自建檢測系統及

分析性能評價河北醫科大學第四醫院高社軍行業要求國家衛生行政管理部門，《醫療機構臨床實驗室管理辦法》，第三章24條：20.1是否對檢測系統(儀器設備、試劑、校準品)進行了有效性的評價？包括對準確度、精密度、分析測量范圍、參考范圍、分析干擾等的評估。認可要求ISO15189認可要求5.5檢驗過程5.5.1檢驗程序的選擇、驗證和確認5.5.1.1總則5.5.1.2檢驗程序驗證在常規應用前，應由實驗室對未加修改而使用的已確認的檢驗程序進行獨立驗證。實驗室應從制造商或方法開發者獲得相關信息，以確定檢驗程序的性能特征。實驗室進行的獨立驗證，應通過獲取客觀證據（以性能特征形式）證實檢驗程序的性能與其聲明相符。驗證過程證實的檢驗程序的性能指標，應與檢驗結果的預期用途相關。ISO15189認可要求5.5檢驗過程5.5.1檢驗程序的選擇、驗證和確認5.5.1.1總則5.5.1.2檢驗程序驗證

5.5.1.3檢驗程序的確認實驗室應對以下來源的檢驗程序進行確認：a)非標準方法；b)實驗室設計或制定的方法；c)超出預定范圍使用的標準方法；d)修改過的確認方法。概念評估（Evaluation）：實驗室通過實驗，測量新方法的分析性能。確認（Validation）：通過提供客觀證據對特定的預期用途或應用要求已得到滿足的認定。驗證（Verification）：提供客觀證據對規定要求得到滿足的認定。系統的確認和驗證檢測系統什么是檢測系統？完成一個項目檢測涉及的儀器、試劑、校準品、測定方法、質量控制、保養計劃等的（規定）組合。如果是手工操作，則還必須包括操作人員。檢測系統檢測系統分類：貝克曼LX20生化儀貝克曼的檢測試劑盒貝克曼的校準品葡萄糖氧化酶法貝克曼LX20生化儀羅氏的檢測試劑盒貝克曼的校準品葡萄糖氧化酶法標準檢測系統自建檢測系統兩個不同的檢測系統檢測系統的要素校準品試劑分析儀均值與真值相接近的程度偏倚(Bias)系統誤差重復測定結果之間接近的程度標準差SD，CV隨機誤差儀器主要技術性能驗證建立相關檔案記錄建立相關SOP并培訓、授權環境條件設備檔案

檢測系統支持文件設備檔案大型儀器設備登記表：儀器名稱、型號、序列號、購買時間、價格、附加說明、使用專業組等小型儀器設備登記表儀器和項目SOP儀器校驗行業標準

河北醫科大學第四醫院儀器校驗零點漂移吸光度準確度吸光度重復性雜散光吸光度線性試劑艙溫度樣本針攜帶污染……河北醫科大學第二醫院儀器校驗河北醫科大學第四醫院檢驗科試劑和校準品試劑三證試劑出入庫管理試劑開瓶時間試劑評價溯源性最準確可靠的結果就是：在參考實驗室,用國際公認的參考方法對新鮮的血清標本做出的值溯源性就是通過一條不間斷的比較鏈（方法學比較），使檢測結果或檢測標準的值能夠與規定的參考標準，通常是與國家標準或國際標準一致.一級校準品制造廠商在生產時所使用的校準品一級參考方法二級參考方法制造廠商所推薦的測定操作法二級校準品制造廠商在銷售時所使用的校準品制造廠商所常用的測定操作法用戶的日常檢驗法日常樣品測定結果SI單位的定義不準確度的大小溯源的體系圖檢測系統性能評價的參考標準NCCLS(美國臨床實驗室標準化委員會)

－NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandardsCLSI(臨床實驗室標準化協會)

－ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute分析性能評價指標準確度精密度（NCCLSEP5）線性范圍（NCCLSEP6）參考區間（NCCLSC-28A)初步評價（NCCLSEP10）抗干擾能力（NCCLSEP7）基質效應（NCCLSEP14）定性實驗方法的評價（NCCLSEP-12P）比對及偏差（NCCLSEP9）EP5-A（臨床化學設備操作精密度評價核準指南）-EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices;ApprovedGuidelineEP6-P2(定量分析方法的線性評價：統計方法，提議指南)-EvaluationoftheLinearityofQuantitativeAnalyticalMethods:AStatisticalApproach;ProposedGuideline

