關于高中生物___檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質第一頁，共三十頁，2022年，8月28日實驗：檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質實驗原理：某些化學試劑能夠使生物組織中的有關有機化合物產生特定的顏色反應。化學試劑+有機化合物→特定的顏色①還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀②脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液→橘黃色（或紅色）③蛋白質+雙縮脲試劑→紫色④淀粉+碘→藍色水浴加熱第二頁，共三十頁，2022年，8月28日斐林試劑與雙縮脲試劑的比較斐林試劑用的是甲液和乙液，須現配現用，混合均勻，水浴加熱。雙縮脲試劑用的是A液和B液，先加A液，后滴B液，不用水浴加熱。第三頁，共三十頁，2022年，8月28日第四頁，共三十頁，2022年，8月28日雙縮脲反應：含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物與堿性硫酸銅作用，生成藍紫色的復合物第五頁，共三十頁，2022年，8月28日斐林試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和CuSO4組成，但二者有如下三點不同：①溶液濃度不同。斐林試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.05g/mL；雙縮脲試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.01g/mL。②使用原理不同。斐林試劑實質是新配制的Cu(OH)2溶液；雙縮脲試劑實質是在堿性環境下的Cu2＋。③使用方法不同。使用斐林試劑時，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。第六頁，共三十頁，2022年，8月28日第七頁，共三十頁，2022年，8月28日一、可溶性還原糖的檢測：（1）原理：還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀。（2）選材：蘋果、梨、白蘿卜。含糖量較高，顏色為白色或近于白色的植物組織。（3）檢測過程：水浴加熱振蕩混勻50～65℃水浴加熱2min2mL組織樣液剛配制的斐林試劑2mL呈現淺藍色變成磚紅色（Cu2O）還原糖：含有半縮醛羥基的糖類，主要是葡萄糖、果糖和麥芽糖。蔗糖、淀粉和纖維素屬于非還原糖。第八頁，共三十頁，2022年，8月28日當質量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液與質量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍色的Cu（OH）2懸濁液。Cu（OH）2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀。因此，利用該反應，可證明樣液中含可溶性還原糖。R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O甲液乙液等量混合，現用現配，切不可分開滴加，或者久置后才用。第九頁，共三十頁，2022年，8月28日制備組織樣液梨或蘋果研磨取5g，放入研缽中洗凈、去皮、切塊過濾濾液（用單層紗布）顯色反應向試管中加入2ml組織樣液向試管中加入2ml新配制的斐林試劑或本尼迪特試劑振蕩混勻50～65℃水浴加熱2min觀察現象觀察溶液顏色變化：淺藍色→棕色→磚紅色結論：生成磚紅色沉淀，說明梨或蘋果中含有還原糖。磚紅色的糖（還原糖）非（斐林試劑）常好吃第十頁，共三十頁，2022年，8月28日2ml組織樣液1ml新配制的斐林試劑5065℃水浴加熱約2min觀察顏色變化磚紅色淺藍色棕色【斐林試劑】：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液，使用前等體積混合均勻（生成淺藍色的Cu（OH）2懸濁液），現配現用（時間一長，Cu（OH）2沉淀在溶液底部無法發生反應。且需要水浴加熱。第十一頁，共三十頁，2022年，8月28日還原糖的檢測結果斐林試劑與可溶性還原糖在水浴熱的條件下，生成磚紅色的Cu2O沉淀。-CHO+Cu(OH)2懸濁液-COOH+Cu2O↓（磚紅色）第十二頁，共三十頁，2022年，8月28日二、脂肪的檢測（1）選材：經浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測過程：制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央制成臨時裝片：滴12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加23滴蘇丹Ⅲ染液，染色23min洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分數為50%的酒精12滴鏡檢觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。