SC9.11220B41NY中華人民共和國農業行業標準NY/T556-2002雞傳染性喉氣管炎診斷技術Diagnostictechniquesforavianinfectiousiaryngotracheitis2002-08-27發布2002-12-01實施中華人民共和國農業部發布

NY/T556—2002雞傳染性喉氣管炎是雞的重要疫病之，世界動物衛生組織World（rganizationforAnimalHealth(英）fficeInternationaldesEpizooties(法）,IE將本病定為B類動物疾病，我國定為二類動物疫病。本標準主要參照（)E推薦的雞傳染性喉氣管炎(IL.T)診斷方法制定。本標準的附錄八、附錄3為規范性附錄本標準由農業部畜收售醫局提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：農業部動物檢疫所。本標準主要起草人：范根成、王永玲、劉相蛾、王紅。

NY/T556-2002雞傳染性喉氣管炎診斷技術1范圓本標準規定了雞傳染性喉氣管炎病毒分離及瓊脂凝膠免疫擴散試驗的技術要求。本標準規定的病毒分離技術，適用于本病的確診。瓊脂凝膠免疫擴散試驗，適用于傳染性喉氣管炎的血清學診斷及用傳染性喉氣管炎疫苗免疫后的抗體檢測。喜分離鑒定技術2.1材料準備2.1.1病料的準備2.1.1.1活體采樣：用滅菌棉執子伸入口咽或氣管采集分泌物，放人含青露素4000IU/ml.鏈猴素4000g/mL的無菌生理鹽水中。也可用棉拔子刮取眼分泌物，處理方法同上。2.1.1.2尸體采樣：無菌采取病死雞喉頭和氣管，放人尤菌的平血或燒杯中.飾封，2.1.2樣品的運送采集的樣品應立即放人4℃冰箱保存.24h內送到實驗室；不能在24h內送到實驗室時，應將所采樣品冷凍保存和運輸、2.1.3樣品處理2.1.3.1收到棉基子樣品后，先經凍融兩次，并充分振動、擠干棉執子，將樣品液經10000r/min離心10min.取上清液，加入青群素4000IU/ml..鏈莓素4000Pg/ml..于37℃作用30min.作為接種材料，2.1.3.2組織樣品：無的條件下將組織剪碎。按1：4加人生理鹽水后用研器研磨制成20%的勾漿懸浮液，再經10000/min離心10min,取上清液，加人青霉素40001U/ml鏈雅素40002g/ml.于37℃作用30mim，作為接種材料。2.2操作方法2.2.1樣品接種取經處理過的樣品，接種9～12日齡的雞胚絨毛尿囊膜。每枚0.2ml.,接種后的雞豚在37℃孵育每天觀察雞豚2次，連續觀察7d棄去24h內死亡的雞胚，24h～120h內死亡的雞胚，放4℃冷卻石觀察雞胚絨毛尿囊膜上有無痘斑形成：120h仍不死亡的雞胚，亦取出，置4C冷卻后，觀察雞胚絨毛尿套膜上有無痘斑形成。有痘斑者，取出雞胚絨毛尿囊膜和尿囊液，無菌研磨后，置－20℃凍存備用；無痘斑者，亦取出雞胚絨毛尿囊膜和尿囊液，無菌研磨，反復凍融，離心后，接種9～12日齡的雞胚絨毛尿囊膜盲傳。如此盲傳3代以上，如仍無病變·則判為雞傳染性喉氣管炎陰性。2.2.2病毒鑒定病毒分離物的鑒定：用雞傳染性喉氣管炎標準陽性血清(效價在1：32以上)和標準陰性血清與分離物作雞胚中和試驗，固定血清，稀釋病毒法中和試驗操作方法。血清處理：將傳染性喉氣管炎標準陽性血清和標準陰