EP7-P

(臨床化學干擾試驗；建議指南)-InterferenceTestinginClinicalChemistry;ProposedGuideline

EP10-A

(定量臨床實驗室方法的初步評價，核準指南)

-PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMethods;ApprovedGuideline

EP12-P

(用于定性實驗評價的用戶協議，提議指南)-UserProtocolforEvaluationofQualitativeTesterformance;ProposedGuideline精密度評價：EP5-A概念：精密度先做一個初步的批內精密度測定，即一個標本重復測定20次，計算出均值，標準差和變異系數。分別準備正常值血清和病理值血清，并分裝凍存。每天分別取出正常值血清和病理值血清各一支，室溫復溶、混勻待測。EP5-A2個標本每天測定2次(2次測定間隔不得少于2小時)，每次測定均作雙份，共測定20天。每次測定至少做一個質控。數據整理于精密度實驗方案表。離群點的檢查：“離群點”應棄去或重做。統計分析：數據錄入精密度實驗方案表后，按EP5-A文件中計算公式計算總精密度ST，批內標準差Swr，批間標準差Srr，日間標準差Sdd。精密度評價實驗-基本方法分析物:肌酐樣本:低/中/高值血清；HN1530/HE1532儀器:OlympusAU400試劑來源/批號:Lot12-1218P校準物來源/批號:RandoxCAL2351/Lot476UE以肌酐酶法試劑為例，驗證EP5-A2基本方法精密度評價實驗-基本方法天數(I)第一批Run1第二批Run2日均值XiXi11Xi12批均值Xi1Xi21Xi22批均值Xi212……20總均值

X

●●●數據記錄表格精密度評價實驗-基本方法肌酐酶法試劑精密度評價-低值血清μmol/l天數第一批第二批XiXi11Xi12Xi1Xi21Xi22Xi2181.079.980.580.780.880.880.6280.378.979.681.080.680.880.2380.079.679.880.281.380.880.3479.379.479.479.479.579.579.4579.279.979.680.078.979.579.5679.779.479.679.379.379.379.4778.178.478.378.178.078.178.2878.678.678.680.179.079.679.1979.180.079.681.080.080.580.01080.780.180.479.279.579.479.91178.478.878.681.481.181.379.91281.881.081.481.981.681.881.61381.179.980.582.981.382.181.31479.881.680.781.080.080.580.61580.079.579.879.480.179.879.81679.880.780.379.779.579.679.91780.381.180.779.479.979.780.21880.180.680.479.378.679.079.71978.278.278.278.678.678.678.42079.980.380.178.076.777.478.7總均值79.8精密度評價實驗-基本方法天數第一批第二批（第一批均數－第二批均數）2（每天均數-總均數）2（Xi11-Xi12）2（Xi21-Xi22）2（Xi1-Xi2）2（Xi●●-X●●●）211.210.010.090.6021.960.161.440.1430.161.210.900.2040.010.010.010.1850.491.210.010.1160.0900.060.1670.090.010.042.81801.210.900.5790.8110.900.04100.360.091.100.00110.160.097.020.01120.640.090.123.05131.442.562.562.17143.2410.040.60150.250.490.000.01160.810.040.420.01170.640.251.100.12180.250.491.960.0319000.162.04200.161.697.561.22求和12.7711.6126.4214.06（1）（2）（3）（4）精密度評價實驗-基本方法重復性

