶解后，冷卻至室溫，再用１０ｍｏｌ／Ｌ氫氧化鈉溶液調(diào)ｐＨ至

８．０，用水定容到１００ｍＬ，在１０３．４ｋＰａ滅菌２０ｍｉｎ。

４．４５０×ＴＡＥ緩沖液：稱取Ｔｒｉｓ２４２．２ｇ，先用３００ｍＬ水加熱攪拌溶解后，加１００ｍＬ５００