蘇三（蘇丹Ⅲ）送了我一個橘黃色的胭脂（脂肪）切片：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片。視野中有橘黃色顆粒第十三頁，共三十頁，2022年，8月28日橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液橘黃色（或紅色）第十四頁，共三十頁，2022年，8月28日第十五頁，共三十頁，2022年，8月28日注意事項：（1）若用花生種子作實驗材料，必須提前浸泡3～4小時，浸泡時間短了，不容易切片，浸泡時間過長，則組織太軟，切下的薄片不易成形，切片要盡可能的薄。（2）染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色（酒精能溶解蘇丹Ⅲ），染色和洗浮色時間不宜過長。第十六頁，共三十頁，2022年，8月28日三、蛋白質的檢測：（1）原理：蛋白質+雙縮脲試劑紫色絡合物（2）選材：黃豆、雞蛋清（稀釋）、牛奶、豆漿（3）檢測過程：2ml組織樣液2ml雙縮脲試劑A液，搖勻3-4滴雙縮脲試劑B液，搖勻觀察顏色變化紫色雙（雙縮脲）子（紫色）彈（蛋白質）第十七頁，共三十頁，2022年，8月28日

將尿素加熱，兩分子尿素放出一分子氨而縮合成雙縮脲。反應式為:雙縮脲（H2NOC-NH-CONH2）在堿性環境（NaOH）中能和Cu2+作用生成紫色的絡化物，這個反應叫做雙縮脲反應。蛋白質分子中含有的肽鍵結構與雙縮脲結構相似，因此，蛋白質也可與雙縮脲試劑發生顏色反應。雙縮脲≠雙縮脲試劑第十八頁，共三十頁，2022年，8月28日無色紫色（創造堿性條件）（提供Cu2+）雙縮脲試劑B3-4滴雙縮脲試劑A2mL2mL組織樣液在堿性條件（NaOH）下，蛋白質中的肽鍵（—NH—CO—）與Cu2＋作用生生紫色絡合物。因此，操作時，應先加A再加B，且A多B少，如果B過量，Cu2＋的藍色就會遮蓋生成的紫色。第十九頁，共三十頁，2022年，8月28日制備組織樣液黃豆組織樣液（或雞蛋清稀釋液）黃豆浸泡研磨過濾濾液去皮、切片蛋清液雞蛋雞蛋清稀釋液稀釋顯色反應向試管中注入2ml組織樣液向試管中注入2ml雙縮脲試劑A加入3-4滴雙縮脲試劑B觀察現象觀察顏色變化：無→紫色結論：加入雙縮脲試劑A后，顏色呈現為無色，加入B后，變為紫色，說明雞蛋清中有蛋白質存在。第二十頁，共三十頁，2022年，8月28日蛋白質的檢測結果第二十一頁，共三十頁，2022年，8月28日注意事項：（1）如果用雞蛋清作為材料，則必須進行充分稀釋，否則反應后的產物會粘固在試管內壁上，使反應不徹底，且試管不易洗刷干凈。（2）【雙縮脲試劑】：A液：0.1g/mLNaOH，B液：0.01g/mLCuSO4。先加A液后加B液，且B不能過量，不需要加熱。（3）過量的雙縮脲試劑B會與試劑A反應，使溶液呈藍色，而掩蓋生成的紫色。（4）先加入A液2ml，搖勻；再加入B液3-4滴，搖勻。第二十二頁，共三十頁，2022年，8月28日四、淀粉的檢測：（2）選材：馬鈴薯勻漿（1）原理：淀粉+碘藍色（3）檢測過程：2ml組織樣液2滴碘液觀察顏色變化藍色藍（藍色）點（淀粉）點（碘）第二十三頁，共三十頁，2022年，8月28日制備組織樣液馬鈴薯塊莖研磨取5g，放入研缽中洗凈、去皮、切塊過濾濾液顯色反應向試管中注入2ml組織樣液加入5滴碘-碘化鉀觀察現象觀察溶液顏色變化：無色→藍色結論：溶液變藍，說明馬鈴薯組織中有淀粉存在。第二十四頁，共三十頁，2022年，8月28日蘋果、梨、白蘿卜斐林試劑磚紅色沉淀花生種子蘇丹Ⅲ染液蘇丹Ⅳ染液橘黃色紅色豆漿、牛奶、雞蛋清雙縮脲試劑紫色面粉、馬鈴薯勻漿液碘液藍色注：鑒定還原糖需加熱；脂肪的鑒定不一定要用顯微鏡，要觀察脂肪顆粒，則必須用顯微鏡。第二十五頁，共三十頁，2022年，8月28日五、觀察DNA、RNA在細胞中的分布實驗原理：（1）DNA主要分布在細胞核內，RNA大部分存在于細胞質中。（2）甲基綠和吡羅紅兩種染色劑對DNA和RNA的親和力不同，甲基綠使DNA呈現綠色，吡羅紅使RNA呈現紅色。（3）利用甲基綠、吡羅紅混合染色劑將細胞染色，可以顯示DNA和RNA在細胞中的分布。（4） 鹽酸能夠改變細胞膜的通透性，加速染色劑進入細胞，同時使染色體中的DNA和蛋白質分離，有利于DNA和染色劑結合。 甲基綠使DNA呈現綠色，吡羅紅使RNA呈現紅色，通過觀察兩種顏色出現的部位來判斷DNA和RNA在細胞中的分布。第二十六頁，共三十頁，2022年，8月28日方法步驟：（1）取材和制片在潔凈的載玻片上滴1滴0.9%NaCl溶液用消毒牙簽刮口腔內側壁后涂抹在液滴上將涂有口腔上皮細胞的載玻片在酒精燈上烘干（2）水解：將烘干的載玻片放入盛有30mL8%鹽酸的小燒杯中，30℃水浴保溫5min（3）沖洗涂片：用蒸餾水的緩水流沖洗載玻片10秒（4）染色吸水紙吸去載玻片上的水分在載玻片上滴加兩滴2滴用吡羅紅，甲基綠染色劑，染色5分鐘吸去多余的染色劑，蓋上蓋玻片（5）觀察：先低倍鏡：選染色均勻，色澤淺的區域，移到視野中央。后高倍鏡：觀察細胞核和細胞質的染色情況。第二十七頁，共三十頁，2022年，8月28日0.9%生理鹽水？人口腔上皮細胞8%鹽酸？蒸餾水30℃水浴吡羅紅甲基綠染色劑取材水解沖洗染色觀察第二十八頁，共三十頁，2022年，8月28日思考與討論：（1）9%Nacl