其中：I 總的運行天數（通常為20）j 為每日的批次（1或者2）Xij1

為第i日第j批第1次的結果Xij2 為第i日第j批第2次的結果=0.55精密度評價實驗-基本方法室內精密度評價

I ＝總的運行天數（有兩個批次）Xi1●

＝第i日第1批運行結果的均值Xi2● ＝第i日第2批運行結果的均值

=0.81精密度評價實驗-基本方法室內精密度評價

I ＝總的運行天數Xi●●

＝第i日所有結果的均值X

●●● ＝所有結果的均值

=0.86精密度評價實驗-基本方法室內精密度評價=0.642=0.712精密度評價實驗-基本方法室內精密度評價其中：

Sdd為日間標準差Srr為批間標準差Sr為重復性標準差（批內標準差）=1.11舉例-酶法肌酐精密度評價肌酐酶法試劑

精密度評價-低值血清μmol/l天數I20

批均值標準差A0.81

日均值標準差B0.86

總均值meanX

●●●

79.8

CV重復性RepeatabilitySr0.550.7%批間精密度Between-runSrr0.710.9%日間精密度Between-daySdd0.640.8%室內精密度Within-laboratoryST1.111.4%舉例-酶法肌酐精密度評價研發4度試劑精密度評價(μmol/l)SerumPrecisionHN1530HE1532Serum1Serum2Serum3NO.ofDataPoints8080808080Mean(μmol/l)128.3375.879.8184.1379.5Within-RunSD0.842.130.551.172.15CV%0.70.60.70.60.6Within-LaboratorySD1.343.531.111.924.17CV%1.00.91.41.01.1依據EP-5A2文件要求，測定試劑精密度臨床實驗室精密度驗證結果判定與廠家聲明的批內不精密度和室內不精密度比較與國家標準比較與CLIA’88推薦的允許總誤差比較實驗室自定標準線性評價：EP6-P2概念：線性范圍、可報告范圍、臨床可報告范圍將H和L樣品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H關系各自配制混合，形成系列評價樣品。一天內做兩次實驗，第一次實驗由低到高重復測定3次，第二次實驗由高到低重復測定3次，即每個實驗樣品做6次重復測定。綜合所有結果作統計學處理。EP6-P2依照稀釋關系，計算各實驗樣品的預期值。按實驗要求，每個樣品做6次重復測定，得6個實測值，它們和預期值形成6對數據。用直線回歸對6對數據進行統計，得直線回歸方程Y=bX+a，若b在0.97～1.03范圍內，a接近于0，則可直接判斷測定方法可報告范圍在實驗已涉及濃度。若不符合，可去除某點，縮小分析范圍作為真實的可報告范圍。準確度評價準確度：檢測結果與被測量物真值之間的一致程度。方法學比對：EP-9A（標準物質；標準方法比對；回收試驗）回收試驗室間質評準確度確認若采用某項目的Cal當樣品進行檢測，該校準品的檢測值與靶值間的差異，可認為該項目的不準確度。準確度確認回收實驗回收率%=回收濃度/加入濃度×100%

標準液體積加入濃度=標準液濃度×

基礎樣本體積+標準液體積

回收濃度=樣本最終測定濃度-基礎樣本濃度參考范圍參考范圍的建立：新分析物或新分析方法參考范圍的轉移與驗證：已獲得測量的、可靠性公認的分析物

項目參考范圍來源紅細胞計數(RBC)男：（4.00~5.50）×1012/L女：（3.50~5.00）×1012/L全國臨床檢驗操作規程（第二版），第8頁血紅蛋白(Hb)男：120~160g/L女：110~150g/L全國臨床檢驗操作規程（第二版），第8頁紅細胞比容(Hct)男：0.370~0.500女：0.350~0.450MCV(fl)男：79.0~101.0女：79.0~101.0MCH(pg)26.0~35.0MCHC(g/L)310~370RDW(%)11.5~14.5白細胞計數(WBC)男：（4.0~10.0）×109/L女：（4.0~10.0）×109/L河北省臨床檢驗管理與技術規程，第64頁我們的參考范圍從哪里來的？建立參考范圍的要點納入標準（供參考）

沒有影響檢測結果的生理指征無服用藥物或進行飲食治療發育正常，無器質性疾病

3個月內無輸血、手術史婦女不在妊娠期及哺乳期選取人數（隨機至少120個觀察對象）

確定參考范圍的最小樣本量檢測：統計分析：參考對象群體值的特定百分數（通常是95％）

非參數和參數分析：是否正態分布參考范圍的轉移和確認

使用相同類型的分析體系使用不同分析體系同一實驗室內從一個實驗室到另一個實驗室檢測對象相同的地理區域和相同的統計學總體

觀測對象及方法學是一致或可比的

基于已確立的有效參考范圍，轉移是可行、節約的參考范圍轉移拿來主義

通過調查評估轉移的可接受性，無需確認而進行轉移

檢測較小參考個體的樣本量（n＝20）評估確認轉移

檢測參考個體（n＝60）評估和確認轉移

三種基本方法轉移有前提對象的一致性方法的一致性不多于2個落在參考限值外確認有效3個以上結果落在參考限值之外重新取20個樣本不多于2個落在參考限值之外3個或更多的值落在限值外生物學特性不同建立參考范圍20個檢測值確認有效初步性能評價：EP10-AEP9-A（用患者樣本進行方法對比及偏差評估—批準指南）

-MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples;ApprovedGuideline

方法對比試驗

目的：方法對比試驗的主要目的是獲得候選方法的系統誤差的偏倚估計，即準確度的評估。方法應是參考方法或推薦方法,如該測定沒有參考方法或推薦方法，亦可以用公認的常規方法。但須具備:(1)比對試驗方法有更好的精密度。

(2)干擾影響已知。

(3)與試驗方法使用相同的計量單位。對比方法的選擇

應有足夠的時間熟悉所用的儀器、試驗方法、比較方法及比較方案。比對前的準備工作實驗標本的選擇1）收集新鮮的正常和異常的臨床標本,樣品大小至

少為40個標本。2）足夠寬的濃度范圍,各濃度應有合適的比例（部分項目見表1）。

注意：盡可能使50%的實驗標本分析物含量不在參考范圍內，分析物含量分布越寬越好。若不能及時測定需保存標本，應確保它們的穩定性。只能使用一種能符合兩個方法要求的保存條件，以免因條件不一引出新的變異。

項目A組B組C組D組E組

Glu(mg/dl)<50(10%)51～110(40%)111-150(30%)151-251(10%)251-SL(10%)BUN(mg/dl)<15(10%)12～25(40%)26-50(20%)51-100(20%)101-SL(10%)Cr(mg/dl)<1.0(20%)1.1～2.5(30%)2.6-5.0(20%)5.1-10(20%)10-SL(10%)Na(mmol/L)120～130(20%)131～140(40%)141-150(30%)151-160(10%)K(mmol/L)<3.0(20%)3～4.5(40%)4.5-6.0(30%)>6(10%)Cl(mol/L)80～95(30%)96～105(40%)106-120(30%)

TP(g/L)<50(10%)51～70(40%)71-90(40%)>90(10%)Alb(g/L)<30(10%)31～40(40%)41-50(40%)>50(10%)

GGT(U/L)0～NL(40%)NL～2NL(40%)2NL～4NL(10%)4NL～SL(10%)表1：部分項目濃度范圍建議注SL=可測范圍上限NL=正常范圍上限

1）每天測定8個標本,雙份測定時第一次按順序1,2……7,8,

第二次,8，7……2,1,共測5天。

２）整理數據成表2（以ALT測定為例）。實驗操作樣品實驗方法比較方法實驗方法比較方法

結果1結果2結果1結果2結果1-2（

DYi）

結果1-2（DXi）11415161511202221232235373235233575659561348082797623524524023224058678671173330313332...4015114815615036表2實驗方法與比較方法測定ALT結果比較結果處理方法內離群點的檢查方法間離群點的檢查作圖線性相關的目測檢查X取值范圍檢查線性回歸計算預期偏差和相對偏差結論方法內離群點的檢查1、絕對偏差界限的計算

X-對比儀器結果Y-實驗儀器結果

>4：離群點2、相對的絕對偏差界限的計算

>4：離群點方法間離群點的檢查1、絕對偏差界限計算

>4為離群點2、相對的絕對偏差界限計算

>4為離群點

離群點處理如果只有一個離群點，可將此樣品的全部數據(X、Y)進行刪除，繼續進行下面的分析。如果超過兩個以上的離群點，則需查找原因，如果僅僅是樣品的因素，則替換這些離群點數據或重新分析所有數據。1、對的散點圖

2、所有結果的散點圖

以每次測定的Y值為Y軸，雙份測定的X的均值為X軸3、偏差圖以每個樣本兩種儀器雙份測定的均值差(Yi一Xi)為Y軸；對比儀器每樣本雙份測定的均值(Xi)為x軸，以直線X=0為水平中線作圖4.偏差圖

以每個樣本兩種儀器每次測定的差(Yi一Xi)為Y軸；對比儀器每樣本雙份測定的均值(Xi)為X軸，以直線X=0為水平中線作圖

作為比較方法,理論上要求應該沒有誤差,但在臨床實驗室這是不可能達到的,EP9A文件指出,可用相關系數(r)來粗略估計X取值范圍是否足夠寬。r≥0.975(或者是r2≥0.95)則認為X范圍適合。用相關系數r的計算公式附注：如r<0.975,則使用部分個別差異法計算平均偏差。X